新型生物農藥棘孢木霉菌防治辣椒疫病應用研究

徐沛東，朱植銀，黃加誠，肖永良，謝遠芳，魏方林

?

新型生物農藥棘孢木霉菌防治辣椒疫病應用研究

徐沛東1,2，朱植銀1，黃加誠1，肖永良2，謝遠芳2，魏方林2

(1. 江西勁農化工有限公司，江西九江 332500；2. 江西省農藥工程技術研究中心，江西南昌 330096）

通過室內盆栽試驗和大田試驗驗證3億CFU/g棘孢木霉菌WP對辣椒疫病的防控效果。盆栽試驗結果：3億CFU/g棘孢木霉菌WP用量2 000倍液、3 000倍液灌根處理防治辣椒疫病，藥后7~21 d防效分別為91%~100%、87%~93%，同類競品3億CFU/g哈茨木霉菌制劑2 000倍液防效80%~93%。大田試驗結果：藥后15 d、30 d，3億CFU/g棘孢木霉菌WP灌根施藥的防效均顯著高于噴霧施藥，相同用藥方式下3億CFU/g棘孢木霉菌WP用量2 000倍液防效（97%、89%）高于3億CFU/g哈茨木霉菌WP 2 000倍液的防效（91%、85%），3億CFU/g哈茨木霉菌WP灌根處理藥后30 d的防效高于化學藥劑烯酰嗎啉效果（90%），表明該生物藥劑持效期較長。

生物農藥；棘孢木霉菌；辣椒疫病；防效

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（L.）引起的，它是世界范圍內的一種毀滅性病害[1]。辣椒疫病在辣椒的整個生育期均可發(fā)生，根、莖、葉、果實均可發(fā)病，發(fā)病周期短、傳播速度快，是造成辣椒嚴重減產的重要土傳性病害[2]。疫病高發(fā)期，3~5 d即可造成辣椒全株死亡，發(fā)生嚴重的田塊死秧率達30%以上，甚至全田死亡，極大的損害了農民的收益[3]。目前，辣椒疫病的防治主要采用種植抗病品種和化學防治等方法。化學防治是控制辣椒疫霉菌的重要技術，且見效最快。但是，化學殺菌劑的大量使用嚴重影響了環(huán)境安全和食品安全。同時，辣椒疫霉菌對化學殺菌劑的抗性發(fā)展迅速[4]。因此，生物防治已經慢慢發(fā)展成為防治辣椒疫病的重要措施。

木霉菌（spp.）是一類被研究和應用較早的生防菌。木霉菌可以有效防治子囊菌、擔子菌、卵菌綱等多種植物真菌，例如齊整核菌() ,腐霉菌(spp)、立枯絲核菌()、鐮刀菌(spp.)等病原菌引起的瓜類枯萎病、水稻紋枯病、棉花立枯病、辣椒的白絹病以及番茄的碎倒病等植物病害[5]。目前木霉菌類形成商品且銷售最多的是哈茨木霉菌（），產品商標為美國“拜沃”[4]。據報道，棘孢木霉菌（）對辣椒疫病有很高的拮抗作用，可以通過重寄生、代謝產物抑制孢子囊產生和游動孢子釋放來抑制疫霉菌活性，達到防控辣椒疫病的目的[6-7]。目前，棘孢木霉菌在國內尚未形成正規(guī)產品。筆者開展本次試驗，旨在研究3億CFU/g棘孢木霉菌WP對辣椒疫病的防治效果及其應用技術，為辣椒疫病的生物防治提供新的優(yōu)秀產品。

1 材料與方法

1.1 室內盆栽試驗

1.1.1 供試藥劑、菌種及作物 辣椒疫霉由浙江農林大學農業(yè)與食品科學院惠贈；供試藥劑3億CFU/g棘孢木霉菌WP，由江西正邦生物化工有限責任公司研究所配制[8]，對照藥劑3億CFU/g哈茨木霉菌WP（美國“拜沃”）和50%烯酰嗎啉WG為市購；供試辣椒市購幼苗，品種為常規(guī)感病品種“新育22號尖椒”。

