結腸癌組織中MCP-1與VEGF-C的表達及意義①

結腸癌組織中MCP-1與VEGF-C的表達及意義①

目的：探討單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)與血管內皮生長因子-C(VEGF-C)對結腸癌發生及發展的影響及臨床意義。方法：通過免疫組化方法測定60例結腸癌病理標本中兩種因子的表達。結果：MCP-1在癌旁正常組織組陽性表達率為21.7%，比結腸癌組顯著降低(P<0.05)。VEGF-C在癌旁正常組織組陽性表達率為23.3%，比結腸癌組顯著降低(P<0.05)。二者同時與結腸癌的TNM分期聯系密切，與分化程度無關聯。結論： MCP-1、VEGF-C在結腸癌的病情發展中起著顯著作用，是促使癌腫浸潤及轉移的重要因素，對于結腸癌的診療有明顯指導意義。

結腸癌;VEGF-C;MCP-1;病理分期;臨床分析

MCP-1作為趨化因子眾多亞家族中的成員之一，是起著關鍵作用的趨化因子，其表達程度與很多癌腫的演變、種植、擴散及炎性細胞浸潤緊密相關。VEGF-C是一種血管通透性因子，可以強烈提高血管內皮細胞的再生，增加微血管壁的通透能力，并能刺激淋巴管內皮細胞增生。已有研究[1]發現血清VEGF-C水平增加可直接導致食管鱗癌的預后不良。研究表明腫瘤組織過度表達 MCP-1 引起的單核細胞浸潤促進血管內皮生長因子的表達并促進腫瘤組織淋巴管上皮的增生、遷移和新的淋巴管形成, 促使腫瘤發生轉移[2,3]。本題主要探索MCP-1、VEGF-C在結腸癌發病及進展過程中的作用及臨床意義。

1 材料和方法

1.1 實驗標本

選取佳木斯大學附屬第一醫院2015-03～2016-03行結腸癌切除手術后經病理學確診為結腸癌的實驗標本60例，年齡25～75歲，平均53.61歲。根據美國抗癌聯合委員會(AJCC)/國際抗癌聯盟(UICC)結直腸癌TNM分期系統(第七版)，其中Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ～Ⅳ 期36例。高分化腺癌38例，中低分化腺癌22例。選取60例距癌腫遠端切緣>5cm并經病理學確定為斷端無癌腫的結腸組織，即癌旁正常組織，作為對照組。

1.2 試劑

MCP-1、VEGF-C抗體為兔多克隆抗體，工作濃度為1:100，購自Abcam公司；SP免疫組化試劑盒(兔)及DAB顯色試劑盒均選自上海研卉生物科技有限公司。

1.3 免疫組化方法

整個染色方法參照 SP 試劑盒產品說明書進行,抗體均以0.1M的磷酸鹽緩沖液(Phosphate-Buffor silutlon,PBS,pH 7.4)稀釋 , 濃度為1：100 , 以PBS替代一抗作陰性對照。0.01M枸櫞酸鹽緩沖液中微波處理進行抗原修復 ,DAB 顯色, 蘇木素復染, 中性樹膠封片 , 顯微鏡觀察。

1.4 結果判斷及統計學方法

兩種因子表達均出現于細胞漿中，棕黃色顆粒為陽性，采取半定量積分方法。用高倍鏡查看所有切片，一張切片任意選取5個視野，按照胞漿染色程度劃分為四個等級：陰性細胞(-)無顯色(0)；弱陽性細胞(+)顯色為淺黃色(1)；中度陽性細胞()顯色為棕黃色(2)；強陽性細胞()顯色為深棕黃色(3)。按照IS(intensity score)=Σ{(0×F0)+(1 ×F1)+(2×F2)+(3×F3)}，F=%×5 視野。計算所有切片的染色程度。使用 SPSS17.0 統計軟件包,通過卡方檢驗(χ2)法檢驗，確定P<0.05為差異存在統計學意義，二者相關性用SPSS17.0等級相關分析。

2 結果

2.1結腸癌組MCP-1、VEGF-C與對照組的水平對比

結腸癌組MCP-1的陽性率為50%，比對照組顯著升高，方差分析提示有統計學意義。結腸癌組VEGF-C的陽性率為48.3%，對比對照組顯著升高，方差分析提示有統計學意義。

表1結腸癌組MCP-1、VEGF-C與對照組的水平對比(n=60)

MCP-1陽性(%)χ2值PVEGF-C陽性(%)χ2值P癌旁正常組織組13(21.7)10.4740.00114(23.3)8.1550.004結腸癌組30(50)29(48.3)

