錦州市手足口病毒核酸檢測結果分析

楊飛

摘要：目的 分析錦州市手足口病病原學檢測結果，為臨床手足口病防治提供依據。方法 選取100例2015年錦州市臨床臨床診斷為手足口病病例的咽拭子標本，提取樣本核酸，用RT-PCR方法檢測柯薩奇病毒A16型（CA16）、腸道病毒71型（EV71）、和非EV71、CA16的其他腸道病毒（EV）。結果 2015年3～12月份共采集手足口病病例標本100份。核酸檢測結果顯示，陽性標本86例（86.00%）；在2015年3～12月均有手足口病患者出現，3～5月份病例數急劇增加，5月份為最高峰，陽性檢出率為45.35%，6～12月份病例數逐漸下降；男孩核酸檢測陽性率顯著高于女孩（P<0.05）；在不同年齡組之間，1歲組，EV71、EV陽性數構成比均為年齡組中最高。結論 錦州市2015年3～12月份均有手足口病發生，病原以EV71感染為主，在不同月份、年齡、性別上發病率存在一定差異。

關鍵詞：手足口病；柯薩奇病毒A16型；腸道病毒71型

中圖分類號：R440 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）21-0184-02

Analysis of Nucleic Acid Test Results of Hand-Foot-Mouth Virus in Jinzhou City

YANG Fei

（Jinzhou Disease Prevention and Control Center，Jinzhou 121000，Liaoning，China）

Abstract：Objective To analyze the results of hand foot mouth disease in Jinzhou city，provide the basis for clinical prevention and treatment of HFMD.Methods 100 cases of clinical diagnosis in Jinzhou city in 2015 HFMD cases of throat swab specimens，samples of nucleic acid，RT-PCR was used to detect Coxsackie virus type A16（CA16），enterovirus 71（EV71），and non EV71，other intestinal virus CA16（EV）.Results From March to December in 2015 were collected 100 samples of HFMD cases.Nucleic acid detection results showed that the positive specimens of 86 cases （86.00%）；From March to December in 2015，there were hand，foot and mouth disease patients，the number of cases increased from March to May，the highest peak in May，the positive detection rate was 45.35%，from June to December the number of cases were decreased；the positive rate of boys was significantly higher than that of nucleic acid detection girl（P<0.05）；among different age groups，1 years old group，EV71，the constituent ratio were the highest in EV age group.Conclusion Hand foot mouth disease occurred in Jinzhou from March to December in 2015.The main cause of infection was EV71 infection，and there were some differences in age，sex and incidence in different months.

Key words：Hand，foot and mouth disease；Coxsackie virus A16；Enterovirus 71 type

手足口病是多種病毒引起的，患者主要表現為皮疹或皰疹，發病部位集中在手、足、口臀部位。手足口病是一種自限性疾病，一般可在7 d內痊愈，但少部分患兒病情嚴重可出現心肌炎、腦膜炎等合并癥，病死率較高。研究指出[1]，引起手足口病的主要病原為CA16、EV71。近年來，錦州市手足口病發病率不斷上升，為掌握錦州市手足口病病原學及特點，本研究中對錦州市100例臨床診斷病例標本進行EV71和CA16核酸檢測，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取100例2015年3～12月份錦州市臨床臨床診斷為手足口病病例的咽拭子標本，其中女44例，男56例，年齡6個月～7歲。標本為患者咽喉部分泌液或皰疹液，將標本置于Hanks病毒采樣管， 劇烈震蕩10 min，3000 rpm離心30 min，取上層清液提取核酸，若不能即時檢測則保存在-20 ℃冰箱內。

1.2方法

按照衛生部手足口病預防控制指南要求，采用RT-PCR方法檢測患者咽拭子標本中病原核酸。

1.3主要試劑及以期

RNA提取試劑盒：瑞士Roche公司，Roche High Pure Viral RNA Kiit；熒光定量PCR試劑盒：中山達安基股份有限公司，Coxsackievirus virus A1 6 real time RT-PCR kit，Enterovirus type71 realtime RT-PCR kit；美國ABI，Stepone-PlusTM Real-Time PCR System。endprint

1.4病毒核酸檢驗

試劑盒說明操作進行病毒RNA提取；Real Time RT-PCR擴增預混合試劑操作按說明書進行，反應條件有：逆轉錄及預擴增：40 ℃，25 min，90 ℃，3 min；擴增：93 ℃，15 s，55 ℃，45 s，共40個循環。Ct≤34.9，且樣品FAM通道有明顯擴增曲線為陽性[2]。

