微生物檢測結果的報告和不確定度的應用

沈泓++李玨++孫晗

摘 要：檢測報告的質量直接影響客戶對報告的理解和使用，在微生物領域，除了做好檢測過程的質量控制和保證外，也應重視對結果報告的質量保證工作。本文在微生物檢測結果的表示、評定和不確定度的應用三方面進行探討。

關鍵詞：微生物檢測；不確定度；結果評定

中圖分類號：TS207.4 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2017）20-0235-01

檢測報告的質量直接影響客戶對報告的理解和使用，在微生物領域，除了做好檢測過程的質量控制和保證外，也應重視對結果報告的質量保證工作。

1 微生物檢測結果的表示

在微生物檢驗實驗室結果的表示中，菌落計數、MPN值和定性結果表示方式不同。

菌落計數結果表示：通常用菌落形成單位CFU（colony forming unit）表示菌落計數結果，如：“CFU/g”（一般是固體樣品），“CFU/mL”（一般是液體樣品），“CFU/cm2”（表面積取樣法時）和“CFU/雙”（如加工人員的手）等，也有用“個/g”，“個/mL”表示。菌落計數數字的表示需要符合相關標準的具體要求。如GB 4789.2-2016對菌落總數報告的要求為：菌落數小于100 CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。菌落數大于或等于100 CFU時，第3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替位數。也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約。如：20532CFU/g修約為21000CFU/g，也可用2.1×104CFU/g來表示。

MPN值結果表示：有一些細菌檢測結果用最大可能值MPN（Most Probable Number）表示，如：“MPN/g”，“MPN/mL”，“MPN/100g”和“MPN/100mL”等。MPN是表示樣品中活菌密度的估算值，并不是樣品中活菌數的真值。MPN計數法是基于泊松分布的一種間接計數方法，適用于測定混雜微生物群落中含量較低的微生物。通過確證的陽性管數，檢索MPN表來獲得檢驗微生物的最可能數（MPN）。MPN值可以根據稀釋度檢樣量的不同，對表內數字進行相應得降低或增加。

定性檢測結果的表示：在微生物檢驗實驗室中，一種常見的結果表示方式是對定性檢測結果的報告。如：“陰性或陽性”，“檢出或未檢出”。在定性結果表示時有時會標注取樣量，如“陰性或陽性/25g”，“陰性或陽性/100g”等。定性檢測的目標需要明確，如根據GB 4789.42檢測結果報告“檢出諾如病毒基因”或“未檢出諾如病毒基因”。

2 微生物檢測結果的評定

根據微生物學指標值或限量值對檢測結果進行判定，還應考慮抽樣方法，以及評定的范圍，是對某一樣品進行評定，還是對整批產品進行評定。國際食品微生物標準委員會（The International Committee on Microbiological Specification for Food，ICMSF）制定的食品微生物學分析采樣方法，我國目前也逐漸采納了與國際接軌的ICMSF采樣方案。ICMSF提出的采樣基本原則，根據各種微生物本身對人的危害程度各有不同和食品經不同條件處理后，其危害度變化情況來設定抽樣方案并規定其不同采樣數。ICMSF方法是從統計學角度，依據一批產品檢查多少個檢樣才能夠有代表性，才能客觀地反映該批產品的質量的原則，其抽樣方法包括二級法和三級法。二級法設有n、c和m值，三級法設有n、c、m和M值。GB 4789.1-2016對其有明確解釋：

n：同一批次產品應采集的樣品件數；

c：最大可允許超出m 值的樣品數；

m：微生物指標可接受水平限量值（三級采樣方案）或最高安全限量值（二級采樣方案）；

M：微生物指標的最高安全限量值。

注1：按照二級采樣方案設定的指標，在n個樣品中，允許有≤c個樣品其相應微生物指標檢驗值大于m值。

注2：按照三級采樣方案設定的指標，在n個樣品中，允許全部樣品中相應微生物指標檢驗值小于或等于m值；允許有≤c個樣品其相應微生物指標檢驗值在m值和M值之間；不允許有樣品相應微生物指標檢驗值大于M值。

