丁苯酞對腦白質(zhì)疏松患者大腦中動脈血流速度和外周血內(nèi)皮微粒的作用

袁志俊， 何曉英， 李嬌紅， 吳 勇， 李小剛

丁苯酞對腦白質(zhì)疏松患者大腦中動脈血流速度和外周血內(nèi)皮微粒的作用

袁志俊， 何曉英， 李嬌紅， 吳 勇， 李小剛

目的探討丁苯酞對腦白質(zhì)疏松(LA)患者大腦中動脈血流速度和外周血內(nèi)皮微粒(CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+)的作用。方法收集我院LA患者，其中輕度LA1組58例，中度LA2組30例，重度LA3組15例；收集同期健康體檢為非腦白質(zhì)疏松者NLA組50例；按隨機(jī)數(shù)字表法將各組隨機(jī)分為對照組和丁苯酞組。對照組給予常規(guī)治療,丁苯酞組在常規(guī)治療+丁苯酞軟膠囊0.2 g 口服，每日3次，治療療程為12 w。各組均于治療前后測定大腦中動脈平均流速(Vm)、收縮期峰值流速(Vs)、和博動指數(shù)(PI)；流式細(xì)胞儀檢測外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+的表達(dá)百分率。結(jié)果LA2、LA3組的各組12 w后較入組時 Vs、Vm增快，PI值降低(P<0.05)，丁苯酞組較對照組變化更明顯(P<0.05)；LA各組12 w后較入組時CD31+/CD42b-、CD144+表達(dá)下降，CD62E+表達(dá)升高(P<0.05)，丁苯酞組較對照組變化更明顯(P<0.05)。結(jié)論丁苯酞軟膠囊可改善腦白質(zhì)疏松患者腦血流情況，外周血內(nèi)皮細(xì)胞微粒可早期反應(yīng)腦血管的內(nèi)皮調(diào)節(jié)功能，有望成為一種評估腦微血管血流情況的重要指標(biāo)。

丁苯酞； 腦白質(zhì)疏松； 大腦中動脈血流速度； 內(nèi)皮微粒

腦白質(zhì)疏松癥(Leukoaraiosis，LA)是一個影像學(xué)概念，頭部MRI表現(xiàn)為T1低信號、T2高信號，主要是一種彌漫性腦缺血所致的神經(jīng)傳導(dǎo)纖維脫髓鞘疾病。血管內(nèi)皮微粒是內(nèi)皮細(xì)胞在激活或者凋亡時釋放出直徑約為0.1～1.0 μm的小囊泡[1,2]，是血管內(nèi)皮損傷的特異性分子標(biāo)志，在正常人機(jī)體循環(huán)中有少量表達(dá)，但在內(nèi)皮細(xì)胞激活或凋亡時會大量釋放到外周血中[3]。因此,檢測外周血中血管內(nèi)皮微粒的水平成為一種新的評估血管內(nèi)皮功能障礙的方法。目前大多數(shù)研究集中于報道內(nèi)皮微粒與動脈粥樣硬化的關(guān)系，而內(nèi)皮微粒與腦白質(zhì)疏松的關(guān)系及丁苯酞對腦白質(zhì)疏松的干預(yù)作用鮮有報道。基于此，本研究擬通過病例對照研究丁苯酞治療前后腦白質(zhì)疏松患者大腦中動脈血流速度和外周血內(nèi)皮微粒CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+的變化及相關(guān)性分析，探討丁苯酞軟膠囊是否可用于改善腦白質(zhì)疏松患者腦血流情況，外周血內(nèi)皮微粒是否可做為腦白質(zhì)疏松患者預(yù)測腦血流情況的特異性指標(biāo)。

1 對象與方法

1.1 收集2016年1月-2016年12月西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院就診患者，通過頭部MRI檢查診斷為腦白質(zhì)疏松患者，根據(jù)腦室周圍低密度范圍、相應(yīng)融合程度與腦白質(zhì)容積之比，將LA分為3度:(1)輕度，低密度區(qū)少于白質(zhì)的1/4，限于腦室前、中、后的腦室周圍區(qū)，可見散在的局限性低密度影；(2)中度，低密度區(qū)占腦白質(zhì)的1/4～1/2，在側(cè)腦室前、中、后皮質(zhì)下白質(zhì)區(qū)可見非融合性或部分融合的低密度影；(3)重度，低密度區(qū)占腦白質(zhì)的1/2以上，融合成片，累及雙側(cè)腦室周圍及皮質(zhì)下白質(zhì)區(qū)。LA組103例，其中輕度LA1組58例，中度LA2組30例，重度LA3組15例；同時收集同期門診健康體檢為非腦白質(zhì)疏松者NLA組50例；按隨機(jī)數(shù)字表法將各組隨機(jī)分為對照組和丁苯酞組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)頭部MRI提示有腦白質(zhì)疏松；(2)通過簽署知情同意書；(3)通過醫(yī)院倫理委員會的審查。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除腦梗死、腦出血、腦腫瘤、明顯腦萎縮、精神障礙性疾病及癡呆病史；(2)排除多發(fā)性硬化、酒精中毒、一氧化碳中毒等代謝性腦病、重要臟器功能不全、甲狀腺功能減退等；(3)對芹菜過敏、文盲或難以配合完成研究者。

