毛細管電泳儀重復性和均一性性能測試方法及分析

周 參

(公安部第一研究所 北京 102200)

毛細管電泳儀重復性和均一性性能測試方法及分析

周 參

(公安部第一研究所 北京 102200)

本文針對用于DNA檢測的毛細管電泳儀，設計了重復性及均一性測試方法，并對測試結果進行分析，結果顯示重復性測試相對標準方差小于1.6%，均一性標準方差小于1.65%，滿足DNA電泳需求。

毛細管電泳儀；重復性；均一性

毛細管電泳儀是自20世紀70年代以來在生物領域廣泛使用的分析儀器，由于毛細管電泳所需樣品量少、可以施加高壓進而縮短電泳時間、易于實現自動化、可以實現對批量樣品的分析等優點，毛細管電泳在生物高分子特別是DNA檢測方面發揮了巨大作用。本文以課題組自主研制的毛細管電泳儀為研究對象，對其電泳重復性和均一性進行了測試。

一、實驗試劑

LIZ500、甲酰胺、POP4膠、緩沖液、16通道毛細管陣列(均由ABI公司提供)。

二、實驗方法

1. 取5ul LIZ500與195ul甲酰胺混合，分裝到96孔板A1-A2行，每孔加入10ul樣品。

2. 將毛細管安裝到毛細管電泳儀上，毛細管兩端分別浸入到緩沖液中，并向毛細管中灌注POP4膠。

3. 采用電進樣方式將LIZ500引入毛細管通道中。

4. 毛細管電泳儀對LIZ500進行20次重復檢測，采集LIZ500各片段出峰時間，選取部分位點的數據對毛細管電泳儀重復性和均一性進行分析。

三、實驗結果及分析:

1. 重復性

選取毛細管陣列中的第1根毛細管作為研究對象，選取75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的20次電泳的出峰幀數進行分析，結果如圖1及圖2所示，第1根毛細管在20次電泳中，選取的每個DNA片段的出峰位置相對標準偏差小于1.6%，表明毛細管電泳儀重復性效果很好。

2. 均一性

對同一組電泳中16根毛細管中 75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的出峰幀數進行分析，結果如圖3及圖4所示，同一組電泳中，每根毛細管中選取的每個DNA片段的出峰位置相對標準偏差小于1.65%，表示毛細管電泳儀均一性效果很好。

四、總結

本文采用ABI的LIZ500試劑對毛細管電泳儀的重復性和均一性進行測試，重復性測試相對標準方差小于1.6%，均一性標準方差小于1.65%，低于儀器分析相對標準方差應在2.0%以下的要求，表明課題組自主研制的毛細管電泳儀能夠滿足重復性及均一性測試要求，可以對DNA片段進行分析。

圖1 重復性測試結果

圖2 重復性測試相對標準偏差

圖3 均一性測試結果

圖4 均一性測試相對標準偏差

[1]郭懷忠，畢開順，孫毓慶． 影響毛細管電泳分析結果重現性的因素及其控制[J]． 分析儀器， 2005，2: 42-45.