固相萃取——氣相色譜法測定蔬菜膳食中19種有機磷農藥的殘留量

吳江洲

摘 要：文章通過實驗，利用固相萃取-氣相色譜法為檢測方法，建立蔬菜膳食中19種有機磷農藥殘留的同時分析方法，結果表明，此方法具有快速、簡便、準確、靈敏、重現性好的特點，適合蔬菜中有機磷農藥殘留量的測定，可推廣使用。

關鍵詞：氣相色譜儀；色譜分析；有機磷農藥殘留；檢測性能；加標回收率；精密度

現代科技的高速發展使得農業生產越來越便捷。在現代農業中，農藥是的重要生產資料，對于保證農作物優質、高產具有不可或缺的作用，已成為農業生產中不可或缺的一部分。目前，我國使用最多的農藥就是有機磷農藥。雖然，有機磷農藥的使用可以大大提高經濟效益，但這種農藥可能會殘留在蔬菜上，通過飲食引起人體慢性中毒，并且誘發神經系統、心血管系統、生殖系統等多種系統的疾病。因此，為了能夠確保蔬菜上的農藥殘留不超標，維護人們的身體健康，必須尋求蔬菜中有機磷農藥殘留量的快速檢測手段，進行一定的檢測。目前，對果蔬中有機磷農藥殘留進行檢測的方式有很多，并且每一種方式都有著各自的優勢和缺陷。色譜法屬于對果蔬進行有機磷農藥殘留的檢測方法中進行分離的方法，主要就是根據對固定相和流動相之間的分配系數進行物質的分析，以便于達到分離的目的，并且把對物質濃度進行的分析，轉變為能夠進行測量的信號，能夠讓記錄儀進行記錄。當前利用色譜法進行有機磷農藥檢測的方法主要有薄層色譜方式、氣相色譜方式。下面，文章將對固相萃取-氣相色譜測定方法進行研究與介紹。

一、材料與方法

1.儀器與試劑

安捷倫789B氣相色譜儀；SPE100全自動固相萃取儀；渦輪粉碎機；RE-52AA型旋轉蒸發器；TTL-DCⅡ型氮吹儀，ENVI-C18固相萃取小柱（500mg，6ml），ENVI-CARB固相萃取小柱（500mg，6ml），CARB/NH2固相萃取小柱（500mg，6ml）和LC-NH2（500mg，6ml），均購自杭州福?？萍挤沼邢薰尽?/p>

敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲基內吸磷、甲拌磷、氧化樂果、二嗪磷、氯唑磷、久效磷、樂果、毒死蜱、甲基對硫磷、馬拉硫磷、對硫磷、喹硫磷、水胺硫磷、滅線磷、三唑磷、亞胺硫磷（均購自農業部環境保護科研監測所，濃度為40～100μg/ml）。丙酮、乙腈、二氯甲烷均為色譜純，氯化鈉為優級純，經烘烤后備用。

2.色譜分析條件

色譜條件按已優化的氣相色譜條件，即采用Rtx-1701（30m×0.25mm×0.25μm）農殘專用毛細管柱，不分流進樣。FPD檢測器溫度：280℃。進樣口溫度：250℃，色譜柱流量2.0ml/min，總流量65.0ml/min，吹掃流量3.0ml/min，氫空比為62.5：90。程序升溫條件：初始柱溫80℃，以20℃/min速率程序升溫至170℃，以2℃/min速率程序升溫至180℃，停留4min，再以14℃/min速率程序升溫至230℃，停留2.5min，然后以30℃/min速率程序升溫至260℃，停留8min。進樣1μl，外標法定量。

3.樣品處理

（1） 提取。 按GB/T8855抽取蔬菜樣品，取可食部分，經縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣。準確稱取25.0g切碎混勻的蔬菜于200ml具塞三角燒瓶中，加入50ml乙腈超聲提取0.5h，濾紙過濾，濾液收集到裝有6gNaCl的100ml具塞比色管中，劇烈震蕩2min，室溫靜置30min，靜置分層后吸取上層溶液10.00ml放入15ml具塞刻度離心管，40℃水浴氮吹至近干，待凈化。