1.2 一般資料 記錄所有患者年齡、性別、高血壓、糖尿病、房顫、吸煙、飲酒等病史；所有研究對象均采集清晨空腹肘靜脈血，采用全自動生化分析儀測定總甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸 (UA)；勁動脈彩超檢測頸動狹窄情況 (狹窄率≥50%或閉塞)。

1.3 干預(yù)措施 LA組患者按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為對照組及干預(yù)組，對照組常規(guī)監(jiān)測控制血壓、血糖、血脂等危險因素及對癥治療；干預(yù)組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上，加用丁苯酞軟膠囊0.2 g(0.1 g/粒，石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20050299)，每日3次，治療療程為12 w。

1.4 經(jīng)顱多普勒超聲(transcranial doppler sonography，TCD)檢查 應(yīng)用德國DWL MultiDopX4型TCD 檢測儀,選取1.6 MHz探頭,在深度40～65 mm的范圍內(nèi)檢測到朝向探頭的血流信號確定為大腦中動脈,分別記錄雙側(cè)大腦中動脈的收縮期峰血流速度(Vs),舒張期末血流速度(Vd),平均血流速度(Vm),大腦中動脈搏動指數(shù)PI =(Vs-Vd)/Vm,取雙側(cè)均值記錄PI值。

1.5 流式細(xì)胞儀檢測內(nèi)皮微粒 所有受試對象均于清晨空腹靜息狀態(tài)下采集外周血5 ml，離心取上清血漿50 μl加入特異性熒光標(biāo)記抗體(anti-CD42- PE,anti-CD31-FITC,anti-CD144-APC，anti-CD62E- PE) 0.5 μg或等量的同型對照抗體 mice IgG1/PE，mice IgG1/FITC，mice IgG1/PE，mice IgG1/PE)。在室溫下孵育20 min后依次加入1 ml PBS 液和已知濃度的1.0 μm和10.0 μm標(biāo)準(zhǔn)微球混合液后，上流式細(xì)胞儀檢測，并記錄百分率。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 全部資料采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行處理，計數(shù)和計量資料分別采用χ2檢驗和t檢驗或單因素方差分析。危險因素采用Logistic回歸分析，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組的基線資料 與NLA組比較，LA組患者的年齡、性別、吸煙、飲酒、UA差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高血壓、糖尿病、房顫、頸動脈狹窄、TC、TG、LDL-C、Hcy、HbA1c差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。高血壓(OR=8.308,95%CI1.496～8.835,P=0.003)、糖尿病(OR=1.211,95%CI1.002～2.012,P=0.027)、房顫(OR=7.542,95%CI1.565～6.876,P=0.008)、頸動脈狹窄(OR=1.157,95%CI1.175～1.997,P=0.031)、LDL-C(OR=7.662,95%CI1.678～7.065,P=0.005)、Hcy(OR=1.453,95%CI0.963～2.226,P=0.013)、HbA1c(OR=1.392,95%CI0.981～2.148,P=0.019)是腦白質(zhì)疏松的獨(dú)立危險因素。

2.2 各組患者大腦中動脈血流速度、PI值及內(nèi)皮微粒的比較 與NLA組入組時比較，LA1、LA2、LA3組的Vs、Vm降低，余指標(biāo)均增高(P<0.05)；與LA1組入組時比較，LA2、LA3組的Vs、Vm降低，余指標(biāo)均增高(P<0.05)；與LA2組入組時比較，LA3組的Vs、Vm降低(P<0.05)，余指標(biāo)均增高(見表2)。NLA組各組比較，Vs、Vm、PI值及內(nèi)皮微粒CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；LA各組的對照組入組時與丁苯酞組入組時比較，各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與入組時比較，LA2、LA3組的各組12 w后 Vs、Vm增快，PI值降低，LA1、LA2、LA3組的各組12 w后 CD31+/CD42b-、CD144+降低，CD62E+增多(P<0.05),且丁苯酞組12 w后較對照組12 w后各指標(biāo)變化更明顯(P<0.05)(見表2)。

