規模豬場副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物試驗

張愛朝

（平頂山市飼草飼料管理站，河南平頂山 467000）

規模豬場副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物試驗

張愛朝

（平頂山市飼草飼料管理站，河南平頂山 467000）

從數例疑似副豬嗜血桿菌病豬的病料中分離袋3株細菌，通過細菌形態特征、培養特性和生長特性的觀察，確診該病的病原菌是副豬嗜血桿菌。同時，對分離菌進行藥敏試驗，為今后防控該病提供試驗依據。

副豬嗜血桿菌；分離；鑒定；藥敏試驗

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（HPS）引起豬的以纖維素性漿膜炎、多發性關節炎和腦膜炎為特征的傳染病[1]。臨床主要癥狀為發熱、呼吸困難、關節腫脹、跛行、運動不協調、不愿活動等副豬嗜血桿菌只感染豬，一般多發生于斷奶前后及保育豬，感染高峰期通常見于4周～6周，病死率可達50%，給養豬業帶來巨大損失。為了解羅山縣該病流行血清型情況，本試驗對疑似副豬嗜血桿菌病病料分離并鑒定，并進行藥敏試驗。

1 材料與方法

1.1 病料

無菌采取疑似副豬嗜血桿菌病豬心包液、腹腔液、關節液、呼吸道分泌物等。

1.2 試驗試劑與培養基

NAD鮮血瓊脂培養基、5%血液巧克力瓊脂平板、2%蛋白胨瓊脂平板等其他基礎培養基按常規試驗方法制備。半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管購自杭州華康微生物試劑有限公司。氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林等抗生素藥敏紙片購自上海博亞生物技術公司。

1.3 標準菌株

金黃色葡萄球菌，購自中國獸醫藥品監察所。

1.4 細菌純化培養

挑去病料接種于含NAD鮮血培養基，37℃培養24～48h，然后，再挑去圓形、光滑濕潤、無色透明的菌落分別接種于5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板培養基，進行細菌純化培養，觀察細菌生長形態。

1.5 菌體形態及染色

挑去上述純化培養物，涂片，革蘭氏染色，鏡檢，觀察觀察細菌形態。

1.6 衛星現象觀察

無菌采集上述菌落，接種于2%蛋白胨瓊脂平板血平板上，再挑取金黃色葡萄球菌作兩條平行劃線在血平板上，置CO2培養箱，37℃培養18～24h后觀察細菌生產情況。

1.7 生化鑒定試驗

將分離菌單個菌落分別接種于半乳糖、蔗糖、甘露醇、果糖、葡萄糖、木糖等微量生化鑒定管，置CO2培養箱37℃培養24h，觀察反應結果。

表1 分離菌生化特性

1.8 藥敏試驗

按常規方法進行，將分離到的單個細菌菌落均勻涂于氧氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林、環丙沙星、替米考星等10種抗生素藥敏試紙，37℃培養24h后，觀察測定抑菌圈的大小。

2 結果

2.1 菌落形態及鏡檢特征

革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陰性菌，短桿狀多見，也有球狀、桿狀、長絲狀。5%血液巧克力瓊脂平板和2%蛋白胨瓊脂平板上可見呈露珠、閃光、無色透明、圓形、光滑濕潤、直徑1 mm左右的小菌落。分離到的3株細菌被別命名為LS1、LS2、LS3。

2.2 衛星現象觀察

在金黃色葡萄球菌兩側有菌落生長，距葡萄球菌近的較大，遠的較細小，直到不生長。表明分離菌均有衛星現象。

2.3 生化特性結果

生化特性結果見表1

表1可以看出，分離到的3株細菌都符合副豬嗜血桿菌生化特性[2]，進一步證明3株分離菌為副豬嗜血桿菌。

2.4 藥敏試驗結果

3株分離細菌對頭孢唑啉、頭孢拉定、替米考星、慶大霉素、氧氟沙星均高度敏感；對阿米卡星均中度敏感；對諾氟沙星、丁胺卡那霉素、阿莫西林呈低度敏感；對鏈霉素、多西環素、金霉素、四環素、均為耐藥。

3 討論與小結

本試驗表明，從羅山縣養豬場分離到的3株細菌為副豬嗜血桿菌。這為今后羅山豬病診斷、防控該病提供了試驗依據。

對副豬嗜血桿菌的預防主要是注射疫苗，但是由于副豬嗜血桿菌血清型比較多，按Kieletein-Rapp-Gabrielson（KRG）血清分型方法，目前副豬嗜血桿菌至少可分為15個血清型[3]，而不同血清型之間不存在交叉免疫，所以疫苗不能達到很好的免疫效果，對該病的治療臨床上目前還是以使用抗生素為主。但是由于抗生素的耐藥性，不同菌株對同一種抗生素的敏感性有很大差異，因此，要在進行藥敏試驗的基礎上，選擇藥物，不能長期、大劑量使用同一種藥，要交替輪換使用。

[1] 馬增軍.副豬嗜血桿菌重要生物學特性測定[J].黑龍江畜牧獸醫，2005，（1）：28-29.

[2] 陸承平.獸醫微生物學[M].北京：中國農業大學出版社，2001：258-261.

[3] 蔡保祥.家畜傳染病學[M].北京：中國農業出版社，2001：258-259.