（2）凈化。 使用全自動固相萃取儀進行凈化處理。配置二氯甲烷-丙酮體積比1：1的淋洗液，先以流速3ml/min淋洗液活化固相小柱3min，然后用2ml淋洗液洗滌離心管，將清洗液加到小柱上，重復三次，最后用10ml洗脫固相小柱。收集洗脫液，40℃水浴氮吹至近干，用丙酮定容至1ml，上氣相色譜儀測定。

二、結果與討論

1.提取條件的選擇

實驗發現，將勻漿、振蕩、超聲結合起來經優化組合后比單純采用其中任何一種方法對農藥的提取率均高一些，為此確定了1.3中樣品提取的方法。同時考查了乙腈、丙酮、二氯甲烷三種溶劑作提取溶液對蔬菜中有機磷的提取效果，結果發現，二氯甲烷適合水中部分有機磷的提取，并不合適本研究中如此多種類的提取，丙酮作溶劑時回收率也不是很理想，而乙腈效果明顯優于其他。

2.固相小柱的選擇

實驗前色譜柱篩選對比中對C18柱、ENVI-CARB、CARB/NH2和LC-NH2固相小柱對樣品的凈化能力進行了比較。其中ENVI-CARB柱具有最佳的凈化效果，樣品回收率理想。LC-NH2柱由于活化和洗脫中要使用毒性較大的甲苯才能達到較好的效果，故采用ENVI-CARB柱作為凈化小柱。

3.洗脫溶劑的確定

凈化過程發現不同溶液的洗脫效果差別較大，分別比較了乙腈、丙酮、二氯甲烷、二氯甲烷-丙酮和乙腈-甲苯的洗脫效果。結果表明二氯甲烷-丙酮洗脫溶劑洗脫效果最佳，乙腈-甲苯洗脫溶劑次之，乙腈-甲苯洗脫溶劑尤其適合LC-NH2柱，但其他回收率相對較低。綜合考慮采用二氯甲烷-丙酮作為洗脫溶劑。

4.方法的檢測性能

（1）方法的線性關系及檢出限 用丙酮稀釋配制常見的19種有機磷農藥的混合標準溶液。將標準系列溶液在上述色譜條件下進行測定，用標準系列溶液濃度為橫坐標，用峰面積為縱坐標進行線性回歸。其中18種有機磷的線性范圍在4～200μg/L之間時，線性關系良好，相關系數≥0.9994，只有乙酰甲胺磷響應相對較低，可能是其中-NHCOCH3基團的給電子的共軛效應存在對進樣口和柱前端的變化比較敏感。以儀器信噪比（S/N）為3時確定最低檢測濃度，根據前處理方法計算方法的檢出限為0.8～5.1μg/kg，方法的定量檢出限為2.5～16.9μg/kg，見表1。有機磷混合農藥標準色譜圖及樣品加標回收色譜圖見圖1。

（2） 回收率和精密度 在空白蔬菜樣中添加入有機磷混合標準溶液，按上述實驗步驟，分別做高低兩個濃度的加標回收試驗，即40μg/kg和120μg/kg，平行測定6次，結果見表2。結果表明，加標回收率為62.4%～111.5%，相對標準偏差（RSD）為0.74%～5.26%，其中高濃度樣本回收效果要好于低濃度。

三、結語

總之，加強農產品質量安全監管力度，完善其分析檢測手段是保障民生的重要舉措之一。本研究通過對樣品處理、固相萃取條件進行優化，進行了固相萃取——氣相色譜法測定蔬菜膳食中19種有機磷農藥的殘留量的實驗，并驗證了該方法的良好性能，具體表現為快速、靈敏、準確、成本低，可滿足新鮮蔬菜中常見的多種有機磷農藥殘留的快速檢測要求。

參考文獻：

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