重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+ Re-8株）免疫抗體監測與分析

周 偉 徐小艷 徐正軍 王相子 開 妍 陳昌海

（溧水區農業局，江蘇溧水 211200）

重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+ Re-8株）免疫抗體監測與分析

周 偉 徐小艷 徐正軍 王相子 開 妍 陳昌海

（溧水區農業局，江蘇溧水 211200）

為評估我省使用重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）以來的雞群免疫效果，筆者對2016年全省春防、秋防、定點監測及日常監測所采集的規模養雞場及散養戶樣品進行了免疫抗體檢測與分析。檢測結果表明，江蘇省H5亞型高致病性禽流感Re-6株平均免疫抗體合格率為96.39%；Re-7株平均免疫抗體合格率為95.75%；Re-8株平均免疫抗體合格率為95.56%，均超過國家和我省規定的免疫要求。大部分地區的免疫抗體合格率呈現較高的一致性。在種雞場、商品代飼養場（戶）、散養戶中，種雞場的免疫效果最好。

高致病性禽流感；血凝抑制試驗；免疫抗體合格率

禽流感是由A型流感病毒引起的以呼吸系統癥狀為主要表現的禽類傳染性疾病綜合征。根據禽流感病毒致病性的不同，可以將禽流感分為高致病性、低致病性、無致病性禽流感，H5亞型毒株所引起的疾病稱為高致病性禽流感（High Pathogenic Avian Influenza，HPAI），它不僅導致禽類發病死亡，而且可以感染人，使人發病死亡，因而是一種需要嚴格控制的人畜共患病[1-2]。

當前我國H5亞型AIV主要流行譜系為第2.3.4.4分支、第2.3.2.1c分支和第7.2分支，其對應的疫苗分別為Re-8、Re-6和Re-7。其中，第2.3.4.4分支又可細分為第2.3.4.4a、2.3.4.4b、2.3.4.4c、2.3.4.4d四個小分支，Re-8疫苗株屬于第2.3.4.4d分支[3]。H5亞型高致病性禽流感病毒具有高度變異性，為提高疫苗與現流行毒株的匹配性，2014年底，農業部批準了針對該分支病毒的Re-8疫苗，我省2016年將對雞群使用的重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）替換為重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）。為評估我省使用該疫苗后的雞群免疫效果，更好地開展禽流感防控工作，筆者對2016年更換疫苗后全省春防、秋防、定點監測及日常監測所采集的規模養雞場及散養戶樣品進行了免疫抗體檢測與分析[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品來源：2016年江蘇省動物疫病預防控制中心在開展重大動物疫病春防、秋防、定點監測、日常監測等工作中，隨機抽檢的雞血清樣品942份，所檢雞群均免疫了重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株），免疫密度達100%。樣品來自全省13個市25個縣（市、區）49個鄉鎮的174個養雞場（戶）。

檢測試劑：禽流感病毒H5亞型（Re-6株）血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清；禽流感病毒H5亞型（Re-7株）血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清；禽流感病毒H5亞型（Re-8株）血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清，均由哈爾濱維科生物技術開發公司提供，自配1%雞紅細胞。

1.2 方法

參照《高致病性禽流感診斷技術》GB/T 18936-2003中規定的血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗技術，首先采用血凝試驗（HA）對禽流感病毒H5亞型Re-6株、Re-7株、Re-8株進行血凝價測定，再通過血凝試驗結果配制4HAU的病毒抗原，最后采用血凝抑制試驗（HI）檢測樣品中禽流感病毒H5亞型Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體。

1.3 結果判定

以完全抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數作為HI滴度，即血清效價。雞免疫21d后，抗體效價≥24判為免疫合格；抽檢雞群免疫抗體合格率≥80%判為合格。

2 檢測結果

2.1 各地區的疫苗免疫抗體合格率

對13個市的試驗結果進行比較后可見：13個市的高致病性禽流感免疫抗體合格率均高于農業部規定的70%和我省規定的80%的標準。其中3市、4市、9市、10市等4個市H5亞型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均達到100%。詳見表1。

表1 各市免疫抗體檢測結果

2.2 不同類別雞群的免疫抗體合格率

2016年，共檢測各類養殖場戶174個。檢測種雞場3個，Re-6株檢測樣品45份，合格44份，合格率97.78%；Re-7株檢測樣品45份，合格45份，合格率100%；Re-8株檢測樣品45份，合格45份，合格率100%。檢測商品代飼養場（戶）25個，Re-6株檢測樣品354份，合格340份，合格率96.05%；Re-7株檢測樣品356份，合格345份，合格率96.91%；Re-8株檢測樣品349份，合格333份，合格率95.42%。檢測散養戶146個，Re-6株檢測樣品542份，合格523份，合格率96.49%；Re-7株檢測樣品541份，合格512份，合格率94.64%；Re-8株檢測樣品530份，合格505份，合格率95.28%。詳見表2。

2.3 不同時間段的免疫抗體合格率

2016年上半年全省H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測樣品121份，合格117份，合格率為96.69%，Re-7株共檢測樣品121份，合格113份，合格率93.39%，Re-8株共檢測樣品119份，合格107份，合格率89.92%；2016年下半年H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測樣品820份，合格790份，合格率96.34%，Re-7株共檢測樣品821份，合格789份，合格率96.10%，Re-8株共檢測樣品805份，合格776份，合格率96.40%。詳見表3。

共檢測雞血清樣品2807份，合格2692份，合格率95.90%。其中H5亞型高致病性禽流感Re-6株共檢測樣品941份，合格907份，合格率96.39%，Re-7株共檢測樣品942份，合格902份，合格率95.75%，Re-8株共檢測樣品924份，合格883份，合格率95.56%。