1.1.2 試驗設計 試驗設4個藥劑處理，1個清水對照，每個處理做4次重復，小區(qū)面積8棵辣椒/盆。具體處理，處理1-5分別為：3億CFU/g棘孢木霉菌WP 3 000倍液、3億CFU/g棘孢木霉菌WP 2 000倍液、3億CFU/g哈茨木霉菌WP 2 000倍液、50%烯酰嗎啉WG 1 500倍液、清水對照，施藥方法每株灌根50 mL藥液。

1.1.3 接種體制備 辣椒疫霉菌接種到V8培養(yǎng)基[9]上放置在人工氣候培養(yǎng)箱內，25 ℃黑暗培養(yǎng)3 d，光照培養(yǎng)3 d，產生孢子囊后用無菌水沖洗平板，將孢子囊液放置4 ℃、30 min誘導游動孢子產生，無菌水稀釋孢子液至1×105個/mL，待用[10]。

1.1.4 盆栽試驗方法及病情調查 2016年4月20日將購買的辣椒苗栽種在36 cm×58 cm的盆栽盆內，8棵苗/盆，本次試驗栽種40盆。5月1日根據試驗設計進行施藥。5 d后在辣椒主根處接種辣椒疫霉菌，每株接種1×105個/mL游動孢子懸浮液3 mL[11]。接種辣椒疫霉菌后7 d、14 d、21 d調查辣椒疫病的病情指數(shù)，分級標準如下[5]：0級，無病；1級，僅有1~2片葉片萎蔫或水浸狀；3級，50%以下的葉片萎蔫，或1~2片葉萎蔫但莖變黑褐色而不溢縮；5級，50%以上的葉片全萎蔫，或莖基部變色乃至輕微溢縮但不倒伏；7級，葉片全萎蔫，莖基部褐變，溢縮而直立或倒伏而不枯死；9級，植株枯死而呈細線狀。藥效計算方法：病情指數(shù)/%=∑(各級病株數(shù)×相對級值)/(調查總株數(shù)×9)×100；防效/%=(空白對照區(qū)病指-處理區(qū)病指)/(空白對照區(qū)病指)×100。

1.2 田間藥效試驗

1.2.1 試驗材料及環(huán)境 試驗安排在江西省南昌縣武陽鎮(zhèn)蔬菜基地的塑料大棚進行。試驗地為辣椒疫病常發(fā)田塊。2016年5月6日進行移植，移栽時辣椒苗齡50 d，667 m2移栽3 000棵。各試驗小區(qū)的土壤類型、栽培條件及水肥管理等均勻一致。

1.2.2 試驗方法 辣椒定植后15 d進行施藥處理，試驗設7個藥劑處理，1個清水對照，每個處理作4次重復，小區(qū)面積25 m2，小區(qū)隨機排列。具體處理如下[12]，處理1-4分別為：3億CFU/g棘孢木霉菌WP 3 000倍液、3億CFU/g棘孢木霉菌WP 2 000倍液、3億CFU/g哈茨木霉菌WP 2 000倍液、50%烯酰嗎啉WG 1 500倍液，進行灌根處理，每株灌窩200 mL；處理5-7分別為：3億CFU/g棘孢木霉菌WP 600倍液、3億CFU/g棘孢木霉菌WP 300倍液、50%烯酰嗎啉WG 800液，進行莖葉噴霧。藥后15 d、30 d對各個小區(qū)辣椒疫病的發(fā)生情況進行調查，并計算病情指數(shù)和防效。