如GB10765-2010中對嬰兒配方食品中的阪崎腸桿菌采用二級采樣的方案，其限度為n=3，c=0，m=0/100g，即抽樣的3個樣品中均不能檢出該致病菌。而對大腸菌群的檢驗采用的是三級抽樣的方案，其限度為n=5，c=2，m=10，M=100。

因為二級采樣對致病菌“零容忍”，對阪崎腸桿菌的檢驗可以看作是定性檢驗，直接報告結果為“檢出”或“未檢出”，有任何1個樣品檢出，則該批次乳粉不合格。

對大腸菌群的檢驗可以分為以下幾種情況：若5個樣品大腸菌群數均≤10CFU/g，則該批次產品合格；若≤2個樣品大腸菌群數在10CFU/g-100CFU/g，則該批次產品合格；若有3個樣品大腸菌群數>10CFU/g，則該批次乳粉全部不合格.若有任何1個樣品大腸菌群數>100CFU/g，則該批次乳粉都不合格。

對于固體樣品，若平板計數法的培養計算結果為5，低于檢出限，應以小于檢出限數值報告，即為<10CFU/g。

3 不確定度的應用

當不確定度與檢測結果的有效性或應用有關，或客戶的指令中有要求，或不確定度影響到與規范限度的符合性時，則檢測報告中還需要有關不確定度的信息。測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性、與測量結果相聯系的參數。測量不確定度不能用于被測量值的修正，它可以表征被測量值的合理范圍。

在APLAC TC 005：2004中指出在對微生物測量不確定度評定方面，微生物測試有四種主要類型：常規定量測試、MPN法、定性測試和專家測試如醫藥測試等。各種不確定度的評定方法是用于常規定量測試的。

在CNAS-CL09：2013中指出在微生物檢測領域，某些情況下，一些檢測無法從計量學和統計學角度對測量不確定度進行有效而嚴格的評估，這時至少應通過分析方法，考慮它們對于檢測結果的重要性，列出各主要的不確定度分量，并作出合理的評估。有時在重復性和重現性數據的基礎上估算不確定度也是合適的。

最簡單的情況是規范本身清楚地說明測得值在給定的置信水平下的不確定度擴展后不應超出規定的限值或在規定的限定值內。

在多數情況下，規范要求在證書或報告中做出符合性聲明，但沒有指明進行符合性評價時需考慮不確定度的影響。在這種情況下，可以在不考慮不確定度的情況下，根據測得值是否在規定限制范圍內做出符合性判斷。

在客戶與實驗室之間的協議或實施準則或規范中可能已聲明其采用方法的準確性是足夠的，且在判斷符合性時，可以忽略不確定度。

當沒有相應的準則、測試規范、客戶要求、協議或實施規則時，可采用下列方法：

（1）當測得值以95%的置信水平延伸擴展不確定度時仍不超過規定限值時，則可以聲明符合規范要求。

（2）如果測得值向下延伸擴展不確定度后，仍超出規定限值的上限，則可以聲明不符合規范要求。

（3）如果測得值向上延伸擴展不確定度后仍低于規定限值的下限，則可以聲明不符合規范要求。

（4）在不可能測試同一個產品單元的多個樣品，或不可能進行重復測試的情況下，測得的單一值若非常接近規定限值，延伸擴展不確定度后高于上限或低于下限，這時在規定的置信水平上不能確定是否符合規范。應當報告測得值與擴展不確定度，并聲明無法證實符合或不符合規范。

如果可以對同一產品單元的兩個或多個樣品進行測試，或可以對同一樣品進行重復測試，或可以對留樣進行重復測試，則建議做重復測試。估算出對同一樣品所有測得值的平均值或所有重復測試的平均值和該平均值的不確定度，然后做出相應的判斷。

（5）如果測得值恰好為規定限值，則在指定的置信度水平上不可能做出是否符合規范的聲明。應當報告測得值與擴展不確定度，并說明在指定的置信度水平上無法證實符合或是不符合規范。endprint