氟嗎啉原藥大鼠急性吸入毒性試驗

吳宗澄

摘要：為測定氟嗎啉原藥對大鼠的急性吸入毒性，求出半數致死濃度（LC50），同時為亞慢性和其他毒理學研究中接觸劑量的選擇提供依據，參照《農藥登記毒理學試驗方法》，以中華人民共和國國家標準（GB15670-1995）為準則，用SD（Sprague Dawley）大鼠作為試驗動物，對氟嗎啉原藥進行了急性吸入毒性試驗。結果表明：氟嗎啉原藥對SD雌雄大鼠急性吸入毒性試驗LC50均大于2093±30 mg/m3。 根據GB15670-1995《農藥登記毒理學試驗方法》大鼠急性吸入毒性分類標準，氟嗎啉原藥大鼠急性吸入毒性為低毒，該結論可為安全使用提供依據。

關鍵詞：氟嗎啉原藥；大鼠；急性吸入毒性；LC50

中圖分類號：X43

文獻標識碼：A文章編號：16749944（2017）18021902

1引言

氟嗎啉原藥是沈陽化工研究院自主研制的新型殺菌劑＼[1＼]。該殺菌劑是一種內吸型殺菌劑，主要用于防治霜霉和疫霉屬病害，由卵菌綱病原菌引起的霜霉病、晚疫病等重要植物病害，尤其用于防治抗性病害＼[1，2＼]。氟嗎啉是我國第一個真正實現工業化且具有自主知識產權的農藥品種，也是第一個獲得中國發明專利的農用殺菌劑＼[3＼]。氟嗎啉原藥殺菌活性高，抗菌譜廣，與環境相容性優于國外同類產品烯酰嗎啉＼[4＼]。但目前尚未見有關氟嗎啉原藥吸入毒性的報道。本實驗參照《農藥登記毒理學試驗方法》，以中華人民共和國國家標準（GB15670-1995）為準則[5]，通過對SD大鼠的急性吸入毒性試驗來檢測氟嗎啉原藥的急性吸入毒性，了解其經呼吸道進入動物機體后對呼吸道及全身的損傷和危害程度，為該農藥的毒理學安全評價提供資料。

2材料與方法

2.1受試物與儀器

氟嗎啉原藥為白色結晶固體，純度為95%，由沈陽化工研究院有限公司提供。稱取 95.0 g 受試樣品，加入 5.0 g 白炭黑用行星式球磨儀進行粉碎和研磨，配成 95%的受試樣待用。所用儀器有：HOPE-MED 8052H粉塵類動物口鼻多濃度動態暴露系統購自天津開發區合普工貿有限公司，賽多利斯BS124S電子天平購自杭州匯爾儀器設備有限公司，行星式高能球磨儀購自德國萊弛公司，TY-08C智能個體粉塵取樣機購自鹽城天悅儀器儀表有限公司，3321藥物氣溶膠粒徑普儀系統購自美國TSI公司。

2.2動物來源與飼養環境

SPF級SD大鼠40只，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供（許可證號：SCXK<京>2012-0001）。引入動物后進行適應檢查，適應期每籠2只動物，適應時間12～13 d，引入當天進行健康檢查，并稱量體重。飼料為滅菌全價營養粉料，自由飲水，動物房溫度為20.13～23.82 ℃，濕度為40.75%～69.89%，光周期自動控制，每天明暗各12 h。

2.3試驗方法

2.3.1劑量設計

參 照 農 藥 毒 理 學 試 驗 方 法（GB15670 - 1995），設計2000 mg/m3、1000 mg/m3、500 mg/m3、200 mg/m3，根據體重采用隨機分組法分為4組，每組10只動物，雌雄各半。分組時候組內動物的體重不超過平均體重的±20%。如果2000 mg/m3劑量組試驗動物沒有出現死亡，則判定急性吸入毒性試驗LC50大于2000 mg/m3。

2.3.2染毒途徑及方法

采用動式吸入染毒法，使用HOPE-MED 8052H固氣類動物口鼻多濃度動態染毒控制裝置對動物進行染毒。試驗開始前，將雌雄各半10只動物分別放入固定器中，將固定器安裝在染毒柜上，然后密封染毒柜。定量進樣的供試品同空調過濾的壓縮空氣（0.04 m3）吸入室內混合，設置進樣速度和混合氣體流量，通過柜頂部的噴頭連續向柜內發生氣溶膠。通過柜底部連接的尾氣吸收過濾裝置進行尾氣吸收。染毒柜內設置溫度為22 ℃±3 ℃，染毒期間試驗動物禁食禁水。動物給藥前先對染毒柜內濃度進行調試，2次檢測染毒柜內濃度波動小于±20%，進行正式試驗，動物暴露染毒時間為2 h。染毒結束動物歸鼠籠觀察14 d，動物自由飲水和攝食。

2.3.3給藥暴露參數檢測

染毒過程中對動物呼吸帶供試品實際濃度和粒徑分布進行分析，對進氣流量、進樣流量、濃度測量、染毒柜溫度、相對濕度、氧氣濃度進行檢測。

濃度測量：采樣前稱量濾膜重量為A1，采樣結束后稱量濾膜重量為A2，計算采樣質量（M），M=A2-A1，氣溶膠濃度為C（mg/m3）=采樣質量（M）/采樣體積（V）×1000 （L/m3）。

粒徑測定：使用粒子空氣動力學粒徑譜分布儀3321進行粒徑測定。主要測定3個指標，其一：可吸入部分的粒徑數（<4μm），其二：粒子空氣動力學直徑質量中值（MMAD），其三：粒子空氣動力學幾何標準差（GSD）。

