免疫組化染色對病理技術質量控制的影響分析

楊梅

【摘要】 目的：分析研究免疫組化染色對病理技術質量控制的影響。方法：選取2015年1月-2016年1月筆者所在醫院收治的需要進行肝臟穿刺組織的80例患者作為此次研究對象，將其隨機分為觀察組與對照組，每組40例。觀察組患者進行免疫組化染色；對照組患者進行常規HE染色。對比觀察組兩組患者的切片優良率、確診率。結果：行免疫組化染色的觀察組患者切片優良率為97.50%，確診率為95.00%；行常規HE染色的對照組患者切片優良率為80.00%，確診率為75.00%；組間比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論：給予需要進行肝臟穿刺組織的患者進行免疫組化染色，能顯著提高切片質量與確診率，應在臨床上推廣應用。

【關鍵詞】 免疫組化染色； 肝臟穿刺組織； 病理技術質量控制

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.19.035 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）19-0072-02

病理技術作為病理學診斷中最重要的一部分，在任何一個環節都應做到無任何差錯，切片質量的好壞直接關系著醫生診斷的正確性，所以切片的質量對于患者來說具有重要的意義[1]。隨著社會的發展，醫療水平的提高，在免疫組技術的全面實行下，切片質量也得到了相應的改善[2]。肝臟腫瘤是常見的腫瘤疾病，其嚴重威脅著患者的生命健康和生活質量，若能及時確診進行治療則治愈的幾率也會相對較大。在本文研究中，給予40例需進行肝臟穿刺的患者使用免疫組染色切片，在切片優良率及確診率上均取得了較好的成果，詳細內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月-2016年1月筆者所在醫院收治的需要進行肝臟穿刺組織的80例患者作為此次的研究對象，將其隨機分為觀察組與對照組，每組40例。以上患者均知曉并同意參與此次研究。觀察組患者中，男20例，女20例；年齡35～80歲，平均（55.23±5.33）歲；其中，濾泡樹突細胞肉瘤2例，肝細胞肝癌13例，肝內膽管細胞癌10例，轉移性惡性腫瘤5例，血管瘤10例。對照組患者中，男21例，女19例；年齡35～80歲，平均（55.33±5.23）歲；其中，濾泡樹突細胞肉瘤3例，肝細胞肝癌12例，肝內膽管細胞癌11例，轉移性惡性腫瘤5例，血管瘤9例。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），可以進行比較。

1.2 方法

觀察組患者給予免疫組化染色。首先將切片進行脫蠟，在常溫下放入3%的雙氧水中浸泡20 min；浸泡完畢用PBS進行沖洗，需清洗三次以上，清洗時間要大于15 min；將700 ml pH 6.0的檸檬酸緩沖液倒入1000 ml的燒杯中，加熱至沸騰；將記HBsAg、HBcAg、ki-67、CK19抗體的切片均放入燒杯中并做好標記，加熱15 min后取出；在常溫下冷卻后用pH 7.4的PBS對切片進行清洗，次數與時間同上；所有切片均給予一抗處理，放置于4 ℃的冰箱內過夜孵育；用pH 7.4的PBS進行沖洗，次數時間同上，再給予切片滴加二抗，放置于常溫下孵育，時間為10 min；最后一次用pH 7.4的PBS進行沖洗，次數時間同上，5～10 min的DAB顯色；水洗后用蘇木精進行襯染，用脫水透明中型樹膠進行封固；將陰性陽性設置好以便針對不同的抗體。

對照組患者給予常規HE染色。將剛離體的肝臟穿刺組織放入4%的中性甲醛中，固定4 h；AF液浸泡1 h，75%乙醇浸泡1 h，80%乙醇浸泡1 h，90%乙醇浸泡1 h，95%乙醇浸泡1 h，100%乙醇I浸泡1 h，100%乙醇Ⅱ浸泡1 h，二甲苯I 浸泡20 min， 二甲苯Ⅱ浸泡30 min；蠟缸I浸泡1 h，蠟缸Ⅱ浸泡1 h，蠟缸溫度維持在60℃；將烤箱設置成60℃，進行2 h的烤片；需要注意的是，在取材時若有I例標本出現了多條穿刺組織則應該將每一條組織都用濾紙包好放入脫水盒中，以確保每條組織的最大面為切片。

1.3 觀察指標

對比兩組患者切片優良率及確診率。免疫組化染色切片的優良標準為：結構完好無損壞，能精確定位陽性物質，背景無干擾，未出現非特異性著色等情況，未出現脫片等現象。常規HE染色切片的優良標準為：肝臟穿刺組織的厚薄程度一致，結構完全，無裂痕損壞等情況，細胞形態清晰不收縮，染色明顯，能較好的進行核物質的對比。

1.4 統計學處理

采用SPSS 20.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者切片優良率比較

觀察組患者中優良切片39例，切片優良率為97.50%；對照組患者中優良切片32例，切片優良率為80.00%；組間比較差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組患者確診率比較

觀察組患者確診率為95.00%（38例）；對照組患者確診率為75.00%（30例），差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

隨著信息化時代的到來，不僅是醫護人員知曉病理技術質量控制的重要性，就連較多的患者也認識到了疾病的確診是有效治療的第一步[3]。而高質量的切片不僅影響著醫生的診斷，還是決定患者生命安全的一個重要因素。

