紙片法快速檢測生活飲用水中總大腸菌群的探討

許晶

紙片法快速檢測生活飲用水中總大腸菌群的探討

許晶

目的探討使用紙片法快速檢測生活飲用水中大腸菌群的可行性。方法使用紙片法與多管發酵法同時檢測本地區收集的水樣106份，對兩種方法對大腸菌群的檢出率進行比較。結果在106份生活飲用水水樣中，多管發酵法和紙片法均檢出總大腸菌群陽性2份，組間差異無統計學意義（P＞0.05）。結論紙片法可以達到快速、準確、簡便地檢測總大腸菌群的目的，可以用于快速、便捷的檢測生活飲用水。

紙片法；快速檢測；生活飲用水；大腸菌群

作者單位：430100 武漢，武漢市蔡甸區疾病預防控制中心

生活飲用水與居民的身體健康密切相關，大腸菌群是我國生活飲用水中最為常見的細菌[1]。根據我國現行的《生活飲用水衛生標準》GB5749-2006中明確規定總大腸菌群不得檢出，菌落總數不得高于100 CFU/mL[2]。紙片法檢測細菌（如大腸菌群等）在餐飲行業中已經較為常用，與傳統的發酵法相比，紙片法具有快速、便捷的特點[3]。但在紙片法對大腸菌群檢出的靈敏度上仍有爭議。我單位采集來自本地區（包括下屬鄉鎮）的生活飲用水，分別用紙片法及多管發酵法進行檢測，對比兩種方式檢出的總大腸菌群數。現將結果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本單位從本區所屬的各個街道、鄉鎮采集不同的飲用水水樣106份，其中來自本區各街道的水樣74份，各鄉鎮水樣32份。將每份水樣平均分為兩份，分別使用紙片法與多管發酵法檢測。

1.2 檢測方法

1.2.1 紙片法 本次試驗選用水質大腸菌群檢驗紙片（十五管法）（生產廠家：廣州綠洲生化科技股份有限公司；產品編號：BD104）。（1）接種：用10 mL滅菌吸管吸取10 mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中，均勻涂布，共加5個大紙片（濃度為10）；用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL水樣加到小紙片中，共加5個小紙片（濃度為1）；另取1 mL水樣加到9 mL滅菌生理鹽水中混勻，用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL（即0.1 mL水樣），加到最后5片小紙片中（濃度為0.1）。（2）培養：將接種好的紙片（每一份水樣共計15張）放于培養箱中，恒溫37oC培養24 h。

1.2.2 多管發酵法 發酵法按照《生活飲用水衛生檢驗方法 微生物指標》GB/T5750.12-2006[4]以及《生活飲用水衛生標準》GB5749-2006規定執行。大體分為3步：（1）乳糖發酵試驗：接種管內裝有乳糖蛋白胨培養液并倒置一小套管，取10 mL水樣接種到10 mL雙料乳糖蛋白胨培養液中，取1 mL水樣接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養液中，另取1 mL水樣注入到9 mL滅菌生理鹽水中，混勻，用1 mL滅菌吸管分別吸取1 mL（即0.1 mL水樣）接種到10 mL單料乳糖蛋白胨培養液中，每一稀釋度接種5管。將接種管置于37oC培養24 h，如所有乳糖蛋白胨培養管都不產氣產酸的報告為總大腸菌群陰性，如有產酸產氣者，繼續以下步驟。（2）分離培養：將產酸產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，于37oC培養18 h-24 h，觀察菌落形態，挑取有金屬光澤的深紫黑色菌落；不帶或略帶金屬光澤的紫黑色菌落；中心較深的淡紫紅色菌落做革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗。（3）證實試驗：經上述涂片染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽胞桿菌者，同時接種乳糖蛋白胨培養液，經37oC培養24 h產酸又產氣者，即證實為總大腸菌群陽性。