1.2.3 田間試驗調查及計算方法 調查方法參照農藥藥效試驗準則[13]。小區(qū)內隨機選取5點，每點調查5株辣椒，記錄病株數(shù)、死株數(shù)或明顯枯萎的植株數(shù)。分級方法（按癥狀類型分級）：0級為健康無病；1級為地上部僅葉果有病斑；3級為地上莖枝有褐腐斑；5級為莖基部有褐腐斑；7級為地上莖、枝與莖基部均有褐腐斑，并且部分枝條枯死；9級為全株枯死。藥效計算方法同上。

2 試驗結果與分析

2.1 室內盆栽試驗

由表1可知，棘孢木霉菌制劑對辣椒疫病有很好的防控作用，預防效果顯著，棘孢木霉制劑藥后7~14 d防效與對照哈茨木霉和烯酰嗎啉相比無顯著性差異；藥后21 d，棘孢木霉制劑的防效顯著高于烯酰嗎啉，且同劑量下棘孢木霉制劑效果優(yōu)于哈茨木霉制劑。

表1 棘孢木霉制劑對防治辣椒疫病盆栽試驗結果

同列數(shù)據后不同小寫字母表示<0.05水平下差異顯著，下同。

2.2 田間藥效試驗防效

由表2可知，灌根處理時，藥后15 d，棘孢木霉制劑對辣椒疫病的防治效果達90%以上，與同類生物農藥哈茨木霉菌和化學藥劑烯酰嗎啉無顯著性差異；藥后30 d，棘孢木霉菌對辣椒疫病的防效仍達85%以上，持效期較長，且顯著優(yōu)于對照藥劑烯酰嗎啉。

噴霧處理時，棘孢木霉菌對辣椒疫病藥后15 d的防效略低于烯酰嗎啉，但無顯著性差異；藥后30 d，棘孢木霉菌的防效顯著高于烯酰嗎啉，表明棘孢木霉菌的持效期優(yōu)于烯酰嗎啉。

綜上所述，棘孢木霉菌對防治辣椒疫病效果優(yōu)異，且持效期較長。施藥方式灌根優(yōu)于噴霧。

表2 棘孢木霉制劑防治辣椒疫病田間效果結果

3 討 論

木霉菌是一種對作物安全、對病原菌高效拮抗的生防菌株，它能通過重寄生、產生溶解酶、激發(fā)免疫反應等一系列拮抗作用，抑制或殺死病原菌[14]。木霉菌分生孢子可以在自然界中大量增殖因而達到對病原菌長期控制的效果[8]。棘孢木霉菌同樣具有極高的存活潛力和適應各種生態(tài)環(huán)境的能力，可以廣泛存在于土壤、植物根際和葉面[15]。表2可以看出，3億CFU/g棘孢木霉菌WP在同等劑量下對辣椒疫病的防治效果優(yōu)于3億CFU/g哈茨木霉菌WP（美國“拜沃”）。因此，試驗測定的3億CFU/g棘孢木霉菌WP具有很大的應用價值和市場推廣潛力。

3億CFU/g棘孢木霉菌WP對辣椒疫病的防控效果顯著，且持效期長達30 d以上，優(yōu)于對照藥劑烯酰嗎啉。該生物藥劑的施藥方式以灌根或噴淋莖基部為主，施藥量2 000~3 000倍液。同時，棘孢木霉菌具有分生孢子萌發(fā)和侵染受外界環(huán)境因素的影響較大、對病害控制的速效性較差的缺點，棘孢木霉菌和化學藥劑復配以提高速效性有待進一步深入的研究。

[1] Cranston P S, Dilion M E, Pinder C V, et al. The adult males of Chironominae (Diptera; Chironomidae) of the Holarctic region- Keys and diagnoses[J]. Entomologica Scandinavica Supplement, 1989, 34: 353-532.

[2] 張佑宏, 呂亮, 張舒, 等. 40. 2%咪唑菌酮·霜霉威鹽酸鹽SC對辣椒疫病的防治效果[J]. 湖北農業(yè)科學, 2017, 56(4): 661-665.

[3] 賴衛(wèi), 楊紅, 劉崇政, 等. 不同藥劑對辣椒疫病的防治效果研究[J]. 長江蔬菜, 2016(14): 61-63.

