HPLC法同時測定干髓糊劑中丁香酚和麝香草酚的含量Δ

曹偉宇，賀文娟，雷丸，王曉娟（軍事口腔醫(yī)學(xué)國家重點實驗室/國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心/陜西省口腔生物工程技術(shù)研究中心/第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院藥劑科，西安710032）

HPLC法同時測定干髓糊劑中丁香酚和麝香草酚的含量Δ

曹偉宇＊，賀文娟，雷丸，王曉娟#（軍事口腔醫(yī)學(xué)國家重點實驗室/國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心/陜西省口腔生物工程技術(shù)研究中心/第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院藥劑科，西安710032）

目的：建立同時測定干髓糊劑中丁香酚和麝香草酚含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Wonda Cract C18，流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測波長為274 nm，柱溫為25℃，進樣量為10μL。結(jié)果：丁香酚和麝香草酚檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.02～0.19 mg/mL（r＝0.999 7）、0.03～0.30 mg/mL（r＝0.999 6）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率分別為95.85%～99.84%（RSD＝1.11%，n＝9）、95.81%～100.91%（RSD＝1.59%，n＝9）。結(jié)論：該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于干髓糊劑中丁香酚和麝香草酚含量的同時測定。

高效液相色譜法；干髓糊劑；丁香酚；麝香草酚；含量測定

干髓糊劑是2015年版《中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范》收載的口腔用標(biāo)準(zhǔn)制劑，具有消炎止痛、凝固蛋白和固定牙髓組織的作用[1]。本制劑主要成分為多聚甲醛、丁香酚和麝香草酚等。其中，丁香酚具有抗菌消炎的功效，且在牙髓失活過程中起到麻醉鎮(zhèn)痛的作用；麝香草酚具有抗菌消毒的作用，用于根管、窩洞消毒及間接蓋髓[2-4]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定本制劑重要活性成分丁香酚和麝香草酚的含量測定方法，且尚未有同時測定本制劑中兩種成分含量的報道。鑒于此，本課題組參考相關(guān)文獻(xiàn)[5-7]，采用高效液相色譜法（HPLC）建立了同時測定該制劑中丁香酚和麝香草酚含量的方法，以期為完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010A型HPLC儀，LC-Solution色譜工作站（日本Shimadzu公司）；BT125D型電子天平（德國Sartorius公司）；Milli-Q Advantage A10型超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

干髓糊劑（我院自制，批號：170218、170308、170329，規(guī)格：20 mL/瓶）；丁香酚對照品（批號：110725-201213，純度：99.7%）、麝香草酚對照品（批號：100508-201603，純度：99.9%）均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Wonda Cract C1（8150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-0.2%磷酸溶液（B），梯度洗脫（洗脫程序見表1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：274 nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution procedure

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液取丁香酚對照品26.25 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含1.05 mg的丁香酚對照品貯備液；取麝香草酚對照品約37.25 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含1.49 mg的麝香草酚對照品貯備液。分別精密量取丁香酚對照品貯備液和麝香草酚對照品貯備液各1 mL，置于同一10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含丁香酚0.105 mg和麝香草酚0.149 mg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液取樣品約1 g，精密稱定，置于100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2 mL，置于50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液按樣品的制備工藝和配方比例制備不含丁香酚和麝香草酚的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)以丁香酚峰計為48 464，保留時間為14.864 min。結(jié)果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項下丁香酚和麝香草酚的單一對照品貯備液各0.1、0.25、0.4、0.5、0.75、1 mL，相同體積貯備液置于同一5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列混合對照品溶液。取上述系列混合對照品溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得丁香酚和麝香草酚回歸方程為y＝7 567 020.79x+1 572.79（r＝0.999 7）和y＝7 766 556.23x+6 519.97（r＝0.999 6）。結(jié)果表明，丁香酚和麝香草酚檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.02～0.19、0.03～0.30 mg/mL。

2.5 精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，丁香酚和麝香草酚峰面積的RSD分別為1.59%、1.55%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密量取同一供試品溶液（批號：170218）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，丁香酚和麝香草酚峰面積的RSD分別為0.34%、1.67%（n＝5），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批樣品（批號：170218）適量，精密稱定，按“2.2.2”項下方法平行制備供試品溶液6份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結(jié)果，丁香酚和麝香草酚的平均含量分別為0.262 5、0.291 1 mg/g，RSD分別為1.15%、1.14%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取樣品（批號：170218）適量，共9份，每份約10 mg，分別置于50 mL量瓶中，各加入低、中、高質(zhì)量的丁香酚和麝香草酚對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 方法耐用性考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，分別考察不同廠家色譜柱（Agilent Zorbax Eclipse XDB C18、Wonda Cract C18、Dikma Diamonsil C18）、流速（±0.2 mL/min）、柱溫（±5℃）、流動相pH（±0.2，即分別用0.1%磷酸溶液、0.2%磷酸溶液、0.3%磷酸溶液）等不同條件下的方法耐用性。結(jié)果顯示，不同條件下丁香酚和麝香草酚峰面積的RSD均＜2.0%，表明本方法耐用性良好。