1.3 結果判讀和報告

1.3.1 紙片法 觀察每片試紙的顏色變化，若試紙紙片變黃或在黃色上呈現紅色斑點表現為大腸菌群陽性，若試紙紙片保持紫藍色不變或在紫藍色上呈現紅色斑點，但周圍沒有黃色出現均表現為大腸菌群陰性。根據陽性反應紙片數，查MPN表可得出水樣中大腸菌群的MPN值。

1.3.2 多管發酵法 根據證實為總大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100 mL水樣中的總大腸菌群MPN值

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0進行數據分析，計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 兩種檢驗方式結果比較

2 結果

本次檢測生活飲用水中總大腸菌群，共計采集水樣106份，檢驗106份。其中紙片法檢驗水質達標104份，水質不達標2份，達標率為98.11%，陽性率為1.89%；發酵法水質達標104份，水質不達標2份，達標率為98.11%，陽性率為1.89%。兩種檢驗方式結果相同，無統計學差異（P＞0.05）。兩種方式檢測總大腸菌群的MPN值見表1。

本次的水質檢測過程中發現本區大部分地區生活飲用水水質符合國家要求，仍有部分地區生活飲用水水質不符合國家的衛生安全標準，這部分衛生安全隱患主要集中于較偏遠的鄉鎮。

3 討論

生活飲用水關系到居民們的身體健康，嚴格按照國家標準對生活飲用水進行檢測，分析飲用水是否安全衛生是本單位的工作之一[5-7]。探求快速、有效的檢測方法，是我們的目標。

紙片法與傳統多管發酵法檢測生活飲用水中的總大腸菌群陽性比率經統計學分析無明顯差異，紙片法對大腸菌群的檢驗靈敏度不弱于多管發酵法，兩者相比檢驗出來的水質MPN值也相差不大。以上結果說明紙片法與傳統的發酵法對于總大腸菌群的檢出率基本一致。但是與多管發酵法相比，紙片法檢測總大腸菌群的測定周期更短，所用材料更容易得到，對于環境及操作的要求也更簡單。更適用于快速、大批量水樣的檢驗，及周圍環境復雜、不能完全達到無菌條件時的檢驗。

總之，紙片法可以達到快速、準確、簡便的檢測總大腸菌群的目的，而且檢測的靈敏度，與傳統的發酵法相比無明顯差異。

1 焦勇霞.大腸菌群快速檢測方法探討.山西化工,2016(1):51-53.

2 謝雪欽.兩種方法測定菌落總數和大腸菌群的比較研究.食品工業,2015(10): 283-285.

3 蔡盡忠.大腸菌群快速檢測方法研究進展.生命科學儀器,2015(2): 14-18.

4 王琳.生活飲用水大腸菌群快速紙片法和多管發酵法檢測結果比較.臨床合理用藥雜志,2015(8): 166.

5 李儉峰.大腸菌群紙片法與發酵法檢測食具的結果比較.中國城鄉企業衛生,2012(3): 117-118.

6 王正革.生活飲用水大腸菌群檢測紙片法快速檢測與發酵法的結果對比.醫學信息,2012,25(5): 361.

7 趙紅,蘇靜,梁煒,等.紙片培養法與平板培養法監測牙科水路細菌污染的比較研究.中國消毒學雜志,2015,32(5):489-490.

Study on rapid detection of total coliform bacteria in drinking water by paper strip method

Jing XU
Disease Prevention and Control Center of Caidian District,Wuhan 430100,China

ObjectiveTo investigate the feasibility of rapid detection of coliform bacteria in drinking water using paper strip method.MethodsSimultaneous detection of 106 samples of water collected in the region by using paper strip and multiple-tube fermentation.The detection rate of coliform bacteria by two methods were compared.ResultsIn 106 drinking water samples,2 samples with total coliform bacteria positive detected by the multiple-tube fermentation and the paper strip method,and there was no statistically significant difference between the two groups.ConclusionThe paper strip method can quickly,accurately and conveniently detect the total coliform bacteria,and can be used to detect drinking water quickly and conveniently.

Paper strip method; Rapid detection; Drinking water; Fecal coliform