TGF-β和ERα與Ib期-IIa期宮頸上皮癌臨床病理指標及預后的關系

孫雯 徐文茂 尹娟

TGF-β和ERα與Ib期-IIa期宮頸上皮癌臨床病理指標及預后的關系

孫雯 徐文茂 尹娟

目的Ib-IIa級別的宮頸癌發病率約占全部宮頸癌患者的60%-70%，本研究旨在探討TGF-β和ERα與宮頸上皮癌臨床病理及預后的關系。方法應用免疫組化技術對132例隨訪資料完整的宮頸癌標本進行TGF-β和ERα檢測，同時，以20例正常宮頸組織、20例慢性宮頸炎癥組織作為對照分析其表達與宮頸癌臨床指標以及預后的關系。結果與正常宮頸組織以及慢性炎癥宮頸組織相比，TGF-β和ERα在宮頸癌組織中表達明顯上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表達與宮頸上皮癌的發生年齡、腫瘤直徑等一般臨床病理因素無相關（P＞0.05），而與患者的HPV感染史、腫瘤的病理類型、組織學分級、侵襲深度、淋巴結轉移、復發、轉移密切相關，TGF-β和ERα雙陽性表達的腫瘤復發轉移率、病理學分級、淋巴結轉移等明顯高于陰性表達者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表達在宮頸癌患者組織中明顯增高（P＜0.05）；Cox比例風險模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影響宮頸癌預后的重要獨立因素，TGF-β和ERα表達雙陽性的宮頸癌患者預后差。結論測定TGF-β和ERα的表達對臨床上Ib-IIa級別宮頸癌患者的診斷、預后以及指導治療有較大的幫助。

宮頸癌；轉化生長因子β；雌激素受體α；預后

作者單位：100054 北京，北京斯普林格醫學研究院分子醫學研究所

近幾年來，宮頸腺癌的發病率不斷提高，其中Ib-IIa級別的腫瘤比例也在不斷增加，約占其中的60%-70%[1]。而且由于腺癌對化療的敏感性較鱗癌略低，因此改善Ib-IIa級別的腫瘤療效對提高宮頸腺癌的生存率具有極高的意義。在宮頸腺癌預后的影響因素中，如淋巴轉移、旁侵犯等，對制定更好的宮頸腺癌治療方案具有積極的意義[2]。通過臨床觀察，我們發現一些宮頸腺癌患者具有同樣的臨床預后，但存在不同的臨床病理學指標[3]。由于腫瘤進程中存在著多種基因參與，在患者中也存在著許多個體差異。因此，通過臨床病理學診斷指標預測腫瘤預后也存在著一定的局限性[4]。隨著分子醫學的不斷進步，分子預后指標將成為潛在的腫瘤預后生物學指標。近期的研究認為宮頸腺癌是一類激素依賴性的腫瘤，并且許多實驗也明確了雌激素受體和宮頸腺癌之間的聯系。同樣，TGF-β也被認為是子宮頸的人類乳頭瘤病毒16感染和上皮腫瘤的預后指標[5,6]。Stoica等[7]發現，TGF-β能夠誘導乳腺癌細胞中ER的表達。但是，激素與宮頸腺癌的具體機制尚不清楚。目前，我們檢測了宮頸腺癌患者中TGF-β和ER蛋白的表達水平，并分析了臨床病理學指標與腫瘤組織中TGF-β和ER的關系，明確了TGF-β和ER能夠作為一種潛在的臨床宮頸腺癌預后指標。

1 材料和方法

1.1 病例收集 我們收集132例Ib期-IIa期宮頸腺癌患者的石蠟切片以及臨床病歷資料?；颊吣挲g33歲-70歲，平均年齡43.6歲。根據國際婦產科聯盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO）2000標準，Ib期病例組包括52例患者，IIa期病例組包括80例病例。上述132例病例均為腺癌。78例患者的腫瘤直徑＞4 cm，27例＜4 cm。60例患者的宮頸浸潤深度＞2/3，72例≤2/3。19例患者存在陰道復發，94例患者未見復發。70例患者存在淋巴轉移，62例患者未見淋巴結轉移。所有實驗均得到患者同意，并通過倫理委員會驗證。