3.2 檢測波長的選擇

根據(jù)紫外光譜掃描顯示，丁香酚在210、230、280 nm波長處均有最大吸收，麝香草酚在274 nm波長處有最大吸收。為了同時測定這兩種成分，兼顧兩者的檢測靈敏度，并排除其他組分干擾，經(jīng)多次試驗，結(jié)果表明丁香酚和麝香草酚在274 nm波長處均有良好的吸收。故最終選擇檢測波長為274 nm。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

表3 樣品含量測定結(jié)果（n＝3，mg/g）Tab 3 Results of contents determination of samples（n＝3，mg/g）

3.3 流動相的選擇

本試驗考察了不同體積分?jǐn)?shù)的甲醇-甲酸、甲醇-乙酸、甲醇-磷酸溶液作為流動相[7-10]，結(jié)果表明采用甲醇-0.2%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫時，待測成分峰形良好、保留時間適宜。因此，本試驗選擇甲醇-0.2%磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相。

綜上所述，本方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于干髓糊劑中丁香酚和麝香草酚含量的同時測定。

[1] 解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范[S].2015年版.北京：人民軍醫(yī)出版社，2015：106-107.

[2] 危雪平，馬金剛，郭飛燕，等.柱前衍生HPLC法測定干髓糊劑中多聚甲醛的含量[J].中國藥房，2014，25（37）：3507-3510.

[3] 俞懿強.丁香酚的藥理作用及在口腔醫(yī)學(xué)應(yīng)用的研究進展[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2009，25（3）：187-189.

[4] 何崇慧，高磊，賈燕花，等.HPLC法測定麝香草酚醇溶液中麝香草酚的含量[J].中國藥師，2014，17（10）：1782-1783.

[5] 陳偉，楊珺，楊謹(jǐn)成，等.HPLC法同時測定復(fù)方麝香草酚溶液中3種有效成分的含量[J].中國藥房，2016，27（15）：2119-2121.

[6] 馬金剛，危雪平，王鵬遠(yuǎn)，等.UPLC法同時測定復(fù)方丁香油涂劑中丁香酚和樟腦的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2014，30（5）：423-427.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：4.

[8] 劉穎新，劉利利，孔興欣，等.HPLC法測定香薷散不同煎液中香荊芥酚和麝香草酚的含量及體外抗菌作用比較

[J].藥物分析雜志，2014，34（6）：1006-1010.

[9] 陳欣，陳鵬.RP-HPLC測定麝香草酚的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].華西藥學(xué)雜志，2012，27（1）：102-103.

[10] 黃家衛(wèi)，盛振華，張蓓，等.HPLC法測定銀黃噴霧劑中麝香草酚及香荊芥酚的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（11）：2693-2695.

Simultaneous Determination of Eugenol and Thymol in Mummification Pastes by HPLC

CAO Weiyu，HE Wenjuan，LEI Wan，WANG Xiaojuan（State Key Lab of Military Stomatology/National ClinicalResearch Center for Oral Diseases/Shaanxi Engineering Research Center for Dental Materials and Advanced Manufacture/Dept. of Pharmacy，Stomatology Hospital of Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China）

HPLC；Mummification pastes；Eugenol；Thymol；Content determination

R927.2

A

1001-0408（2017）30-4268-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.30.24

OBJECTIVEOBJECTIVE：：To establish a method for simultaneous determination of eugenol and thymol in mummificationpastes. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Wonda Cract C18 column with mobile phaseconsisted of methanol-0.2％ phosphoric acid（gradient elution）at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 274nm，and column temperature was set at 25 . The sample size was 10 μL. RESULTS：The linear ranges of eugenol and thymolwere 0.02-0.19 mg/mL（r＝0.999 7）and 0.03-0.30 mg/mL（r＝0.999 6）. RSDs of precision，stability and reproducibility tests wereall lower than 2.0％. The recoveries were 95.85％-99.84％（RSD＝1.11％，n＝9）and 95.81％-100.91％（RSD＝1.59％，n＝9）. CONCLUSIONS：The method is simple and accurate，and can be applied to simultaneous determination of eugenol and thymol in mummificationpastes.

軍隊醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高研究項目（No.13ZJZ08）

＊藥師，碩士。研究方向：藥劑學(xué)。電話：029-84773998。E-mail：464970076@qq.com

#通信作者：主任藥師，碩士。研究方向：藥劑學(xué)與新藥。電話：029-84776189。E-mail：wxjyh231@fmmu.edu.cn

KEYWORDSHPLC；Mummification pastes；Eugenol；Thymol；Content determination

2017-05-16

2017-07-14）

（編輯：劉柳）