2.3.4動物觀察與體重稱量

染毒結束后對動物進行觀察，24 h以后每天觀察1次至第14 d。記錄各動物中毒癥狀及其發生和緩解、消失的時間。仔細觀察和記錄被毛、眼睛和粘膜、呼吸系統、生殖泌尿系統、神經消化系統，特別注意觀察供試品對呼吸系統的影響，如呼吸道刺激反應，呼吸節律的變化，以及呼吸和呼吸模式的改變。

體重稱量：染毒前稱量動物體重，染毒后7 d和14 d各稱量1次動物體重。

2.3.5大體解剖檢查

試驗期末對全部存活動物CO2麻醉，放血進行大體解剖。解剖時候對動物進行全面的仔細的肉眼觀察，特別關注肺部及上呼吸道的刺激及局部毒性反應，同時檢查顱腔、胸腔、腹腔、各個天然孔道及其內容物，詳細記錄每只動物的大體解剖改變。

2.3.6數據處理和結果評價

統計各組死亡率與存活率，體重結果以均值加減標準差形式體現，如果最高劑量組（2000 mg/m3劑量組）試驗動物沒有出現死亡，則判定急性吸入毒性試驗LC50大于2000 mg/m3劑量組劑量均值加減標準差。然后按照表1進行毒性分級。endprint

3.2粒徑分布

使用粒子空氣動力學粒徑譜分布儀3321管理軟件進行采集和測定，主要測定三個指標，其一：可吸入部分的粒徑數（<4 μm），其二：粒子空氣動力學直徑質量中值（MMAD），其三：粒子空氣動力學幾何標準差（GSD），結果見表3。

3.4死亡結果及觀察

2093 mg/m3濃度組動物染毒期間及染毒后14 d觀察期間，所有受試動物沒有發生死亡，觀察均也沒見異常。

3.5體重稱量結果

2093 mg/m3濃度組動物體重在試驗期間呈現增長趨勢，結果見表5。

3.6解剖與組織學觀察結果

觀察結束，所有受試動物的解剖與組織學檢查均未見異常。

4結論與討論

如前所述，如果2000 mg/m3劑量組試驗動物沒有出現死亡，則判定急性吸入毒性試驗LC50大于2000 mg/m3。根據試驗結果氟嗎啉原藥對雌雄大鼠半數致死濃度（LC50，2 h）分別如下：雄性大鼠：>2093±30 mg/m3，雌性大鼠：>2093±30 mg/m3。根據GB15670-1995《農藥登記毒理學試驗方法》大鼠急性吸入毒性分類標準＼[5＼]，氟嗎啉原藥急性吸入毒性為低毒。

隨著農業發展水平的提高，我過創新農藥越來越多，農藥的安全性問題也越來越得到廣泛的關注，氟嗎啉殺菌活性高，抗菌譜廣，與環境相容性好，具有較高的市場開發潛力。近年來，關于氟嗎啉急性吸入毒性尚未見報道，本實驗通過對SD大鼠的急性吸入毒性試驗來檢測氟嗎啉原藥的急性吸入毒性，結果表明，氟嗎啉毒性為低毒，若制成有效的噴霧劑，不僅提高了藥物的吸收速度，而且避免了其他給藥途徑帶來的不良反應，極大地提升了用藥的安全性。

參考文獻：

[1]

劉武成，劉長令. 新型高效殺菌劑氟嗎啉 ＼[J＼]. 農藥，2002（1）：8～11.

＼[2＼]李鳳珍，王捷，姚寶玉，等. 氟嗎啉原藥大鼠慢性毒性與致癌試驗＼[J＼].農藥，2005（1）.

＼[3＼]高貽軒. 氟嗎啉和唑菌酯在人參上的殘留動態及最大殘留限量標準的制定 ＼[D＼]. 長春：吉林農業大學，2016.

＼[4＼]HUA Chenlei，KOTS K，KETELAAR T，et al. Effect of Flumorph on F-Actin Dynamics in the Potato Late Blight Pathogen Phytophthora infestans ＼[J＼]. Phytopathology，2015，105（4）： 419-423.

＼[5＼]中華人民共和國農業部.GBI5670-1995.農藥登記毒理學試驗方法＼[S＼].北京：中國標準出版社，1995.

Acute Inhalation Toxicity Test of Flumorph Technical on Rat

Wu Zongcheng

（Safety Evaluation Center of Shenyang Research Institute of Chemical Industry Ltd.， Shenyang 110021， China）

Abstract： ＼[Aims＼] To determine acute inhalation toxicity test of Flumorph Technical on rat， this paper obtained the median lethal concentration （LC50） and provided evidence for the selection of exposure dose for sub-chronical study. ＼[Methods＼] The method was designed to meet the pesticide registration toxicology test method from the national standard of the Peoples Republic of China （GB15670-1995）. The study was performed to assess the potential for acute inhalation toxicity of the Flumorph Technical in SD rats. ＼[Results＼]The acute inhalation LC50of SD male and female rats for Flumorph Technical was more than 2093±80 mg/m3. ＼[Conclusions＼] According to GB15670-1995 pesticide registration toxicological test methods of Rat Acute Inhalation Toxicity Classification Standards， Fluorine morpholine reversed-phased rat acute inhalation toxicity is low toxicity. The conclusions provide the basis for safe use.

Key words： Flumorph Technical； rat； acute inhalation toxicity； LC50endprint