海鮮菇工廠化瓶栽優良菌株的篩選

黃亮+王玉+班立桐+楊紅澎+張利強+楊華

摘要：利用拮抗試驗和酯酶同工酶電泳試驗考察國內外常見的5個海鮮菇主栽品種（編號1～5分別對應的是菌株來源為日本、日本、市售、市售、福建三明真菌研究所），并對其進行出菇比較，以期篩選出適宜工廠化的優良菌株。結果表明，5種菌株間均有拮抗現象；酯酶同工酶試驗表明，這5種海鮮菇菌株可以分為4類，即2、3號為一類，1、4、5號各為一類。5種菌株瓶栽出菇后的農藝性狀差異較大，其中4號菌株菇形最好、叢高一致、菇蓋均一性最好，且子實體產量居第2，生物學轉化率達到77.5%；5號菌株菇形較好，子實體產量最高，生物學轉化率最高，為78.1%。因此可見，4號、5號菌株是適合工廠化瓶栽的海鮮菇菌株。

關鍵詞：海鮮菇；拮抗試驗；酯酶同工酶；出菇試驗；工廠化瓶栽；優良菌株

中圖分類號： S646.904 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2017）20-0135-03

海鮮菇（Hypsizygus marmoreus）別稱真姬菇、玉蕈等，其菇形優，質地脆，味道鮮，具有海蟹味，在日本被稱為“蟹味菇”，是一種藥食兩用的珍稀菌，深受廣大消費者喜愛[1-2]。海鮮菇中蛋白質含量高，且含有豐富的礦物質及多種維生素，在食用菌中有“金枝玉葉”之稱[3]。其中含有的大量必需氨基酸、各種維生素、粗纖維、木質素，長期食用能起到良好的保健和預防疾病的作用[4-5]。我國海鮮菇工廠化生產起步較晚，近幾年才出現瓶栽模式，對海鮮菇的研究不夠系統和深入，導致我國海鮮菇工廠化生產出來的蘑菇產量、質量都與國外水平先進的國家如日本、美國等相比還有很大的差距。我國對于海鮮菇菌種工廠化管理比較混亂，各個工廠的技術水平和管理水平參差不齊，經常出現同種異名或者異名同種的現象。由于菌種的管理到位有利于工廠化生產海鮮菇的高產、優質，鑒于此，對于海鮮菇工廠化優良菌株的選育很有必要。

1 材料與方法

1.1 菌種

本試驗采用拮抗試驗和酯酶同工酶電泳試驗考察國內外常見的5個海鮮菇主栽品種，詳見表1。

1.2 培養基

馬鈴薯綜合培養基[6]：200 g馬鈴薯，1.5 g硫酸鎂，20 g瓊脂，1.0 g磷酸二氫鉀，20 g葡萄糖，水1 000 mL。

栽培瓶培養基：70 %木屑，10 %棉籽殼，10 %米糠，9%玉米粉，1%石灰。

1.3 試驗方法

1.3.1 海鮮菇拮抗試驗 參照NY/T 1845—2010《食用菌菌種區別性鑒定 拮抗反應》操作：將5種海鮮菇菌株兩兩接種到預先配制好的馬鈴薯綜合培養基平板上，2株菌株同時接種于同一平板上，間距約3 cm，24 ℃恒溫培養20 d左右。待菌絲體長滿平板后觀察海鮮菇2個接種塊交界處是否有褐色的拮抗線出現。

1.3.2 海鮮菇酯酶同工酶電泳試驗 將不同海鮮菇菌株于馬鈴薯綜合培養基上培養20 d，培養溫度24 ℃，稱取0.5 g菌絲，放于預冷研缽中，加入液氮研磨至乳白色疏松狀，加入2倍體積樣品緩沖液，4 ℃、10 000 r/min離心10 min。取上清液，經聚丙烯酰胺凝膠電泳后，顯影觀察測量，并計算相對遷移率Rf，Rf=蛋白條帶移動距離/溴酚藍移動距離。