1.2 入選標準 所有患者均接受適當的化療和放療。對患者從接受手術起進行隨訪，隨訪時間26個月-99個月，平均隨訪時間約61個月。20例正常宮頸標本作為對照組。

1.3 試劑及抗體 TGF-β單克隆抗體、ER單克隆抗體、DAB顯色試劑盒均購自美國Abcam公司。陽性結果判斷：TGF-β和ER主要在細胞質著色，呈棕色彌漫或顆粒狀。根據切片中陽性細胞占全部細胞的比例分為：TGF-β陽性組、ER陽性組、TGF-β與ER雙陽性組、TGF-β與ER雙陰性組。結果判斷由兩名病理醫師獨立進行。

1.4 統計學方法 所有數據統計均以SPSS 7.0統計軟件包完成。兩組間率的比較用χ2檢驗或精確概率法，等級資料用兩樣本比較的秩和檢驗，轉移復發危險因素用Cox比例風險模型分析。以P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 TGF-β、ERα在不同的宮頸上皮中表達不同 我們首先通過免疫組化染色觀察TGF-β以及ERα在三組中的表達陽性情況，結果表明，TGF-β在正常宮頸、慢性炎癥宮頸以及宮頸癌中上皮細胞的表達陽性率分別為35.00%、55.00%和71.21%，均有明顯的統計學差異（P＜0.01）。同時，ERα在正常宮頸、慢性炎癥宮頸以及宮頸癌上皮中的表達陽性率分別為35.00%、50.00%和68.18%，提示有統計學差異（P＜0.05）。上述結果表明，在慢性炎癥以及宮頸癌中，宮頸上皮細胞中的TGF-β與ERα的表達量均出現明顯增高，其中又以宮頸癌增高更為明顯，提示TGF-β、ERα與宮頸癌的發生發展存在相關性，見表1。隨后，通過對免疫組化染色結果發現，TGF-β以及ERα在正常以及慢性炎癥的宮頸上皮細胞中表達量極低，而在宮頸上皮腫瘤中表達量則為強陽性，見圖1、圖2。

2.2 TGF-β與ERα的表達量與臨床指標存在相關性 隨后，我們又將TGF-β、ERα的蛋白質表達情況與患者的HPV感染史、侵襲深度、淋巴結轉移以及復發情況之間的關系進行了分析，結果發現，上述臨床指標均與兩種蛋白的表達量存在相關性，有統計學差異（P＜0.05），見表2。但是，發病年齡以及腫瘤直徑則與兩種蛋白質表達情況無明顯聯系。進一步的分析我們還發現，隨著TGF-β、ERα的蛋白表達不斷上升，上述臨床指標也出現了惡性程度提高的現象。隨后，我們還對TGF-β、ERα兩種蛋白質的表達情況與患者生存期進行了分析，從生存曲線中，我們發現，TGF-β與ERα雙陰性組的生存期顯著高于雙陽性以及單陽性組，具有統計學差異（P＜0.01），而TGF-β單陽性組或ERα單陽性組以及雙陽性組之間則未見明顯差異，見圖3。同樣的，雙陰性組患者的生存率也顯著高于其他三組，但在其他三組之間則未見顯著性差異。Cox回歸分析也表明，ERα陽性、TGF-β陽性或者雙陽性均能夠顯著性的增加死亡危險，見表3。多變量分析同樣表面，HPV感染史以及淋巴結轉移顯著的增加死亡風險，具有HPV感染史的患者死亡率較陰性組提高了1.698倍（HR=1.698,95%CI: 1.089-2.648）。而存在淋巴結轉移的患者其死亡率提高了1.650倍（HR=1.650,95%CI:1.070-2.544）。

3 討論

過去的大量研究已經表明，TGF-β在宮頸上皮惡性腫瘤中發揮著重要的作用。TGF-β在宮頸癌中能夠促進腫瘤細胞增殖，對腫瘤細胞起到一定的保護作用。與這種功能相對應的，許多臨床研究也表明，TGF-β在宮頸癌中出現高表達的情況[8]。我們的研究表明，相較于正常組織，腫瘤組織中的TGF-β表達量明顯上升，與之前的研究結果相互印證，同時也再次說明了雌激素分泌水平的改變是宮頸癌癌變的起始環節。