2.2 MCP-1及VEGF-C與結腸癌臨床病理參數的關系

MCP-1、VEGF-C的表達與癌腫的TNM分期關系密切，與分化差異無關聯。TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期組中MCP-1陽性率(33.3%)顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組(61.1%)，差異均有統計學意義(P<0.05)。TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期組中VEGF-C陽性率(29.2%)顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組(61.1%)，差異均有統計學意義(P<0.05)。高分化組中MCP-1陽性率(55.3%)與中-低分化組陽性率(40.9%)之間無明顯差異，無統計學意義(P>0.05)。高分化組中VEGF-C陽性率(42.9%)與中-低分化組陽性率(61.1%)之間無明顯差異，無統計學意義(P>0.05)。

表2 MCP-1及VEGF-C與結腸癌臨床病理參數的關系

臨床病理類型nMCP-1陽性(%)χ2值P值VEGF-C陽性(%)χ2值P值臨床分期 Ⅰ～Ⅱ期248(33.3)4.4440.0357(29.2)5.8840.015 Ⅲ～Ⅳ期3621(61.1)22(61.1)分化程度 高分化3821(55.3)1.1480.28418(42.9)1.6810.195 中-低分化229(40.9)11(61.1)

2.3 MCP-1與VEGF-C在結腸癌表達中的相關性分析

本研究顯示，在50例結腸癌組織中MCP-1和VEGF-C同時陽性表達20例；MCP-1(+)而VEGF-C(-)8例；MCP-1(-)而VEGF-C(+)5例；兩者同時陰性表達17例。經SPSS17.0等級相關性分析顯示，MCP-1與VEGF-C表達呈正相關(r=0.5，P=0.001)。

表5 MCP-1、VEGF-C在結腸癌中的相關性分析

注：r=0.5，P=0.001

3 討論

結腸癌(colon cancer)是全球范圍內發病率較高的惡性疾病之一，以41～65歲發病率高。從病因學角度分析多半以上來自腺瘤病變，從形態學角度分析可分為增生、腺瘤及癌變各階段。盡管結腸癌根治性手術及術后的綜合治療已經逐漸成熟，但結腸癌術后生存期仍不樂觀，控制均布擴散及遠處移行是改善結腸癌預后的重要因素。 已有的相關實驗研究[4，5]表明，結腸癌腫瘤細胞生長以及癌細胞的轉移，與趨化因子的調控有密切關系。趨化因子是一種可以趨動細胞定向挪動的小分子分泌蛋白，通過增加癌細胞數量及遠處擴散, 提高各種活化因子的分泌和血管形成，從而促使了腫瘤的進展。MCP-l作為趨化因子眾多亞家族成員之一，可被多種惡性腫瘤所合成和分泌，擁有極為重要的生物學功能，主要通過驅動位于血管的單核細胞轉變為位于腫瘤的巨噬細胞來發揮主要作用，參與腫瘤組織炎癥細胞的浸潤，直接調控腫瘤細胞生存的內環境。張哲[6]等研究指出MCP-1通過促使單核細胞轉變為巨噬細胞(TAM),分泌VEGF-C等血管生成因子。VEGF-C在腫瘤發生發展中的作用主要有兩個方面，一是：VEGF-C與其特異性受體VEGFR-2結合促進腫瘤血管的發生；二是：VEGF-C通過與VEGFR-3的結合可促進淋巴管的生成[7,8]。本實驗研究顯示：MCP-1與VEGF-C的陽性率在實驗組明顯高于對照組，說明MCP-1和VEGF-C在結腸癌的發病進程中有著明顯的意義。深入探索MCP-1、VEGF-C與結腸癌TNM分期、分化差異的關聯中得知，二者共同影響著結腸癌的病理進展過程，兩種因子的表達升高提示結腸癌TNM分期不良，說明MCP-1與VEGF-C是影響結腸癌出現局部擴散及遠處移行的重要條件，對于結腸癌的整個演變過程起顯著作用。已有研究[9～11]結果證實MCP-1與VEGF-C協同促進胃癌、膀胱癌、卵巢癌的浸潤與轉移。本次實驗在對于二者共同作用于結腸癌的相關性分析結果得到相同論證，更好的證明了兩種因子在腫瘤演變過程中的協同關系，為深入了解他們的相互作用機理提供理論依據。

綜上所述，該實驗通過臨床分析與SP免疫組化測定，初步闡明了VEGF-C與MCP-1在結腸癌病理組織中的一般水平，充分證實VEGF-C、MCP-1的表達與結腸癌的TNM分期之間有著密切聯系，提示MCP-1與VEGF-C的水平可為結腸癌的診療及預后提供參考意義。

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王長龍(1990～)男，黑龍江綏化人，在讀碩士研究生。

劉振平(1962～)男，黑龍江佳木斯人，主任醫師，碩士研究生導師。E-mail：liuzhenping1962@163.com。

王長龍,孫盛洋,劉振平

(佳木斯大學附屬第一醫院普外三科，黑龍江 佳木斯 154003)

R446.8

B

1008-0104(2017)05-0034-02

2016-09-12)