[4] 席亞東, 陳國華, 謝丙炎, 等. 不同木霉菌株對辣椒疫霉菌的防控作用[J]. 北方園藝, 2016(21): 115-119.

[5] 李琳. 棘抱木霉菌的分離及其生防作用的評價與應用[D]. 長春: 吉林大學, 2013.

[6] 張量. 防治辣椒疫病的木霉拮抗化合物篩選及其生防制劑制備[D]. 杭州: 浙江大學, 2015.

[7] 楊萍, 楊謙, 許倩. 棘孢木霉生物防治相關代謝產物研究[J]. 哈爾濱商業(yè)大學學報, 2014, 30(1): 36-40.

[8] 孫麗麗, 曹傳旺, 薛緒亭, 等. 棘孢木霉可濕性粉劑研制及殺菌活性測定[J]. 北京林業(yè)大學學報, 2015, 37(6): 45-52.

[9] 劉虹. 煙草T-DNA插入突變體抗病表型篩選與大豆疫霉菌PsAAT3的功能研究[D]. 南京: 南京農業(yè)大學, 2016.

[10] 許亞池, 王述彬, 習衛(wèi)平, 等. 一種便捷高產的辣椒疫霉菌游動孢子產生方法[J]. 江蘇農業(yè)科學, 2015, 43(10): 172-173.

[11] 李建文, 高易宏, 吳輝, 等. 生防菌BS04防治辣椒疫病機制[J]. 江蘇農業(yè)科學, 2015, 43(10): 151-153.

[12] 郭志英. 生防菌劑接種方法對辣椒防病促生作用及根區(qū)微生態(tài)的影響[D]. 楊凌: 西北農林科技大學, 2008.

[13] 中華人民共和國國家標準農藥田間藥效試驗準則(一)[S]. 北京: 中國標準出版社, 2000: 133-135.

[14] Jiang H, Zhang L, Zhang J, et al. Antagonistic interaction betweenandin vitro[J]. Journal of Zhejiang Universityence B, 2016, 17(4): 271-281.

[15] 張量, 張敬澤. 漸綠木霉抑菌物質的分離純化及其對植物病原菌的抑制作用[J]. 中國農業(yè)科學, 2015, 48(5) : 882-888.

Application ofto Control Pepper Blight

XU Pei-dong1, 2, ZHU Zhi-geng1, HUANG Jia-cheng1,XIAO Yong-liang2, XIE Yuan-fang2, WEI Fang-lin2

(1. Jinnong Chemical Co., Ltd of Jiangxi, Jiujiang 332500, Jiangxi, China; 2. Jiangxi Research Centre for Pesticide Engineering Technology, Nanchang 330096, China)

Indoor potting experiments and field trails were conducted to study the control effects of 300 million cfu/g ofWP on Pepper blight. Results from potting tests indicated the control efficiency had no significant difference between root-irrigating the liquid of 300 million cfu/gWP diluted to 2 000-3 000 times after 7-21 d and the competing producton Pepper blight. On the other hand, field trails revealed that the control efficiency of root-irrigating was significant better than spaying of 300 million cfu/gWP after 15 and 30 days. And under the same circumstances,performed slightly better thanthe control effect of 30 d of 300 million cfu/g ofWP was equivalent to that of irrigating dimethomorph, and the duration of efficacy was better than dimethomorph.

biological pesticide;; pepper blight; control efficiency

S436.418.1

A

2095-3704（2017）03-0172-04

2017-07-25

江西省重點研發(fā)計劃項目（20161BBF60020）

徐沛東，碩士，主要從事生物農藥及化學殺菌劑產品開發(fā)、生測試驗工作，xupeidong@zheng bang.com。

徐沛東, 朱植銀, 黃加誠, 等. 新型生物農藥棘孢木霉菌防治辣椒疫病應用研究[J]. 生物災害科學, 2017, 40(3): 172-175.