3 討論

從2016年江蘇省13個市的H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測結果看，Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均超過國家標準（70%）和我省標準（80%），且免疫抗體整體水平較高，說明我省自推廣使用重組禽流感病毒H5亞型三價滅活苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）以來，H5亞型高致病性禽流感整體免疫情況良好。

具體對比各市檢測結果，13個市H5亞型Re-6株平均免疫抗體合格率為96.39%，其中最高的市為100.00%，最低的市為85.25%； Re-7株平均免疫抗體合格率為95.75%，其中最高的市為100.00%，最低的市為87.10%； Re-8株平均免疫抗體合格率為95.56%，其中最高的市為100.00%，最低的市為85.00%。13個市H5亞型高致病性禽流感Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率離散程度較小，合格率低于90%的只有1個市，說明我省絕大多數地區均按照合理的免疫程序、正確的接種方法開展免疫，免疫效果良好。從圖1可見，絕大多數市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率較整齊，但1市、7市Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率差異較大，導致這一結果的原因可能是這些地區的某些雞群由于品種、健康狀況等因素，對同一疫苗不同疫苗株的免疫反應強弱不一致，或是受到之前接種的禽流感二價苗（Re-6株+ Re-7株）干擾，影響對三價苗（Re-6株+ Re-7株+ Re-8株）的反應，對于這一類場點，應當加強養殖管理，加大日常監測，及時補免，降低疫情隱患。

表2 不同類別雞群的免疫抗體檢測結果

表3 不同時間段免疫抗體檢測結果

圖1 13個市重組禽流感三價苗免疫抗體合格率分布

2016年共檢測174個養雞場（戶）的樣品，其中種雞場3個，Re-6株平均免疫抗體合格率為97.78%，Re-7株平均免疫抗體合格率為100%，Re-8株平均免疫抗體合格率為100%，3個種雞場各株型免疫抗體合格率均高于80%；商品代飼養場（戶）25個，Re-6株平均免疫抗體合格率為96.05%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有23個，占92%，Re-7株平均免疫抗體合格率為96.91%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有24個，占96%，Re-8株平均免疫抗體合格率為95.42%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有22個，占88%；散養戶146個，Re-6株平均免疫抗體合格率為96.49%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有136個，占93.15%，Re-7株平均免疫抗體合格率為94.64%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有128個，占87.67%，Re-8株平均免疫抗體合格率為95.28%，平均免疫抗體合格率高于80%的場有132個，占90.41%。從圖2可見：1.各類型場點雞群Re-6株、Re-7株、Re-8株免疫抗體合格率均處于高位，種雞場、存欄量大于1萬只的商品代養殖場（戶）的H5亞型禽流感疫苗整體免疫效果較存欄量小于1萬只的商品代飼養場（戶）、散養戶好。2.各類型場點群體合格率（免疫抗體合格率≥80%的場點數/監測場點數×100%）均處于高位，種雞場、存欄量大于1萬只的商品代養殖場（戶）群體合格率較存欄量小于1萬只的商品代養殖場（戶）、散養戶高。分析原因，可能有以下幾方面：（1）種雞場和大、中型商品代養殖場（戶）對疫病防控的意識較強，多按合理程序免疫；而部分小型商品代養殖場（戶）、散養戶缺乏對雞群日齡、健康狀況、免疫檔案的管理，免疫程序不規范或通過春、秋季開展的集中免疫行動進行免疫，造成漏免或補免不及時。（2）種雞場和大、中型商品代養殖場（戶）養殖環境優、養殖管理嚴格、動物營養好、健康少病，免疫應激小，抗體產生早且維持時間長；而部分小型商品代養殖場（戶）、散養戶養殖環境、養殖管理、動物營養、健康狀況相對較差，免疫應激大，影響免疫效果。（3）種雞場和大、中型商品代養殖場（戶）疫苗保存和接種方法得當，免疫效果好；而部分小型商品代養殖場（戶）、散養戶疫苗保存不符合要求或在注射疫苗時稀釋方法不當、稀釋后未及時使用等導致免疫失敗或效果不好。綜上所述，規范的養殖管理、規范的免疫程序、及時的免疫監測、妥善的疫苗保存、正確的接種方法都可以提高免疫效果，多方并舉對有效控制高致病性禽流感更為有利。

圖2 不同類型場點抗體合格率、群體合格率分布圖

2016年上半年，H5亞型Re-6株免疫抗體合格率為96.09%，Re-7株免疫抗體合格率為93.39%，Re-8株免疫抗體合格率為89.92%；2016年下半年，H5亞型Re-6株免疫抗體合格率為96.34%，Re-7株免疫抗體合格率為96.10%，Re-8株免疫抗體合格率為96.40%。比較發現，重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）的持續使用對抗體水平產生了以下影響：1.三種毒株免疫抗體合格率均有所提高，特別是Re-8株，合格率提高了6.48個百分點。2.三種毒株免疫抗體合格率之間的差異顯著縮小。表明重組禽流感病毒H5亞型三價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）替換并持續使用后，H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對Re-6株、Re-7株平均免疫抗體合格率的影響逐漸減小，Re-8株免疫抗體水平不斷提高，推動我省高致病性禽流感免疫抗體水平持續向好。

[1] 蘭德增.高致病性禽流感[J].生命科學，2005，17（1）：60-63.

[2] 徐小艷.重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗免疫抗體監測與分析[J].畜牧與獸醫，2011，43（6）：50-52.

[3] 蔣文明.H5亞型高致病性禽流感病毒抗原性變異分析[J].中國動物檢疫，2016，33（9）：27-32.

[4] 王相子.重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫抗體監測分析[J].獸醫導刊，2017，264（1）：198-199.