青島地區雞源大腸桿菌耐藥性檢測

方杰　李昕

摘要 從青島平度、即墨、萊西3個地區的多家養殖場中分離了雞源大腸桿菌89株，并進行了鑒定及藥敏試驗。結果表明，所調查地區雞源大腸桿菌耐藥性較嚴重，對 恩諾沙星、氨芐西林耐藥最為普遍，其次是氟苯尼考、慶大霉素與環丙沙星。同時發現，調查地區大腸桿菌耐藥譜廣且多重耐藥性嚴重。

關鍵詞 大腸桿菌；雞；耐藥性；山東青島

中圖分類號 S852.61；R378.2+1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）21-0244-01

Abstract 89 strains of chicken-derived Escherichia coli were isolated from several farms in Qingdao（Pingdu，Jimo，Laixi），and identification and drug sensitivty test were carried out.The results showed that the Escherichia coli resistance of chickens in the investigation area was serious，and the resistance to enrofloxacin and ampicillin was the most common，followed by florfenicol，gentamicin and ciprofloxacin. At the same time，it was found that Escherichia coli in the investigation area had wide resistance spectrum，and the multi-drug resistance was serious.

Key words Escherichia coli；chicken；drug resistance；Qingdao Shandong

抗生素的發現為人類對抗細菌感染性疾病提供了非常有利的保障，也逐漸成為了治療細菌相關疾病的首選藥物。但是，隨著抗生素的大量使用，細菌對抗生素的耐受能力也在逐漸增強。近年來，據相關報導，部分地區甚至出現了超強耐藥的“超級細菌”。因此，對細菌的耐藥性研究已經成了目前最為緊迫的任務，也是困擾我國畜牧獸醫業發展的重要難題[1]。

大腸桿菌感染是目前集約化雞場常見的臨床疾病之一，在各地區、各養殖場的發生概率均較高[2]。同時，大腸桿菌的血清型較多、分布廣泛并且具有很強的地域特征，加之大腸桿菌病具有發病率高、繼發性強等特點，已經使其成為威脅養雞業的一種重要疾病[3]。為了調查山東省青島地區雞源性大腸桿菌的耐藥性及耐藥特點，本研究在青島萊西、平度、即墨3個地區針對2015—2016年肉雞糞便中分離的大腸桿菌進行了7種臨床常用抗生素的藥敏測試，分析青島市不同地區雞源性大腸桿菌的耐藥流行病學，為抗菌藥物的選擇和使用提供依據和保障。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試劑及器材。培養基（麥康凱瓊脂、MHA瓊脂、MHB肉湯），購自北京陸橋技術股份有限公司；乙醇、甘油、PBS等，購自國藥集團；氨芐西林可溶性粉、鹽酸環丙沙星可溶性粉、硫酸慶大霉素可溶性粉、氟苯尼考可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、鹽酸多黏菌素可溶性粉、鹽酸恩諾沙星可溶性粉，購自青島天元普康生物技術有限公司。細菌/藥敏分析儀（XK，四川科儀誠科技有限公司）。

1.1.2 菌株。大腸桿菌標準菌株（E.coli ATCC 25922）由本試驗保存，采集于青島平度、即墨、萊西不同養殖場的大腸桿菌89株。

1.2 試驗方法

1.2.1 細菌的分離鑒定。采用無菌棉拭子于雞直腸中蘸取采樣，帶回實驗室后，接種麥康凱瓊脂平板，于37 ℃培養箱中培養16～20 h，同時觀察菌落的生長情況。挑選白色、勻潤光滑、邊緣整齊的單菌落挑起，然后制備菌液用于藥敏檢測。

1.2.2 藥敏試驗。①藥物質控：參考CLSI標準藥敏方法（CLSI4th2013）指控范圍，用E.coli ATCC 25922通過微量肉湯稀釋法在96孔板上進行質控。②藥敏試驗采用細菌/藥敏分析儀，按照操作說明進行操作。