1.3.3 子實體農藝性狀調查 將5種海鮮菇菌株分別接種在相同培養基的栽培瓶中培養至出菇，每個菌株接32瓶，在相同的培養環境下培養，待海鮮菇子實體生長至八分熟即進行采收，測定這5種海鮮菇的叢高、單株質量、子實體數、菌蓋厚度、菌蓋直徑、生物學轉化率等相關數據。

2 結果與分析

2.1 海鮮菇菌株間的拮抗反應

拮抗反應是異宗結合食用菌品種鑒定的常用方法，已經在許多食用菌菌種鑒定中使用。待不同菌株的菌絲生長邊緣靠近時，從正面觀察其繼續生長情況，從反面觀察色素沉著情況。由表2可知，這5種菌株兩兩相互為1個對比組，共有10個對比組。由圖1可以看出，所有對比組正面菌絲都不融合，且背面全部都產生了拮抗線，可以初步確定這5種菌株是海鮮菇的5個不同品種。

2.2 不同菌株的酯酶同工酶檢驗

2.2.1 海鮮菇酯酶同工酶電泳結果 由圖2可以看出，這5個樣品有互不相同的電泳條帶類型與條帶數，可以說明這5個菌株間沒有親緣關系，為不同的海鮮菇品種。

從圖2還可以看出，供試5個菌株的酯酶同工酶的酶譜條帶的Rf值位于0.08～0.71之間，條帶數4～7條不等，并且每個條帶的寬窄度、顏色的深淺均表現出一定的差異。其中1號、3號有5條帶，2號、5號有4條帶，4號條帶數最多，為7條。因此可以看出，這5個品種都有部分條帶是相同的，但沒有2個是完全相同的，可以確定它們有一定的親緣關系，但關系較遠。

2.2.2 海鮮菇酯酶同工酶聚類分析 在酶譜中，相應位置有酶帶表示為1，沒有酶帶表示為0，根據表2統計各海鮮菇菌株的酯酶同工酶信息，用SPSS軟件進行聚類分析，得到各海鮮菇菌株酯酶同工酶的聚類樹（圖3），然后對各菌株進行遺傳分析。

由圖3可知，1號、4號、5號樣品與其他樣品遷移率和條帶數的差異較大。將5種海鮮菇菌株分為4類：1號、4號、5號各為一類，2號、3號為一類。酯酶同工酶結果表明，這種分析方法在研究海鮮菇的分類地位及親緣關系方面較其拮抗反應的結果更細微。

2.3 5種海鮮菇菌株的出菇比較

2.3.1 5種海鮮菇生產周期比較 由表3可知，后熟時間最短的是5號菌株，為56 d，其次為4號菌株，為57d，較長的是1號、2號、3號菌株，其中1號、2號菌株為62 d，3號菌株為60 d。由此可見，若用4號、5號菌株，則可以有較短的后熟時間，從而縮短整個培養周期。4號、5號菌株的現蕾時間最短都出現在進入出菇房后8 d，而現蕾最遲的為1號，在進入出菇房后12 d才現蕾。從成本、周期角度考慮，4號、5號菌株為最佳選擇。endprint

2.3.2 5種海鮮菇子實體農藝性狀比較 菇蓋基本展開后，海鮮菇菌株隨機抽取8瓶，觀察記錄采收時間、后熟時間、現蕾時間、子實體叢質量、子實體個數、叢高、子實體單個質量、菌蓋厚度、菌蓋直徑等子實體形態、菇形等，并計算其平均值，結果見表4。

由表4可知，1號、2號、3號菌株的子實體數量比較接近，都很少，平均都不超過17個，而4號子實體數量最多，平均達到50個以上，5號子實體平均數量也達到了35個左右；5號叢高具有明顯的優勢，平均達到14.53 cm，其他4種都比較矮，其中4號最矮，平均只有8.55 cm；3號菌蓋平均厚度最大，達到了1.15 cm，1號菌蓋厚度最小，為0.68 cm，其他3種子實體平均厚度適中；5號菌蓋平均直徑最小，為1.87 cm，2號、3號菌株平均直徑最大，都超過了2.40 cm，由于在商品轉運過程中，菌蓋大容易被碰掉，因此菌蓋小的子實體商品性能較好。

