非小細胞肺癌患者血清血管生成素樣蛋白2水平的臨床意義

程亮 章斌 于裕 張穎

非小細胞肺癌患者血清血管生成素樣蛋白2水平的臨床意義

程亮 章斌 于裕 張穎

目的探索非小細胞肺癌患者血清血管生成素樣蛋白2水平的臨床意義。方法收集我院收治的47例非小細胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者，同時選取同期健康體檢者為對照，檢測兩組人群的血清血管生成素樣蛋白2(angiopoietin-like protein2, ANGPTL2)水平。并應用ROC/AUC分析其診斷的敏感性和特異性。結果NSCLC患者血清ANGPTL2水平顯著高于健康對照組(6342±2048對3600±1748 pg/mL，P<0.0001)。ANGPTL2水平的升高與臨床分期、淋巴結轉移密切相關。結論血清ANGPTL2是臨床上潛在有效的診斷NSCLC的生物標記物。

非小細胞肺癌；血管生成素樣蛋白2

在全球范圍內，肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率均很高，5年生存率僅16%左右[1],其中，85%為非小細胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)。在我國，隨著社會經濟的發展、人口已經老齡化以及大氣污染日益加重，肺癌也逐漸成為惡性疾病死亡的首要原因[2]。早期的肺癌手術后5年生存率很高，甚至可以通過手術獲得治愈。因此，如何盡早發現、診斷肺癌是提高療效的關鍵。由于血清樣本獲取有著簡單、易行、創傷小的優點，找到合適、高效的肺癌血清診斷標記物有著極大的社會效益。

惡性腫瘤的發生、發展是多種因素共同作用的結果。慢性炎癥刺激在癌癥發生、發展，侵襲和轉移中發揮了重要作用[3]。血管生成素樣蛋白2(angiopoietin-like protein2, ANGPTL2)屬于分泌性細胞外基質蛋白家族，與慢性炎癥關系密切。NSCLC患者血清中ANGPTL2的水平如何以及其診斷價值國內尚少有報道。因此，本研究旨在探索NSCLC患者血清中的ANGPTL2濃度與患者臨床特征之間的關系并分析其可能存在的診斷價值。

資料與方法

一、一般資料

我們收集了2015-2016年在本院接受手術治療的47例NSCLC患者的血清樣品。 其中男性27 例，女性20 例；年齡51-70歲，平均(63.27±7.55)歲；同時選擇我院健康體檢者47例為對照組，男性30例，女性17例；年齡50-68 歲，平均(62.19±7.39)歲。所有入選者均簽署知情同意書。兩組入選者的年齡、性別具有可比性，差異均無統計學意義(P>0.05)。所有患者均經手術病理檢查確診，并按照國際抗癌聯盟TNM分期標準進行分期?；颊叩脑敿毰R床病理參數總結在(表1)中。

二、血清樣本檢測

在手術前獲得血液樣品。 離心后分離血清(2500rpm，10分鐘)并儲存在-80℃超低溫冰箱中。所有標本均由同一名醫師使用酶聯免疫吸附法(ELISA)試劑盒(Quantikine; R&D Systems，Minneapolis，Minn)測定，根據制造商的說明書測量ANGPTL2的水平。 所有樣品均一式兩份檢查，并將二者的平均值用于統計分析。

三、數據統計

結 果

一、 NSCLC患者血清ANGPTL2水平與健康對照的關系

NSCLC患者血清ANGPTL2水平顯著高于健康對照組(6342±2048對3600±1748 pg/mL，P<0.0001)。

二、 NSCLC患者血清ANGPTL2水平與臨床病理參數的關聯

接著我們研究血清中的ANGPTL2水平和NSCLC患者的臨床病理特征之間的關聯。我們發現增加的ANGPTL2水平與淋巴結轉移(P=0.002)和臨床分期(P<0.001)強烈相關。 然而，與其他臨床病理參數，包括年齡(P=0.77)，腫瘤大小(P=0.91)，組織學類型(P=0.08)無關。(見表1)。