表1 患者的基線資料

與NLA組比較△P<0.05

表2 各組患者大腦中動脈血流速度、PI值及內(nèi)皮微粒的比較

與NLA組入組時比較*P<0.05，與LA1組入組時比較#P<0.05，與LA2組入組時比較□P<0.05；與各組對應(yīng)入組時比較△P<0.05；與各組對照組12 w后比較▽P<0.05

3 討 論

丁苯酞軟膠囊的活性成分為Dl-3-正丁基苯酞，為人工合成的消旋體，與從芹菜籽中提取的芹菜甲素結(jié)構(gòu)相同，是國內(nèi)腦血管領(lǐng)域第一個擁有自主知識產(chǎn)權(quán)并應(yīng)用于臨床的藥物，其可阻斷缺血腦組織的損傷，在神經(jīng)功能缺失治療中是有效和安全的[4]。丁苯酞軟膠囊可以重構(gòu)缺血區(qū)的微循環(huán)，顯著縮小腦梗死的面積；并且可以保護(hù)線粒體功能，恢復(fù)腦能量代謝；同時還具有抗血栓形成和抗血小板凝聚的作用[5,6]。Li XX等實驗結(jié)果表明[7]，長期服用丁苯酞對于腦梗死的二級預(yù)防是安全有效的。丁苯酞還能通過降低花生四烯酸的含量，提高腦血管內(nèi)皮一氧化氮和前列環(huán)素的水平，抑制 GABA 的釋放，從而降低細(xì)胞內(nèi) Ca+濃度，抑制氧自由基和提高抗氧化酶活性等機(jī)制發(fā)揮上述藥效作用[8,9]。

LA常見于老年人，好發(fā)于深穿支動脈供血的分水嶺區(qū)，發(fā)病機(jī)制包括：小動脈硬化導(dǎo)致的管腔狹窄；持續(xù)性的低灌注；小血管自動調(diào)節(jié)能力障礙等[10,11]。Anil等研究表明[12]，LA是小血管彌漫性病變的標(biāo)記，病理學(xué)主要表現(xiàn)為彌漫性小血管玻璃樣變性，血管壁增厚及內(nèi)皮的破壞。因此，磁共振上的白質(zhì)疏松提示顱內(nèi)微循環(huán)及血管神經(jīng)單元的嚴(yán)重破壞。然而腦微循環(huán)在腦血流儲備的調(diào)節(jié)方面起重要作用，如腦小血管周圍的神經(jīng)可調(diào)節(jié)小動脈、小靜脈及微循環(huán)平滑肌的收縮和舒張；血管內(nèi)皮細(xì)胞可釋放各類細(xì)胞因子，引發(fā)血管受損或舒張；毛細(xì)血管周細(xì)胞通過調(diào)節(jié)毛細(xì)血管舒縮的控制調(diào)節(jié)腦血流。Joanna等[13,14]研究表明，白質(zhì)疏松等級越嚴(yán)重，小血管的結(jié)構(gòu)病變越嚴(yán)重，腦血流調(diào)節(jié)功能受損越嚴(yán)重。本研究結(jié)果顯示：高血壓、糖尿病、房顫、頸動脈狹窄、LDL-C、Hcy、HbA1c是腦白質(zhì)疏松的危險因素，危險因素越多的患者腦白質(zhì)疏松的程度越重。TCD是一種用于評估顱內(nèi)動脈血流動力學(xué)及顱內(nèi)主干動脈結(jié)構(gòu)變化的非侵入性檢查方法。TCD檢測的PI值與動脈血流速度的變化密切相關(guān)，PI值升高表明腦血管阻力增高，多見于高血壓、動脈硬化、動脈狹窄、 動脈痙攣。大腦中動脈的血管走形直且易檢測，其PI可以作為研究的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示：與NLA組比較，LA1、LA2、LA3各組的Vs、Vm降低，PI增高,且腦白質(zhì)疏松程度越重變化越明顯，說明腦白質(zhì)疏松程度越重腦血管的調(diào)節(jié)能力越差。LA2組、LA3組的各組經(jīng)治療12 w后Vs、Vm增快，PI值降低，且丁苯酞組較對照組變化更明顯，表明通過常規(guī)控制危險因素后，中重度腦白質(zhì)疏松患者大腦中動脈的供血情況改善，丁苯酞軟膠囊聯(lián)合治療的患者改善更明顯。而LA1組Vs、Vm、PI變化不明顯，可能是因為輕度腦白質(zhì)疏松患者血管損傷較輕，尚未影響腦微循環(huán)的血流儲備。

