葡萄抗氧化作用的研究

倉木決，馬夢婷，黃婉雨，李巧云

葡萄抗氧化作用的研究

倉木決1，馬夢婷2，黃婉雨3，李巧云4※

目的：觀察葡萄有無抗氧化作用。方法：采用體內(nèi)抗氧化實驗，以紅景天為陽性對照，以蒸餾水為空白對照，將葡萄制汁以25%、50%、100%三種不同濃度給予小鼠灌胃20 d，測定小鼠紅細胞中的超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。體外抗氧化實驗，直接用人血樣本測不同濃度葡萄汁對紅細胞中MDA的抑制率。結(jié)果：體內(nèi)試驗結(jié)果顯示，紅景天組有抗氧化作用，與空白對照組比較P＜0.05；而葡萄三個劑量組對SOD和MDA沒有明顯影響，與空白對照組比較P＞0.05，沒有顯著性差異。體外抗氧化實驗結(jié)果顯示，不同濃度的葡萄汁對MDA都有一定的抑制作用。結(jié)論：葡萄具有體外抗氧化作用；但體內(nèi)抗氧化試驗中葡萄對SOD和MDA并未見明顯作用。

葡萄;抗氧化作用;超氧化物歧化酶;丙二醛

葡萄（Vitis vinifera），又稱蒲桃、草龍珠、山葫蘆、李桃、美國黑提，屬于葡萄屬葡萄科植物葡萄的果實，是世界最古老的植物之一。從中醫(yī)的角度來說，葡萄味甘、酸，性平，無毒。有很高的營養(yǎng)價值，成熟的漿果中含有大量的葡萄糖，可被人體直接吸收；還有多種礦物質(zhì)、維生素和氨基酸。現(xiàn)代的更多食品研究者將目光聚集在了葡萄中植物化學物的功效研究。植物化學物是植物的次級代謝產(chǎn)物，除個別維生素前體物外，均為非營養(yǎng)成分[1]，有研究者成功研究了葡萄籽的體外抗氧化功效，實驗結(jié)果表明葡萄籽對自由基有較強清除作用[2]。也有以葡萄制品，如葡萄酒來進行體內(nèi)抗氧化作用研究的，實驗結(jié)果也表明食用了紅葡萄酒的實驗組大鼠的抗氧化酶活性和對照組有顯著性差異，并有所提高[3]。本實驗將通過觀察紅細胞中SOD和MDA的變化，探討葡萄的體內(nèi)和體外抗氧化功效。有助于對葡萄的營養(yǎng)價值和食療作用進行進一步分析。

1 實驗材料

1.1 原料與藥品

葡萄，市售，500 g。用榨汁機榨汁過濾，即得原汁，濃度標記為100%，實驗中作為高濃度，置冰箱低溫儲存。實驗時用蒸餾水將原汁配稀釋成50%（中濃度）、25%（低濃度）。

紅景天混懸液，取生命紅景天膠囊（四川艾麗碧絲制藥有限公司，川衛(wèi)食準字（2000）第069號，每粒膠囊含0.3g藥物），配成藥物濃度為0.06%的混懸液。

1.2 試劑

SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20110407）；MDA測試盒（南京建成生物工程研究所，批號：20110329）

1.3 儀器

紫外-可見分光光度計（UV-730，日本日立株式會社）；自動平衡離心機（TD24A-WS，長沙湘儀離心機儀器有限公司）

1.4 動物、血樣

人血樣本，本校附院提供；

昆明小鼠，體重19～21g，雌雄各25只，由成都中醫(yī)藥大學動物中心提供。

2 試驗方法

2.1 體內(nèi)抗氧化實驗

2.1.1 實驗動物的準備 取小鼠50只，雌雄各半，隨機分為五組：陽性對照組、空白對照組，高、中、低劑量實驗組，每組10只，雌雄各5只。以每天0.2 mL﹒10g-1的劑量灌胃，實驗組按高、中、低劑量分別給予濃度為100%、50%、25%的葡萄汁，陽性對照組的小鼠給予0.06%紅景天混懸液，空白對照組的小鼠給予蒸餾水，連續(xù)給藥20 d。最后一次給藥后50 min，通過摘取眼球的方法取各組小鼠的內(nèi)眥血約1mL，做肝素抗凝處理，測定SOD測試和MDA含量。

2.1.2 小鼠紅細胞中SOD的測試 取小鼠肝素抗凝全血50 μL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中，以1500 r﹒min-1的速度離心3 min，除去上清液，得離心后沉淀。按照SOD試劑盒說明加入各試劑，測各管在550 nm吸光度值。

2.1.3 小鼠紅細胞中MDA的測定 取小鼠肝素抗凝全血0.15 mL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中，按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測各管532 nm吸光度值。

2.2 體外抗氧化實驗

取新鮮人血樣本5 mL（5%EDTA抗凝），將血樣轉(zhuǎn)移入離心管以4000 r﹒min-1的速度離心10 min，將血漿分離，得到紅細胞，向其中加入等滲溶液至總體積80 mL，即得到紅細胞懸浮液。用葡萄原液稀釋配制成梯度濃度的葡萄待測液，濃度分別為5%、2.5%、1%、0.5%、0.25%、0.1%、0.05%。然后用潔凈干燥試管，按不同濃度分別給每支試管中加入1 mL紅細胞懸浮液，1 mL四氯化碳，1 mL葡萄待測液，作為實驗測試管。再用潔凈干燥試管加入1 mL紅細胞懸液，1 mL四氯化碳和1 mL等滲磷酸鈉緩沖液，作為陽性對照管。按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測各管532 nm吸光度值。葡萄的抗氧化作用以MDA的抑制率（IR%）表示。