1.5統計學處理

采用SPSS15.0軟件分析及處理數據，以百分比（%）表示計數資料，組間比較以？字2檢驗，當P<0.05，具有統計學意義。

2結果

2.1核酸檢測結果分析

2015年3～12月份共采集手足口病病例標本100份。核酸檢測結果顯示，陽性標本86例（86.00%），其中普通病例樣本81例，重癥樣本5例。其中，EV71陽性標本數64份，陽性率為74.40%，重癥樣本4例，占重癥陽性的80.00%；其次為其他腸道病毒（EV）陽性數18例，陽性率為20.90%，最后為CA16，檢出陽性標本4例，陽性率為4.70%，1例為重癥樣本，占重癥陽性的20.00%。

2.2不同性別、年齡核酸檢測結果分析

86份陽性病例標本中，女孩病例28例（32.60%），男孩病例58例（67.40%），男孩核酸檢測陽性率顯著高于女孩（P<0.05）。在不同年齡組之間，1歲組，EV71、EV陽性數構成比均為年齡組中最高，2歲年齡，CA16陽性率高于其他年齡組，其次為EV和EV71，低于1歲組，但較其他年齡組要高，見表1。

2.3不同月份核酸檢測結果

在2015年3～12月均有手足口病患者出現，其中3～5月份病例數急劇增加，5月份為最高峰，5月份陽性檢出率為45.35%，6～12月份病例數逐漸下降，9月份時稍有升高，但總體呈下降趨勢，見表2。

3討論

目前手足口病流行較普遍，主要在亞洲地區流行，已成為嚴重的公共社會問題。準確對手足口流行的病毒進行檢測，可對手足口病的預防與治療提供指導意義。采用實時熒光定量RT-PCR檢測手足口患者糞便中或咽拭子中的病原體，每份標本都是單管封閉式擴增檢測，使標本間交叉感染的風險大大降低，且操作方便簡便，能夠快速地發出報告[3-4]。通過實驗室檢測結果來看，2015年引起本市手足口病的腸道病毒以EV71為主，其次為CA16；而在5例重癥病例中EV71陽性4例，占重癥總陽性的80%，顯示重癥病例以EV71病毒感染為主，表明該病毒傳染性強，致病率高，患兒病情進展快，易引起神經毒性，可侵犯心、腦、肺等重要器官，患兒死亡率高。

手足口病四季均口發病，但冬季發病較少，最易發病季節為春末夏初。本研究顯示，2012年本市3～12月均有發病，發病月份以5分月為最高峰，至7份以后發病逐漸下降，但仍以EV71引起的感染為主。在男女比例上，男孩發病明顯高于女孩，與該病主要經糞-口和呼吸道飛沫傳播，并且污染的手、日常用品和食品均會傳播病毒，而男孩相對好活動，使傳染的幾率大大增加。從年齡上看，1歲組，EV71、EV陽性數構成比均為年齡組中最高，2歲年齡，CA16陽性率高于其他年齡組，其次為EV和EV71，低于1歲組，但較其他年齡組要高，可見1～2歲仍是手足口病的高發年齡段，其原因為此階段兒童對病毒的防御能力相對較差，故發病率較高，因此需要特別加強對該年齡段兒童手足口病病原的檢測，以便能夠早期發現病例，并采取隔離措施，以防疾病進一步傳播。因此，錦州市手足口病2015年3～12月份都有病例發生，腸道病毒仍以EV71為主，主要發病人群分布于1～2歲年齡段，且5～6月份為手足口的發病高峰期。手足口病患兒感染后不能得到終生免疫，且再次發病的幾率仍較高。而目前尚無此病防御疫苗，因此應加強對手足口病的預防和治療。提高實驗室病毒檢出率，并有效鑒別診斷RV71感染病例，有助于臨床選擇臨床治療方案，可有效減少重癥和死亡病例[5]。

綜上所述，錦州市2015年3～12月份均有手足口病發生，病原以EV71為主，在不同月份、年齡、性別上發病率存在一定差異。

參考文獻：

[1]陳國清，邵榮標，王海燕，等.2010年鹽城地區手足口病例腸道病毒型別調查[J].江蘇預防醫學，2012，23（2）：21-22.

[2]滕淑，趙仕勇，韋翊，等.手足口病患兒大便中病毒核酸檢出時間觀察[J].中華兒科雜志，2013，51（10）：787-792.

[3]龍輝，謝建紅.單管多重RT-PCR檢測腸道病毒核酸及其臨床應用[J].國際檢驗醫學雜志，2016，37（11）：1497-1499，1502.

[4]邱寶強，顏云盈，李梅，等.重癥手足口病180例病原學檢測及腸道病毒71型基因特征分析[J].廣西醫學，2016，38（4）：482-485.

[5]孫景異，王晨，高秀媛，等.2010-2011年西城區（南區）手足口病原監測結果分析[J].國際病毒學雜志，2012，19（4）：165-167.

編輯/雷華endprint