2 結果與分析

2.1 細菌的分離鑒定

通過分離鑒定，采自青島萊西、平度、即墨等3個地區的規模化養雞場及養殖專業戶的病料共147份，經分離鑒定后得到致病性大腸桿菌菌株89株。

2.2 耐藥性檢測

通過試驗檢測雞大腸桿菌對7種常見抗菌藥的抗藥性，結果發現，所取樣的雞大腸桿菌均對所檢抗菌藥物產生了不同程度的耐藥性。其中，對恩諾沙星、氨芐西林的耐藥性最高，其次為氟苯尼考、慶大霉素與環丙沙星。所調查雞大腸桿菌耐藥性最低的是硫酸新霉素與多黏菌素（表1）。

2.3 多重耐藥性與交叉耐藥性分析

檢測發現，在3個地區所檢的89株菌株中，對≥3種抗菌藥物產生抗藥性的有48株，多重抗藥率高達53.9%（表2）。15.7%的菌株對≥5種抗菌藥有耐藥性，38.2%的菌株對3～4種抗菌藥有耐藥性。其中，屬于喹諾酮類的環丙沙星耐藥性最為普遍。所檢測菌株對氨基糖苷類的慶大霉素及黏菌素類的多黏菌素敏感性最高。

3 結論與討論

大腸桿菌感染會導致雞精神不振、采食下降、呼吸困難、消瘦等臨床癥狀，并可引起關節炎、氣囊炎、腦炎甚至敗血癥等多種疾病，嚴重的還可導致雞胚死亡，降低孵化率等[4]。隨著我國養殖業規模化、工廠化、集約化的發展，抗生素的無限制使用，導致各種混合感染頻發，同時繼發感染大腸桿菌的概率也越來越高。大腸桿菌感染已經成為了雞細菌性感染疾病之首[5]。經調查發現，青島3個地區（即墨、平度、萊西）雞源大腸桿菌對環丙沙星、氟苯尼考的抗藥性較高，細菌之間的差異較小，多重抗藥性的現象也比較突出。因此，養殖企業在臨床選擇抗菌藥時最好做藥敏檢測，根據檢測結果再合理地根據自身養殖場特點選擇抗菌藥物。

目前，我國大部分地區禽源大腸桿菌都存在嚴重的多重耐藥現象。在本次調查中，調查地區雞大腸桿菌多重耐藥和交叉耐藥的現象比較嚴重且耐藥譜較廣，多重耐藥率達到53.9%。多重耐藥性問題嚴重可能與以下幾個因素有關：一是抗生素的無限制使用，及選藥、用藥時沒有按照合理的程序規則[6]；二是目前市場上的獸用藥質量良莠不齊，存在人為添加抗生素的現象；三是為了適應抗菌藥物的作用，細菌本身也在不斷地發生變異。因此，在臨床用藥上應合理選擇藥物，不能濫用且長時間低劑量使用抗生素。

總之，不同地區的雞源大腸桿菌的耐藥性存在較大差異，各地區都有相應的耐藥譜，各地區甚至各養殖場應該根據自身耐藥譜合理地選擇抗菌藥。在使用時應該注意不同抗生素的輪換使用，盡量少用耐藥性高的抗菌藥。同時，注意養殖場衛生條件，改善飼養管理模式，盡量減少禽類疾病的發生。

4 參考文獻

[1] 李楠.養殖場空氣中細菌分布及耐藥性研究[D].北京：中國人民解放軍軍事醫學科學院軍事獸醫研究所，2011.

[2] 王紅寧.禽呼吸道系統疾病[M].北京：中國農業出版社，2002.

[3] 邢艷蘋，王瑜，楊峰，等.動物源性大腸桿菌耐藥性分析[J].吉林畜牧獸醫，2010，31（11）：7-10.

[4] KAPER J B，NATARO J P，MOBLEY H I.Pathogenic Escherichia coli[J].Nat Rev Microbiol，2004，2（2）：123-140.

[5] 劉遠飛，曹翠萍，寧海強，等.山東省雞大腸桿菌血清型分布及耐藥性分析[J].家畜生態學報，2008，29（1）：88-90.

[6] 宿志民.泰安地區雞源大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析[D].泰安：山東農業大學，2015.endprint