IR%=（OD陽性對照-OD實驗測試組）*100%/OD陽性對照

3 實驗結(jié)果

3.1 體內(nèi)抗氧化實驗結(jié)果

3.1.1 小鼠紅細胞中SOD的測試結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進行統(tǒng)計檢驗，得到以下結(jié)果：見表1。

表1 葡萄對小鼠紅細胞內(nèi)SOD的影響（n=10）X±SD

紅景天組與空白對照組比較 *P＜0.05，葡萄組與對照組比較P＞0.05

結(jié)果說明：葡萄的三個劑量實驗組與空白對照組所得數(shù)據(jù)相比，P＞0.05，未見到顯著性差異。紅景天組與空白對照組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。紅景天組對小鼠SOD有抗氧化作用。

3.1.2 小鼠紅細胞中MDA的測定結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進行卡方檢驗，得到以下結(jié)果：見表2。

表2 葡萄對小鼠紅細胞內(nèi)MDA的影響（n=10）X±SD

紅景天組與空白對照組比較 *P＜0.05，葡萄組與對照組比較P＞0.05

結(jié)果說明：葡萄的三個劑量實驗組與空白對照組所得數(shù)據(jù)相比，P＞0.05，未見到顯著性差異，紅景組天與空白對照組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。紅景天組對小鼠MDA有抑制作用。

3.2 體外抗氧化實驗結(jié)果將各管的吸光度測出后，用“2.2”公式計算IR%后得到以下結(jié)果，見表3。

表3 葡萄體外抗氧化實驗（n=10）

結(jié)果說明：體外實驗中，葡萄能抑制紅細胞中MDA的產(chǎn)生，具有體外抗氧化作用。且有一定量效關系。

4 討論

本實驗的局限性：食品不同于藥物，本次實驗的實施時間有限，只有20 d，給小鼠進行葡萄的灌胃，雖然能保證進食量，但食品的功效不一定在短期內(nèi)就能夠體現(xiàn)出來，可能需要較長時間才能表現(xiàn)出來。比如在郭金英等人做的紅葡萄酒抗大鼠脂質(zhì)過氧化作用的研究[3]中，就對大鼠進行了為期12 w的灌胃。其次就是實驗過程中對葡萄的保存問題：本次試驗是將葡萄制成原汁后進行冰箱低溫保存，這個過程中可能存在葡萄汁中有效物質(zhì)的喪失。

通過查閱文獻可以看出葡萄的確充滿了營養(yǎng)價值，特別是它的抗氧化功效，更是對人體健康保護具有積極作用。但葡萄的食用價值不僅僅如此，它對人體的健康促進作用也非局限于葡萄的抗氧化功效。因此，對葡萄的特殊功效研究和有效成分的開發(fā)還具有無限的潛力。希望通過本文，能夠讓更多的人了解葡萄，重視葡萄的食療價值，從而通過食品來促進人類的健康。

[1] 孫長顥.營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學.北京：人民衛(wèi)生出版社,2007，110.

[2] 許申鴻,杭瑚,郝曉麗.葡萄籽化學成分分析及其抗氧化性質(zhì)的研究.食品工業(yè)科技.2000,21(2)：18.

[3] 李華.第四屆國際葡萄與葡萄酒學術研討會論文集.陜西：陜西人民出版社,2005,196.

Study on the antioxidant effect of grape/

CANGMU Jue, MA Meng-ting, HUANG Wan-yu, LI Qiao-yun//(1. First People 's Hospital of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;2.Chengdu Center for Disease Control &Prevention, Chengdu 610041, Sichuan; 3. Science and Technology Department of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;4.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan)

Objective: To investigate the antioxidant effect of grape. Method: In vivo experiment, rhodiola was used as positive control and distilled water as blank control. Three different concentrations of grape juice (25%, 50%, 100% ) were fed to the mice for 20 days. The contents of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde ( MDA) in mice erythrocyte were detected. In vitro experiment, the inhibitory rate of different concentrations of the grape juice on MDA in human blood were tested.Result: The result of in vivo experiments showed that rhodiola had antioxidant effect compared with the blank control (P＜0.05).There was no statistically signi fi cant difference of SOD and MDA between the blank control group and each of the three different concentrations of the grape juice ( P＞0.05). The result of in vitro experiment showed that different concentrations of the grape juice had an inhibitory effect on MDA. Conclusion: Grape has antioxidant effect in vitro, but no obvious effect on SOD and MDA in vivo antioxidation experiment in mice。

Grape; antioxidation; SOD；MDA

R 285

A

1674-926X(2017)04-010-02

1 西藏自治區(qū)第一人民醫(yī)院 西藏，拉薩 850000；2 四川省疾控中心 四川，成都 610041；3 西藏科技廳 西藏，拉薩 850000；4 成都中醫(yī)藥大學 四川成都 610075

參木決，女，(1973-)，主管藥師，從事藥房處方調(diào)劑的研究Tel：0891-6371936 Email：109548977@qq.com

李巧云，女，教授 Email：xyqlqy@126.com

2016-03-24