熒光定量PCR法檢測乙肝DNA與酶聯法檢測乙肝五項的關系

●王富考

熒光定量PCR法檢測乙肝DNA與酶聯法檢測乙肝五項的關系

●王富考

目的：臨床上常通過酶聯免疫吸附法檢測乙肝五項指標和熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA來對乙肝患者進行診斷，探討這兩種方法的關系。方法：本研究以523例來我中心就診的乙肝患者為研究對象，對其進行乙肝五項檢測和乙肝病毒檢測，并根據乙肝五項指標將患者進行分組，同時分析聯合應用乙肝五項和病毒DNA量進行診斷的關系。結果：根據乙肝五項指標結果可將患者分為6組，其中“大三陽”具有較高的病毒DNA陽性率和最高的DNA拷貝數（P＜0.05），另外HbeAg的出現伴隨著乙肝病毒的高檢出率。結論：對乙型肝炎的準確診斷需聯合應用酶聯免疫吸附法檢測肝五項和熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA量。

乙肝五項；酶聯免疫吸附法；熒光定量PCR法

目前臨床上常用的乙型肝炎診斷方法是檢測乙肝五項指標，熒光定量PCR能檢測患者血清中乙肝病毒DNA拷貝數。將乙肝五項檢測與乙肝病毒DNA檢測聯合應用于乙肝的診斷和篩查將大大減少誤診率。本文以523例乙肝患者為研究對象，探討了乙肝患者體內的血清標志物與乙肝病毒DNA量之間的關系，并為臨床上聯合使用乙肝五項指標和乙肝病毒載量進行乙型肝炎診斷提供依據[1]。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選擇2014年3月至2016年9月在我中心確診的523例乙型肝炎患者，其中男性293例，女性230例，患者年齡介于22～67歲，平均為43.7歲。抽取病人空腹時的靜脈血2mL，分離血清后分成兩份冷凍保存，一份用于免疫吸附法檢測乙肝五項，一份用于熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA量。

1.2 研究方法

1.2.1 乙肝五項檢測

采用酶聯免疫吸附法檢測所有患者血清中的HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbsAb、HbcAb。嚴格按照廈門新創乙肝五項檢測試劑說明書進行檢測和結果評定。使用普朗9602G酶標儀進行檢測，并將病例分為6組。

1.2.2 乙肝病毒DNA測定

乙肝病毒DNA樣品送至艾迪康檢驗中心檢測。

1.3 統計學處理

病毒DNA拷貝數以mean±SD copies/mL表示，計數資料用百分比表示。用SPSS 19.0進行數據分析，采用t檢驗比較不同組之間的DNA拷貝數，用卡方檢驗比較不同組之間乙肝病毒陽性率，P＜0.05表示差異具有顯著性。

2 結果

2.1 乙肝五項檢測結果

根據532例乙肝患者血清樣本乙肝五項指標的檢測結果，可將樣本分為6組，結果見表1。

表1 523例患者血清樣本乙肝病毒DNA檢測結果

2.2 不同組之間結果的比較

從檢出率看，1和5組的乙肝病毒DNA陽性率要明顯高于其他組（P＜0.05）。臨床上將第1組的乙肝五項模式成為“大三陽”，同時第1組的DNA檢出濃度也要顯著高于其他組（P＜0.05）。臨床上將第2組稱為“小三陽”，從表1中得出“小三陽”組的乙肝病毒DNA檢出率要遠低于“大三陽“組，而平均檢出濃度與”大三陽“組處于同一數量級。第6組所有患者均未檢出乙肝病毒DNA。

3 討論

3.1 乙肝五項與乙肝病毒DNA的關系

此次研究中“大三陽”患者共255例，此類患者體內還未產生病毒抗體，乙肝病毒處于快速復制階段，具有傳染性，對乙肝病毒DNA的結果也表明，此類患者血清中病毒DNA拷貝數也明顯高于其他組（P＜0.05）。此次研究中“小三陽”患者有169例，其中乙肝病毒陽性僅79例（46.7%），但在陽性患者中乙肝病毒的DNA濃度也處于較高水平，僅低于“大三陽”患者，“小三陽”中仍有部分患者檢測出乙肝病毒DNA可能是因為病毒發生變異而檢測不到HBeAg。根據乙肝五項指標，將本次研究的病例分為6組，其中第1、3、5組中HBeAg都為陽性，且都具有較高的乙肝病毒DNA檢出率，表明HBeAg陽性結果提示乙肝病毒復制活躍，具有強傳染性。第4、6組中HBsAg為陽性，而HBSAb、HBeAg、HBeAb為陰性，表明患者為乙肝病毒攜帶者，或患者處于恢復期，病毒活力弱，處于較低水平[2]。這兩組的乙肝病毒DNA陽性率也較低，第6組未檢出病毒DNA，而在第4組中乙肝病毒DNA也處于較低水平，所以血清中未檢出病毒DNA并不代表體內沒有乙肝病毒，此時需結合乙肝五項結果進行綜合判斷。

3.2 酶聯免疫與熒光定量PCR的聯合應用

酶聯免疫吸附法檢測乙肝五項指標的優點是簡單、快捷、廉價、特異性好。但乙肝五項指標并不能真實的反應病毒在體內的復制情況。熒光定量PCR法檢測病毒DNA的優點是靈敏度高、特異性好、能及時準確反應病毒復制水平。熒光定量PCR法檢測費用較酶聯免疫法高，當病毒處于低水平復制時，也不能準確檢測出病毒的存在。所以臨床上將兩種方法結合起來對乙肝患者進行診斷是必然的趨勢。

4 結論

臨床上常用的乙肝診斷方法包括酶聯免疫吸附法和熒光定量PCR法，此兩種方法各有優缺點，臨床上常將兩種方法聯合應用于乙肝的診斷和抗病毒藥物的療效評價。本研究結果表明對乙肝患者的準確診斷和真實反映病毒在患者體內的情況需要綜合參考乙肝五項指標和乙肝病毒DNA量[3]，所以將酶聯免疫吸附法和熒光定量PCR法聯合應用于乙型肝炎的診斷值得進一步推廣。

（作者單位：甘谷縣疾病預防控制中心）

[1]尚小云.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝血清標志物相關性分析[J].中國保健營養,2014(4):1836.

[2]石伍華,王海清,許艾明等.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關性分析[J].臨床和實驗醫學雜志,2009,8(1):87-88.

[3]黃靜.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學檢測的探討[J].醫學檢驗,2013,3(6):110-112.