改善甲狀腺冷凍切片裂隙與冰晶的研究

張翠霞 方慶全 陳世東

改善甲狀腺冷凍切片裂隙與冰晶的研究

張翠霞1方慶全1陳世東2

目的探討改善甲狀腺冷凍切片裂隙與冰晶的方法。方法通過實驗，分別比較不同取材厚度、標本中含有液體不同處理方法、不同切片方法等條件對甲狀腺冷凍切片裂隙與冰晶指標的影響。結(jié)果甲狀腺冷凍切片取材厚度以0．2～0．3 cm為佳；甲狀腺含有液體時以濾紙吸干為佳；甲狀腺組織制成凍塊后，用夾頭設置為-16℃的冷凍切片機修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指溫暖切面1～2 s，然后連續(xù)切片2張放棄，切取第3張切片為較佳切片方法。結(jié)論優(yōu)化甲狀腺組織取材厚度、標本中液體處理方法、切片方法等條件，可顯著減少甲狀腺冷凍切片的裂隙與冰晶現(xiàn)象，提高冷凍切片質(zhì)量。

甲狀腺；冷凍切片；裂隙；冰晶

隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，冷凍切片得到了廣泛應用[1-2]。冷凍切片是臨床病理學的急診工作，常用于手術科室術中快速組織學診斷，手術科室在手術進行當中取出病變組織，需要病理醫(yī)師在很短時間內(nèi)做出良、惡性的正確診斷，為臨床醫(yī)師下一步的手術方案與治療提供指導[3]。因此，快速制作一張高質(zhì)量的冷凍切片對術中病理診斷極為重要。但在制作甲狀腺組織冷凍切片過程中，切片易出現(xiàn)組織裂隙、冰晶等情況[4]。為此，作者通過實驗，探討改善甲狀腺冷凍切片裂隙與冰晶的方法。

1 資料與方法

1.1 資料

收集廈門大學附屬第一醫(yī)院病理科2016年7月—2017年6月的甲狀腺冷凍切片標本，患者年齡21～71歲，平均年齡（38.4±12.7）歲。

1.2 設備與試劑

設備：LEICA CM1950冷凍切片機（德國萊卡）；試劑：普通膠水、AAF液（由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85：5：10的比例配制而成）。

1.3 冷凍切片的制備

（1）不同取材厚度條件下甲狀腺冷凍切片的制備：收集20例術中新鮮甲狀腺標本，每例切取4塊組織，取材大小均為 1.5 cm×1.5 cm，取材厚度分別為：A組厚0.2 cm、B組0.3 cm、C組0.4 cm、D組0.5 cm（若組織含有液體，用濾紙吸干），將組織放置于冷凍托頭中部，加適量的膠水，移至設置為-25℃的冷凍臺速凍，組織制成凍塊后，用夾頭設置為-16℃的冷凍切片機修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指溫暖切面1～2 s，然后連續(xù)切片2張放棄，切取第3張切片（厚度為 6 μm），立即放入AAF液固定20～30 s，取出切片水洗2～3 s，按常規(guī)冷凍切片染色、中性樹膠封固[5]，顯微鏡觀察。比較不同取材厚度條件下甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶2項指標的得分情況。（2）標本含有液體不同處理方法下甲狀腺冷凍切片的制備：收集30例術中新鮮甲狀腺標本，每例切取3塊大小為1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm、質(zhì)地相似、含有液體量相當?shù)募谞钕俳M織，隨機取其中1塊組織，用濾紙吸干其液體（E組）；再隨機取1塊組織，用紗布吸干其液體（F組）；最后1塊組織未將液體吸干（G組），3組組織余操作同 B組。比較E、F、G 組3種標本液體不同處理方法下甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶2項指標的得分情況。（3）不同切片方法下甲狀腺冷凍切片的制備：收集20例術中新鮮甲狀腺標本，每例切取4塊組織，取材大小、含有液體處理方法、速凍方法同B組，隨機取其中1塊按B組的方法切片，余操作同B組（H組）；再隨機取1塊組織，操作基本同H組，不同的是：用戴手套的手的大拇指溫暖切面5 s（I組）；再隨機取1塊組織，操作基本同H組，不同的是：不用戴手套的手的大拇指溫暖切面1～2 s（J組）；余1塊組織用冷凍切片機修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指溫暖切面1～2 s，直接切取第1張切片（未連續(xù)切片2張放棄，切取第3張切片），立即放入AAF液固定20～30 s，余操作同B組（K組）。比較H、I、J、K 組4種不同切片方法下甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶2項指標的得分情況。

1.4 觀察指標

無裂隙、無冰晶各10分，由2名主治以上醫(yī)師進行雙盲評片，每項指標數(shù)據(jù)為評分的均值。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 取材厚度對甲狀腺冷凍切片的影響

由表1可見，A組與B組無裂隙、無冰晶指標得分的差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）；C、D 兩組無裂隙、無冰晶指標得分分別與B組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。