三、 ROC/AUC分析

使用ROC曲線繪制血清ANGPTL2水平，以鑒定可以區分NSCLC患者和健康人群的最佳截點。 ROC曲線分析顯示，在最佳截點(5117pg/mL)時，ANGPTL2的血清水平具有78.3%的敏感性和77.0%的特異性，曲線下面積(AUC)為0.836(P<0.001，95%CI：0.787-0.885，見圖1)。同時還發現ANGPTL2可以更好的區分臨床分期早和分期較晚的NSCLC患者，AUC為0.92(95%CI0.89-0.95)，靈敏度為0.91，特異性為0.86。

表1 NSCLC患者血清ANGPTL2水平與臨床病理特征關系

圖1 區分NSCLC患者和健康人群血清ANGPTL2水平的敏感性78.3%，特異性77.0%， AUC： 0.836(P<0.001, 95% cI: 0.787-0.885)

討 論

尋找高敏感性和特異性的NSCLC血清學標志物，對于NSCLC的早診、早治，提高遠期生存率有著極為重要的臨床意義。

近年來， 越來越多的研究認為腫瘤微環境中的慢性炎性刺激對腫瘤的發生、發展和抗腫瘤治療等有重要作用。眾所周知，由環境暴露(包括吸煙和吸入污染物(二氧化硅或石棉))引起的炎癥增加了癌癥的風險[4-6]。另外，肥胖誘導的慢性炎癥也有增加癌癥的風險[7]。而ANGPTL2在其中起著重要的作用[8]。 ANGPTL2可增加化學誘導皮膚鱗狀細胞癌小鼠模型中的炎癥致癌作用[9]。在人類一些腫瘤中也證實了ANGPTL2基因表達增加，包括前列腺癌，胃癌、乳腺癌和肝癌等[10-13]。

ANGPTL2作為一種分泌蛋白，已被證實與多種疾病有關。ANGPTL2主要從脂肪組織和心肌組織中分泌。在腫瘤的發生和發展過程中，腫瘤細胞可以分泌ANGPTL2進入血液循環[14]。我們的研究也證實了，在NSCLC患者中，其血清ANGPTL2水平明顯升高，達到(6342±2048)pg/mL，而健康人群為(3600±1748)pg/mL，二者相比具有顯著性統計學差異。進一步的研究發現，血清ANGPTL2的最佳截點為5117pg / mL。其敏感性和特異性分別為78.3%，77%，AUC為0.836。這表明，血清ANGPTL2是臨床上一種潛在有效的腫瘤標記物來應用于NSCLC的診斷和鑒別。

在分子水平，已有的研究表明在多種腫瘤細胞中ANGPTL2基因均呈高表達，并且表達水平與淋巴結轉移、臨床分期以及不良預后密切相關[15-16]。這與我們研究的結果相一致，血清ANGPTL2水平也可以很好的反映NSCLC患者的淋巴結狀態、臨床分期。我們發現增加的ANGPTL2水平與淋巴結轉移(P=0.002)和臨床分期(P<0.001)強烈相關。 然而，與其他臨床病理參數，包括年齡(P=0.77)，腫瘤大小(P=0.91)，組織學類型(P=0.08),吸煙(P=0.79)無關。通過ROC/AUC分析，發現在NSCLC患者中篩選出臨床早期患者的敏感性和特異性均較高，AUC為0.92(95%CI0.89-0.95)，靈敏度為0.91，特異性為0.86。

總之，我們的研究結果提示血清ANGPTL2可以作為NSCLC的潛在生物標志物，有一定的診斷價值，在臨床上可以很好的幫助區分早期NSCLC。但是本研究局限在于樣本量較小，后續工作需要擴大樣本量。另外，依靠單一的血清標記物來診斷NSCLC在臨床上有很大的局限性，因此，今后還應探索ANGPTL2聯合其他腫瘤標記物來診斷NSCLC的可能性。

[1] Siegel RL,Miller KD,Jemal A.Cancer statistics,2015[J].CA Cancer J Clin,2015,65(1):5-29.

[2] Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.

[3] Grivennikov SI,Greten FR,Karin M.Immunity,inflammation,and cancer[J].Cell,2010,140(6):883-899.

[4] de Martel C,Franceschi S.Infections and cancer: established associations and new hypotheses[J].Crit Rev Oncol Hematol,2009,70(3):183-194.