3.1 本文研究結果

從本文研究中可知，使用免疫組化染色的觀察組患者，切片優良率高達97.50%，確診率為95.00%；而使用常規HE染色的對照組患者，切片優良率僅為80.00%，確診率為75.00%，差異有統計學意義（P<0.05）。說明對切片采用免疫組化染色的方法，能夠有效提高診斷的準確性，使患者能少走彎路，并且可以得到更好更快更全面的治療[4]。endprint

3.2 免疫組化的原理

免疫組織化學染色原理為酶聚合物與二抗結合形成多聚螯合物后可以再與一抗結合，從而使抗原抗體的信號得到放大，并且在多聚物中不會形成鏈霉菌抗生物素蛋白，進而組織細胞內源性生物素所造成的背景染色也不會出現，所以增加了優良切片的成功率[5]。

3.3 免疫組化的取材環節

在進行免疫組化染色的過程中，第一步也是最重要的一步就為取材環節，在這個環節上容易出現以下常見的問題，若無法規避此類問題，則會極大地影響切片效果。（1）選取病變組織的體積厚薄程度不一或者病變組織已發生變性、壞死等情況，均會影響制片的質量，也就是選取的組織機體不適宜；（2）操作人員對標本的描述過于粗略或者對標本的組織部位記載、描述均存在差異也會嚴重影響切片的質量；（3）操作人員在取材后沒有對標本進行及時的處理或保存，導致標本被污染或質變，以致于影響切片的效果。因此，操作人員應在第一步驟時就嚴格把控切片的質量標準。

3.4 組織切片的問題分析

經過后期固定后，新鮮的組織才會將原來的細胞形態保存下來，若沒有得到固定，組織則會發生自溶等情況（細胞內含有多種大量的水解酶，在細胞缺氧的狀態下，水解酶就會將蛋白質分解破壞）。所以，在手術后獲取到的組織標本，需要盡快將其放置于固定液中，使其得到充分的固定，固定時間分為兩種：（1）4～6 h為一般的小樣本固定時間；（2）18～24 h或以上為大樣本的固定時間。

3.5 免疫組化試劑的問題分析

在免疫組化染色中需要有一組良好的染色試劑，其決定著染色的效果，因此，浸水、脫蠟、脫水、透明用到的二甲苯、酒精等試劑一定要及時地補充和更新[6]。每一種試劑的質量是否穩定，對臨床病理的診斷都能直接產生較大的影響。常出現的問題有：（1）試劑使用的過程中保存不當，容易發生揮發等情況，使其純度降低；（2）對長時間不使用的制劑沒有做到更新，也沒有及時將缺漏的制劑進行添加，使切片工作被延滯，從而導致組織切片質量的降低，直接影響診斷結果的準確性。因此，在日常工作中免疫組化試劑一定要定期更換，在采購、使用以及配置的過程中嚴格把關，使所有的切片質量都能得到保障[7]。

3.6 免疫組化染色的問題與對策

免疫組化質量控制工作的關鍵步驟為：（1）抗原的高壓修復，在以往的研究中得知，影響染色結果的最大因素就為抗原修復，其中，修復不夠（溫度低和時間短）和修復不當是其最頑固和最突出的問題，最終會導致假陰性片或無色片等嚴重情況的出現；（2）成立免疫組化抗原陰性和陽性對照的化學實驗室，設置對照片是檢驗免疫組化染色結果可信性的重要手段，在免疫組化標準化中是極其必要的，也是最關鍵的一步，制定一系列質量技術指標也是醫務工作者自我保護的一種方式；（3）在免疫組化學染色的過程中，要求操作人員必須按照規定嚴格執行操作步驟，這是保證染色可重復性和質量穩定性的前提[8]。

綜上所述，對切片進行免疫組化染色，效果顯著，極大地提高了診斷的準確率，促使病理技術的質量控制能上升到更高一層，應進行大力推廣實施。

參考文獻

[1]鄭樣貞.運用免疫組化染色對病理技術質量控制的影響[J].中外健康文摘，2013，10（26）：258-259.

[2]宋新蘭，付娟娟.全自動免疫組化染色儀在胸腹水脫落細胞診斷中的應用價值[J].診斷病理學雜志，2013，20（5）：313-314.

[3]顏亞暉，鄭暉.免疫組織化學切片質量的探討[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2012，12（3）：3-4.

[4]余英豪，鄭智勇.腎穿刺標本的免疫組化二步法染色[J].臨床與實驗病理學雜志，2011，21（5）：619.

[5]陳立群，王敏，鄒俊芝，等.免疫組化在胸腹水脫落細胞診斷中的作用[J].中國肺癌雜志，2009，12（6）：697-698.

[6]栗娜，黃虎.免疫組織化學染色質控及常見問題分析[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2009，18（1）：115-16.

[7]劉樺，趙靜.病理免疫組化染色方法質量控制應注意的基本問題[J].中國煤炭工業醫學雜志，2006，9（12）：1246-1247.

[8]李麗華.病理免疫組化染色方法質量控制應注意的問題[J].局部手術學雜志，2008，17（6）：434-435.

（收稿日期：2017-03-19）endprint