內(nèi)皮細(xì)胞膜微粒(EMPs)是各種原因?qū)е碌膬?nèi)皮細(xì)胞損傷所釋放的產(chǎn)物，而刺激物可以選擇性的調(diào)節(jié)EMPs的組成，并從而調(diào)節(jié)了它們所能傳送的生物學(xué)信息。EMPs攜帶有來自其母體細(xì)胞膜表面的核因子及抗原，通過特殊的抗體可以用來區(qū)分不同微粒的特性。導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷的有CD144+、CD51+/61-、CD105+、CD31+等表型，而促進(jìn)血管內(nèi)皮修復(fù)的有CD62E+、CD54+、CD106+等表型[1]。EMPs在內(nèi)皮功能障礙、炎癥反應(yīng)、血栓形成及血管再生方面發(fā)揮重要作用，并且在動脈粥樣硬化的形成、腦血管狹窄、腦血管重構(gòu)及急性缺血性腦卒中中扮演重要的角色[15～18]。目前研究報道[2]，外周血血中EMPs的數(shù)量可以用來反映血管的損傷情況，可作為血管功能失調(diào)的標(biāo)志，在高血壓、冠心病和缺血性腦卒中等血管性疾病的患者中EMPs的數(shù)量明顯增加。本研究結(jié)果顯示：與NLA組比較，LA1、LA2、LA3各組的CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+表達(dá)均增高，且腦白質(zhì)疏松程度越重變化越明顯，說明腦白質(zhì)疏松程度越重腦血管的內(nèi)皮損傷越嚴(yán)重。LA各組治療12 w后對照組和丁苯酞組的CD31+/CD42b-、CD144+表達(dá)下降，CD62E+表達(dá)升高，以丁苯酞聯(lián)合治療組變化更明顯；說明通過常規(guī)控制危險因素后，腦白質(zhì)疏松患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有所恢復(fù)，且丁苯酞聯(lián)合治療組患者恢復(fù)更明顯。其中，與TCD結(jié)果不同， LA1組患者內(nèi)皮細(xì)胞微粒與NLA組比較，CD31+/CD42b-、CD144+、CD62E+表達(dá)均升高，說明即使是輕度腦白質(zhì)疏松，內(nèi)皮細(xì)胞微粒也能較早的出現(xiàn)異常，而通過TCD檢測的腦血管流改變，則需要腦白質(zhì)疏松中重度損害時才能被檢測出來。進(jìn)一步表明，EMPs可早期反應(yīng)腦血管的內(nèi)皮調(diào)節(jié)功能，有望成為一種評估腦微血管血流儲備的重要指標(biāo)。

總之，丁苯酞軟膠囊可應(yīng)用于改善腦白質(zhì)疏松患者腦血流的情況，外周血EMPs可早期反應(yīng)腦血管的內(nèi)皮調(diào)節(jié)功能，有望成為一種評估腦微血管血流儲備的重要指標(biāo)。

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Effectsofbutylphthalideonthemiddlecerebralarteryflowvelocityandperipheralbloodendothelialmicroparticlesinpatientswithleukoaraiosis

YUANZhijun,HEXiaoying,LIJiaohong,etal.

(DepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity,Sichuan,Luzhou646000,China)

ObjectiveTo investigate the butylphthalide on leukoaraiosis (LA) artery blood flow velocity and peripheral blood endothelial microparticles in patients with brain (CD31+/CD42b-,CD144+,CD62E+) role.MethodsLA patients in our hospital,including 58 cases of mild LA1 group,moderate LA2 group 30 cases,15 cases of severe LA3 group;collecting healthy non leukoaraiosis group NLA 50 cases;were randomly divided into control group and butylphthalide group.The control group was given conventional treatment,and the butylphthalide group was treated with conventional treatment+Butylphthalide Soft Capsules 0.2 g orally,3 times a day,with a course of treatment of 12 w.Each group were measured before and after treatment in the middle cerebral artery mean flow velocity (Vm),peak systolic velocity (Vs),and the pulsatile index (PI);flow cytometry was used to detect the expression of peripheral blood endothelial microparticles CD31+/CD42b-,CD144+,CD62E+.ResultsLA2 and LA3 groups were 12 w than groups Vs and Vm increased,PI decreased (P<0.05),butylphthalide group than in the control group changes more obviously (P< 0.05).LA group 12 w compared with group CD31+/CD42b-,CD144+expression decreased,CD62E+expression increased (P<0.05),the Ding Bentai group than in the control group changes more obviously (P<0.05).ConclusionButylphthalide Soft Capsules can improve brain white matter in patients with cerebral blood flow,peripheral blood EMPs early response to cerebral vascular endothelial function,is expected to become an important index for evaluation of cerebral microvascular blood flow.

Butylphthalide; Leukoaraiosis; Middle cerebral artery flow velocity; Endothelial microparticles

R742

A

1003-2754(2017)10-0909-04

2017-08-12；

2017-103

四川省衛(wèi)生廳(110368)

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 瀘州 646000)

李小剛，E-mail：704103092@qq.com