[5] Takahashi H,Takahashi I,Honma M,et al.Prevalence of metabolic syndrome in Japanese psoriasis patients[J].J Dermatol Sci,2010,57(2):143-144.

[6] Destert C,Pétrilli V,Van Bruggen R,et al.Innate immune activation through Nalp3 inflammasome sensing of asbestos and silica[J].Science,2008,320(5876):674-677.

[7] Kant P,Hull MA.Excess body weight and obesity-the link with gastrointestinal and hepatobilliary cancer[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2011,8(4):224-238.

[8] Kadomatsu T,Tabata M,Oike Y.Angiopoietin-like proteins: emerging targets for treatment of obesity and related metabolic diseases[J].FEBS J,2011,278(4):559-564.

[9] Aoi J,Endo M,Kadomatsu T,et al.Angiopoietin-like protein 2 is an important facilitator of inflammatory carcinogenesis and metastasis[J].Cancer Res,2011,71(24):7502-7512.

[10] Sato R,Yamasaki M,Hirai K,et al.Angiopoietin-like protein 2 induces androgen independent and malignant behavior in human prostate cancer cells[J].Oncol Rep,2015,33(1):58-66.

[11] Endo M,Nakano M,Kadomatsu T,et al.Tumor cell-derived angiopoietin-like protein ANGPTL2 is a critical driver of metastasis[J].Cancer Res,2012,72(7):1784-1794.

[12] Endo M,Yamamoto Y,Nakano M,et al.Serum ANGPTL2 levels reflect clinical features of breast cancer patients: implications for the pathogenesis of breast cancer metastasis[J].Int J Biol Markers,2014,29(3):e239-e245.

[13] Gao L,Ge C,Fang T,et al.ANGPTL2 promotes tumor metastasis in hepatocellular carcinoma[J].J Gastroenterol Hepatol,2015,30(2):396-404.

[14] Kitazawa M,Nagono M,Masumoto KH,et al.Angiopoietin-like 2, a circadian gene, improves type 2 diabetes through potentiation of insulin sensitivity in mice adipocytes[J].Endocrinology,2011,152(7):2558-2567.

[15] Ide S,Toiyama Y,Shimura T,et al.Angiopoietin-like protein 2 acts as a novel biomarker for diagnosis and prognosis in patients with esophageal cancer[J]. Ann Surg Oncol,2015,22(8):2585-2592.

[16] Toiyama Y,Tanaka K,Kitajima T,et al.Elevated serum angiopoietin-like protein 2 correlates with the metastatic properties of colorectal cancer: a serum biomarker for early diagnosis and recurrence[J].Clin Cancer Res,2014,20(23):6175-6186.

Clinicalvalueofserumangiopoietin-likeprotein2inpatientswithnon-smallcelllungcarcinoma

CHENLiang,ZHANGBin,YUYu,ZHANGYing

DepartmentofThoracicSurgery,JiangsuProvinceHospitalofTraditionalChineseMedicine,Nanjing,Jiangsu210029,China

ObjectiveTo investigate the clinical value of serum angiopoietin-like protein2 (ANGPTL2 )in patients with non-small cell lung carcinoma (NSCLC).MethodsThe study selected 47 patients with NSCLC as the study group and healthy people as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the levels of ANGPTL2. Sensitivity, specificity and area under curve (AUC) for serum ANGPTL2 levels were determined using receiver operator characteristic (ROC) analysis.ResultsThe expression of serum ANGPTL2 in patients with NSCLC was significantly higher in the control group than in the control group (6342±2048 vs. 3600±1748 pg/mL,P<0.0001). ROC curve analysis showed that at the optimal cut-off (5117 pg/mL), the serum level of ANGPTL2 had a sensitivity of 78.3% and a specificity of 77.0% for distinguishing breast cancer patients from healthy controls with an area under the curve (AUC) of 0.836 (P<0.001, 95% confidence interval: 0.787-0.885).ConclusionOur data indicate that serum ANGPTL2 level has potential value for early detection of NSCLC.

non-small cell lung carcinoma; angiopoietin-like protein2

2017-03-23]

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.11.032

江蘇省六大人才高峰項目(No 2016-WSW-015)

210029 江蘇 南京，江蘇省中醫院 南京中醫藥大學附屬醫院心胸外科