氣相色譜法測定水產品中氯霉素類藥物殘留量

陳樹鵬+黎素菊+陳曉銜+洪捷嫻+李錦雯

摘 要：氯霉素被廣泛應用于水產動物病害的預防和治療，造成動物性食品中的殘留，對人類產生了嚴重的副作用。本文介紹了水產品中氯霉素類藥物殘留量的氣相色譜法。結果表明：該方法的線性系數在0.99以上，檢出限可達到0.01mg/kg。方法靈敏度高，回收率及精密度均達到分析要求。

關鍵詞：氣相色譜法；氯霉素；優化；精密度

氯霉素是一種廣譜、高效的抗生素類藥物，由于其效高價廉，曾在水產養殖業中得到了較為廣泛的應用，同時也不可避免地帶來了殘留問題。殘留在水產品中氯霉素會對人體的造血等功能產生不良影響，甚至引起粒狀白細胞缺乏、不可逆的再生障礙性貧血、新生兒的灰嬰綜合癥等疾病。因此，氯霉素殘留問題需要引起高度的重視，國內外對水產品中氯霉素殘留監控特別嚴格，而且允許殘留量都非常低，一般在1μg/kg以下。目前一般常用的氯霉素殘留量的檢測標準有氣相色譜法（GC-ECD）、液相色譜法（HPLC-UV）、酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）及氣-質聯用法（GC/MS）等。基于此，本文建立了分析水產品中氯霉素類藥物殘留的氣相色譜法，方法準確可靠、靈敏度高。

一、材料與方法

1.材料

（1）試驗原材料。魚肉組織，市場銷售。

（2）主要試劑與材料。乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色譜純）；氯霉素標準、衍生化試劑BSTFA；C18固相萃取柱。

（3）主要儀器。氣質聯用儀；均質機；固相萃取裝置；分析天平；氮吹儀；旋轉蒸發儀。

2.標準溶液配制

氯霉素標準溶液：配制100mg/L的標準儲備液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用時用甲醇稀釋至相應濃度做標準工作曲線。

3.樣品前處理

（1）分離提取。準確稱取魚肉（魚糜狀）（5±0.01）g于具塞離心管中，加入20mL乙酸乙酯，在組織勻漿機均質1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀頭倒入離心管中，高速離心機10000r/min離心3min，將上清液倒入濃縮品中，濃縮近干，用甲醇-水（V：V=1：1）溶液5mL定容，待凈化。

（2） 固相萃取凈化。在固相萃取裝置上放置C18萃取柱，依次用甲醇、蒸鎦水活化C18柱后抽干，將1.3.1定容液過柱，用5mL蒸餾水淋洗柱子，抽干后用甲醇溶劑洗脫，收集洗脫液于10mL試管中氮氣吹干。

（3） 衍生化。吹干的試管中加入0.5mL的甲苯和0.2mL的BSTFA衍生化試劑，在70℃烘箱中衍生30min，取出后氮氣吹干0.5mL正己烷定容上機。

（4）標準曲線及質控樣。分別配置0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/L濃度的標準液，按1.3.3衍生化后進樣制作標準曲線，同時在1.3.1過程中稱取2個樣品做添加回收率試驗。

4.測定方法

（1） 儀器條件。色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm，0.5fun）；載氣：氦氣（99.999%）；恒流模式流速：1.0mL/min；進樣：1.0nL，不分流；進樣口溫度：250V；程序升溫：80℃保持1min，以20℃/min升溫至280℃，保持10min；離子化方式：電子轟擊（EI）；離子化能量：70eV；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度270℃；溶劑延遲：3min；掃描方式：多反應監測（MRM）。掃描范圍：50～450amu；定量方式：外標法。

（2）樣品測定。將衍生化后定容的樣品及標準裝入帶內襯管的進樣瓶中，按上述條件進行分析測定，通過色譜工作站記錄保留時間、峰面積及二級質譜離子的豐度比。

二、結果與討論

1.氣相色譜法優化和選擇

在設定的色譜條件下對氯霉素衍生物標準品進行測試分析，首先采用全離子掃描確定目標化合物的保留時間和一級質譜圖，由圖1可見氯霉素衍生物的特征碎片離子以m/z為255為母離子，設定質譜條件優化子離子及碰撞電壓，由圖2可選擇最佳碰撞電壓和子離子的參數。

2.方法的線性范圍

通過氣相色譜儀分析氯霉素標準品的色譜圖見圖3，以峰面積對應其濃度做標準曲線，方法學參數見表1，圖4為氯霉素標準品的標準曲線。

3.方法回收率、精密度及檢出限

對樣品添加0.5 和1.0mg/kg兩種不同濃度的混合標準，按試驗步驟操作，每個濃度各添加5個平行樣品，進行回收率重復測定。對樣品基質空白進行20次測定，按照3倍信噪比（S/N）作為定量檢出限，通過計算所得氯霉素檢出限為0.01mg/kg。樣品加標回收率、相對標準偏差（RSD）見表2。

4.樣品的測定

為驗證該方法的可靠性和準確性，本次試驗選擇市場銷售的鯽魚、草魚、鯉魚、河鱸及羅非魚20個樣品進行試驗，同時選擇上述樣品做添加回收試驗進行質控。在檢測的樣品中均未檢出氯霉素藥物殘留，檢測結果準確、可靠。

三、分析

本次試驗所選擇的梯度濃度繪制的標準工作曲線，得到線性回歸方程相關系數大于0.99以上，表明氯霉素在相應的濃度范圍內呈現良好的線性關系，可滿足殘留檢出的定量要求，在對空白魚肉樣品添加的兩個濃度水平的氯霉素標準品進行質控試驗，氯霉素標準品的回收率大于80%以上，相對標準偏差小于5%，通過計算得到定量檢出限（LOD）為0.01mg/kg，以上指標均符合藥物殘留試驗及相關標準法規的分析要求。

四、結語

總而言之，氯霉素殘留是目前我國水產品代表性的一種抗生素，本文建立氣相色譜法測定水產品中氯霉素殘留量的方法。經過本試驗的測定結果表明，該方法前處理步驟相對簡單，雜質干擾少。方法簡便、快速，同時準確度和精密度較高，各項技術指標均可適用于水產品中氯霉素類藥物殘留的檢測工作，值得廣泛的應用與推廣。而為了實現更加高效精確的檢測，還需要相關技術人員作更進一步的研究和努力，以不斷完善該方法。

參考文獻：

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