表1 不同組織中TGF-β與ERα的表達水平

圖1 TGF-β在不同組織中的表達水平

圖2 ERα在不同組織中的表達水平

表2 TGF-β與ERα表達水平與臨床腫瘤指標的關系

表3 TGF-β與ERα與宮頸癌預后的關系

圖3 TGF-β與ERα表達水平與宮頸癌預后的關系

同時，本研究還首次指出，TGF-β與ERα能夠作為宮頸上皮惡性腫瘤的獨立因素，并且對宮頸癌的生存期、侵襲深度和淋巴結轉移等均表現出明確的相關性[9-11]。通過對這兩種蛋白質表達量的檢測，能夠對宮頸上皮惡性腫瘤的預后做出一定的預測，并預判患者的復發情況。本研究發現，與正常宮頸組織以及慢性炎癥宮頸組織相比，TGF-β和ERα在宮頸癌組織中表達明顯上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表達與宮頸上皮癌的發生年齡、腫瘤直徑等一般臨床病理因素無相關（P＞0.05），而與患者的HPV感染史、腫瘤的病理類型、組織學分級、侵襲深度、淋巴結轉移、復發、轉移密切相關，TGF-β和ERα雙陽性表達的腫瘤復發轉移率、病理學分級、淋巴結轉移等明顯高于陰性表達者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表達在宮頸癌患者組織中明顯增高（P＜0.05）；Cox比例風險模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影響宮頸癌預后的重要獨立因素，TGF-β和ERα表達雙陽性的宮頸癌患者預后差。通過本研究證明，TGF-β以及ERα在宮頸癌患者中的表達量能夠成為一類可靠的宮頸癌預后的分子標記物，同時，也可能成為宮頸癌復發的潛在治療靶點。

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6 Singh H,Jain M,Mittal B.Role of TGF-beta1 (-509C＞T)promoter polymorphism in susceptibility to cervical cancer.Oncol Res,2009,18(1): 41-45.

7 Bhogal RK,Stoica CM,McGaha TL,et al.Molecular aspects of regulation of collagen gene expression in fibrosis.J Clin Immunol,2005,25(6): 592-603.

8 Noordhuis MG,Fehrmann RS,Wisman GB,et al.Involvement of the TGF-beta and beta-catenin pathways in pelvic lymph node metastasis in early-stage cervical cancer.Clin Cancer Res,2011,17(6): 1317-1330.

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Expression of TGF-β and ER protein in stage Ib-IIa cervical adenocarcinoma patients and its relationship with prognosis

Wen SUN,Wenmao XU,Juan YIN
Institute of Molecular Medicine,Springer Medical Research Institute,Beijing 100054,China

ObjectiveThe incidence of stage Ib-IIa accounts about 60% to 70% of all cervical adenocarcinoma patients.Our study aims to investigate the prognostic relationship of protein estrogen receptor alpha (ERα)and transforming growth factor beta (TGF-β) in cervical adenocarcinoma patients.MethodsWe used immunohistochemistry to detect ERα and TGF-β in carcinomas and incisal margins of 132 cases with cervical adenocarcinoma,20 cases with normal cervix,and 20 cases with chronic cervicitis.Uni- and multivariate analysis was applied to evaluate the prognostic significance of TGF-β and ERα in carcinomas.ResultsThe results indicated that the positive expression of TGF-β in carcinomas was 71.21%,significantly higher compared to that in thenormal cervix (35%)and chronic cervicitis (55%) (χ2=8.901,P=0.012).Similarly,the positive expression of ERα in the carcinomas was 68.18%,significantly higher compared to the normal cervix (35%) and chronic cervicitis (50%) (χ2=7.693,P=0.021).Both TGF-β and ERα in the carcinomas were associated with the vaginal recurrence,infection of HPV,depth of infiltration,and lymphatic metastasis (P＜0.05).The conjugation of TGF-β and ERα was an independent prognostic factor for cervical adenocarcinoma.Survival curve showed that the positive TGF-β1 and ERα indicated a short life time of patient with cervical adenocarcinoma.Conclusions The expression of TGF-β and ERα protein in the carcinomas had a significant prognostic value in a patient of stage Ib-IIa in cervical adenocarcinoma.

Cervical adenocarcinoma; TGF-β; ERα; Prognosis