表1 不同取材厚度甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶指標評分結(jié)果

表1 不同取材厚度甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶指標評分結(jié)果

注：與B組比較，a：P＜0．05

2.2 標本中含有液體不同處理方法對甲狀腺冷凍切片的影響

由表2可見，F(xiàn)組無裂隙指標得分低于E組（P＜0.05）；G組無裂隙、無冰晶指標得分均低于E組（P均＜0.05）。

表2 標本中含有液體不同處理方法甲狀腺冷凍切片相關指標評分結(jié)果

表2 標本中含有液體不同處理方法甲狀腺冷凍切片相關指標評分結(jié)果

注：與 E 組比較，a：P＜ 0．05

2.3 不同切片方法對甲狀腺冷凍切片的影響

由表3可見，I組無冰晶指標得分低于H組（P＜0.05）；J組無裂隙、無冰晶指標得分均低于H組（P均＜0.05）；K組無冰晶指標得分低于H組（P＜0.05）。

表3 不同切片方法甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶指標評分結(jié)果

表3 不同切片方法甲狀腺冷凍切片無裂隙、無冰晶指標評分結(jié)果

注：與H組比較，a：P＜0．05

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3 討論

甲狀腺癌是目前臨床中較為常見的一種甲狀腺惡性腫瘤疾病，治療前準確的診斷對于提高其治療效果有著重要的意義[6]，冷凍切片是甲狀腺疾病重要的診斷方法之一。冷凍切片技術在病理診斷中具有舉足輕重的作用[7-8]，甲狀腺組織由于細胞豐富、血液供應豐富、常伴有囊腫，冷凍切片易出現(xiàn)組織裂隙、冰晶等現(xiàn)象。

本研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺組織取材厚度為0.2～0.3 cm時，冷凍切片出現(xiàn)裂隙與冰晶很少，而當取材厚度0.4 cm以上時，由于組織制成凍塊的時間顯著延長，冷凍切片出現(xiàn)裂隙與冰晶的現(xiàn)象顯著增加。

冷凍切片組織速凍前如果浸水或者自身的囊腫破裂導致組織浸水，易導致制片后鏡下見多量的空隙（冰晶所致）與類似氣泡樣的“黑水珠”，且按壓也不會消失[9]。因此取材時，應盡量避免組織接觸水，如果不慎接觸水后甲狀腺組織自身含有液體，應立即吸干。本研究顯示，用濾紙和紗布均能快速吸干甲狀腺組織的液體，但使用濾紙組無裂隙指標的得分高于紗布組，更值得推薦。

甲狀腺凍塊修至所需切面后，用戴手套的手的大拇指溫暖切面1～2 s，能使組織表面硬度下降而脆性也下降，這樣不但能改善或消除冷凍切片的裂隙，也能改善冰晶導致的空泡。但研究也發(fā)現(xiàn)，當溫暖組織切面的時間≥5 s時，組織切面過軟，切片的冰晶反而多于“1～2 s”組；溫暖后切取第1張切片也會使冰晶增多。

綜上所述，優(yōu)化甲狀腺組織取材厚度、標本中液體處理方法、切片方法等條件，可顯著減少甲狀腺冷凍切片的裂隙與冰晶現(xiàn)象，提高冷凍切片質(zhì)量，為甲狀腺組織術中病理診斷與臨床手術方案的制定提供保障。

[1] 張紅紅． 冷凍切片與術中細胞學診斷卵巢腫瘤的對比研究[J]． 中國衛(wèi)生標準管理，2016，7（11）：185-186．

[2] Sala P，Morotti M，Menada MV，et a1． Intraoperative frozen section risk assessment accurately tailors the surgical staging in patients affected by early-stage endometrial cancer：the application of 2 different risk algorithms[J]． Int J Gynecol Cancer，2014，24（6）：1021-1026．

[3] 王德田，董建強． 實用現(xiàn)代病理學技術[M]． 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社，2013：80．

[4] 秦嶺，蔡江義． 冷凍切片結(jié)合細胞學涂片在卵巢腫瘤病理診斷中的臨床價值[J]． 中國繼續(xù)醫(yī)學教育，2016，8（7）：39-40．

[5] 丁偉，王德田，董建強，等． 簡明病理學技術[M]． 杭州：浙江科學技術出版社，2014：46．

[6] 王曉紅． 探討術中冰凍對甲狀腺微小乳頭狀癌的病理診斷價值[J]．中國衛(wèi)生標準管理，2016，7（24）：174-176．

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[8] 張海巍． 甲狀腺微小乳頭狀癌的術中冰凍病理診斷分析[J]． 中國衛(wèi)生標準管理，2016，7（36）：159-161．

[9] 潘黎靜，戴燕燕． 甲狀腺冰凍切片制作方法的探討[J]． 山東大學學報（醫(yī)學版），2014，52（5）：100-103．

Study on the Improvement of the Fracture and Ice Crystal of the Thyroid Frozen Section

ZHANG Cuixia1FANG Qingquan1CHEN Shidong21 Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen Fujian 361003, China; 2 Department of Clinical Laboratory

ObjectiveTo investigate the method of improving the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section.MethodsThrough the experiment, different thickness, different treatment methods of liquid contained in the thyroid frozen section and different slice methods were compared to explore the influence of the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section.ResultsThe thickness of the thyroid frozen section was 0.2 ～ 0.3 cm; When the thyroid tissue contains liquid, it was better to blot it up with filter paper; The thyroid tissue was made into frozen blocks,with the chuck of the freezing microtome being set to -16℃ to the required section and then warmed the tissue section with the thumb of a gloved hand 1 ～ 2 s, and then 2 serial sections were given up for third slices for better slice method.ConclusionOptimizing the thickness of the thyroid frozen section, the treatment method of liquid and the slice method can significantly reduce the fracture and ice crystal of the thyroid frozen section,and improve the quality of frozen section.

thyroid; frozen section; fracture; ice crystal

R365

A

1674-9316（2017）22-0124-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．22．062

1廈門大學附屬第一醫(yī)院病理科，福建 廈門 361003；2檢驗科

陳世東