從菇的外形來看，4號最佳，菇形緊湊，比較整齊；其次為5號，菇形為細長狀，菇蓋小，菇形比較整齊；1號、2號、3號菇形參差不齊，而且部分有瘤狀物出現（圖片未顯示），從而影響了外觀。從子實體單個質量來說，3號比較突出，子實體平均單個質量達到8.86 g，但整齊度較差。

經直觀分析，1號、2號、3號菌株產子實體農藝性狀不佳，不適合工廠化栽培推廣；4號菌株產子實體的菇形整齊，產量也高，子實體數量也多，5號菌株菌柄比較高，產量同樣也不低，值得推薦。

2.3.3 5種海鮮菇菌株子實體產量及生物學轉化率 由表5可知，5號菌株出菇的產量最高，為164.13 g，生物學轉化率達78.1%，其次為4號菌株，平均生物學轉化率為77.5%，與1、2、3號菌株之間存在顯著差異。

3 討論與結論

真姬菇有灰色、白色品系，灰色品系被稱為蟹味菇，而通體雪白，叢生，長度5～8 cm的白色品系，人們稱之為白玉菇。我國在白玉菇菇蕾形成后，通過調控栽培環境的溫、光、氣、濕，主要是對二氧化碳濃度進行控制，促使菇柄伸長至8～16 cm，為了與白玉菇區別，商品名改稱為海鮮菇。以上三者單位體積栽培料轉化率通常以海鮮菇較高，其次是蟹味菇，白玉菇最低[7]。

由于在拮抗試驗中，5種海鮮菇菌株兩兩之間都出現了拮抗線，可以初步判定為海鮮菇的5個不同品種，它們之間的親緣關系不明顯。再通過對這5種菌株酯酶同工酶酶譜比較發現，它們的酯酶同工酶酶譜相差較大，條帶差異性也較大，進一步證明其親緣關系較遠。經聚類分析，將5個海鮮菇菌株分為4組。以出菇情況為主要篩選指標，比較這5種菌株在工廠化瓶栽中的表現，結果表明，1號、2號、3號均具有產量低、菇形差、培養周期長等缺點，其中3號菌株菇蓋出現脫分化的瘤狀物，影響蘑菇的外觀；而4號、5號菌株則明顯優于前3種，具周期短、產量高、外形美觀等優點。

對子實體的農藝性狀調查顯示，4號菌株產子實體雖然叢高不是最高的，但是菇形好、叢高一致、菇蓋均一性好，且子實體產量較高，生物學轉化率達到77.5%；5號菌株菇形較好，子實體產量最高，生物學轉化率最高，為78.1%。綜合分析可知，選取4號、5號菌株作為優良菌株規?；N植，可以提高海鮮菇的產量、質量，是適合工廠化瓶栽的菌株。

參考文獻：

[1]魏 峰，侯祥保，孫家寧，等. 海鮮菇工廠化生產的操作規程[J]. 食藥用菌，2015，23（1）：50-53.

[2]程 玉. 酶解法制備海鮮菇調味料的研究[D]. 杭州：浙江大學，2013.

[3]Antmann G，Ares G，Lema P，et al. Influence of modified atmosphere packaging on sensory quality of shiitake mushrooms[J]. Postharvest Biology and Technology，2008，49（1）：164-170.

[4]王 琦，章勤學. 蟹味菇的營養價值及生物活性成分研究[J]. 食品研究與開發，2010，31（1）：173-174.

[5]張 穎. 白玉菇冷藏保鮮及冷鏈流通技術研究[D]. 福州：福建農林大學，2014.

[6]鄭素月，張金霞，王賀祥，等. 我國栽培平菇近緣種的多相分類[J]. 中國食用菌，2003，22（3）：3-6.

[7]黃 毅. 圖解海鮮菇袋式栽培技術（一）[J]. 食藥用菌，2015，23（3）：143-146.endprint