頭孢曲松和阿奇霉素體外抗淋球菌聯合作用研究

于瑞星 尹躍平 戴秀芹 陳紹椿 韓燕 張振國 陳祥生

100029北京，中日友好醫院皮膚病與性病科（于瑞星）；中國醫學科學院 北京協和醫學院 皮膚病研究所參比實驗室（尹躍平、戴秀芹、陳紹椿、韓燕、陳祥生）；大連市皮膚病醫院（張振國）

·研究報道·

頭孢曲松和阿奇霉素體外抗淋球菌聯合作用研究

于瑞星 尹躍平 戴秀芹 陳紹椿 韓燕 張振國 陳祥生

100029北京，中日友好醫院皮膚病與性病科（于瑞星）；中國醫學科學院 北京協和醫學院 皮膚病研究所參比實驗室（尹躍平、戴秀芹、陳紹椿、韓燕、陳祥生）；大連市皮膚病醫院（張振國）

目的評估頭孢曲松和阿奇霉素體外對淋球菌臨床分離株的聯合作用。方法2012年在大連市皮膚病醫院性病門診收集淋球菌臨床分離株25株，Etest法檢測頭孢曲松和阿奇霉素體外對淋球菌的最小抑菌濃度（MIC）。計算部分抑菌濃度指數（FICI），判斷頭孢曲松和阿奇霉素體外對淋球菌的聯合作用。結果頭孢曲松MIC均值為0.032 mg/L，MIC值范圍為0.008～0.064 mg/L；阿奇霉素MIC均值為0.834 mg/L，范圍為0.064～4.000 mg/L。FICI在0.724～2.696之間，頭孢曲松和阿奇霉素對所檢測的淋球菌臨床分離菌株均表現為相加作用。結論頭孢曲松和阿奇霉素在體外對淋球菌表現為相加作用，尚需大樣本進一步證實。

淋病奈瑟球菌；頭孢曲松；阿奇霉素；藥物相互作用

淋病在男性可引起尿道炎、附睪炎、前列腺炎等，在女性可引起宮頸炎、子宮內膜炎、附件炎等。世界每年新發病例約1.06億［1］。有效的抗生素治療是預防控制淋病的有效手段之一，但近年來淋球菌已對一線藥物頭孢克肟和頭孢曲松等廣譜頭孢菌素類藥物產生耐藥，并出現頭孢克肟和頭孢曲松治療失敗病例［2-3］。因此，美國、英國、加拿大等國家推薦使用頭孢曲松聯合阿奇霉素治療淋?。?-6］。但在國內未見頭孢曲松和阿奇霉素對淋球菌聯合作用的相關研究。我們檢測大連淋球菌對頭孢曲松和阿奇霉素的敏感性，初步探討二者體外對淋球菌的聯合作用。

一、材料與方法

（一）實驗菌株：2012年在大連皮膚病醫院性病門診收集淋球菌臨床分離菌株25株，其中64%（16/25）來自男性，36%（9/25）來自女性?；颊吣挲g16～50歲，平均30.75歲，男性和女性患者標本分別取自尿道和宮頸。其中40%（10/25）患者曾患淋病，32%（8/25）患者1個月內有抗生素使用史。收集淋球菌臨床分離菌株，經初步鑒定后傳代1次，洗脫于脫脂牛奶管中，-70℃冰箱保存備用。質控菌株為世界衛生組織（WHO）P菌株。

（二）主要試劑：GC瓊脂粉、脫脂牛奶來自英國Oxiod公司，革蘭染液來自珠海貝索生物技術有限公司，頭孢曲松、阿奇霉素Etest條與精制生長添加劑（Iso VitaleXTM）來自瑞典AB Biodisc公司。

（三）抗生素敏感性檢測：

1.MIC測定：按照美國臨床實驗室標準化協會（clinical laboratory standard institute，CLSI）操作步驟，將保存在-70 ℃冰箱中的標本室溫凍溶，接種在含1%（體積分數）精制生長添加劑的GC培養基上，36℃、5%CO2中培養20～24 h，挑取單個菌落接種培養20～24 h，研磨至裝有1 ml無菌生理氯化鈉溶液的試管中，用比濁儀將菌懸液濃度調整至0.5麥氏單位（MFC）。無菌拭子蘸取適量菌懸液，均勻涂布于培養基表面。接種15 min后將Etest條置于培養基表面，36℃、5%CO2培養20～24 h后觀察結果。淋球菌對阿奇霉素的MIC值≥2 mg/L為耐藥，對頭孢曲松的MIC值≥0.125 mg/L為低敏。

2.聯合作用測定：按照上述步驟，先將淋球菌臨床分離株菌懸液均勻涂布于含1%精制生長添加劑的GC培養基上，再將頭孢曲松和阿奇霉素Etest條在MICA（頭孢曲松MIC值）和MICB（阿奇霉素MIC值）處垂直交叉平鋪于含1%精制生長添加劑的GC培養基上，按上述條件培養20～24 h，觀察頭孢曲松和阿奇霉素對淋球菌的MICAB（頭孢曲松與阿奇霉素Etest條聯合作用時頭孢曲松對淋球菌的MIC值）和MICBA（為阿奇霉素與頭孢曲松Etest條聯合作用時阿奇霉素對淋球菌的MIC值）。

（四）統計學分析：根據部分抑菌濃度指數（fractional inhibitory concentration index，FICI）判斷頭孢曲松和阿奇霉素體外抗淋球菌的聯合作用。FICI=MICA/MICAB+MICB/MICBA。FICI≤ 0.5為協同，0.5＜FICI≤ 4為相加，FICI＞4為拮抗。MIC與FICI進行Spearman秩相關分析。計量資料比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

二、結果

1.淋球菌對頭孢曲松和阿奇霉素的敏感性：頭孢曲松對25株淋球菌臨床分離株的MIC值為（0.032±0.039）mg/L，MIC值范圍為0.008～ 0.064 mg/L，MIC50為0.023 mg/L，MIC90為0.064 mg/L，所有菌株對頭孢曲松敏感；阿奇霉素MIC值為（0.834±0.256）mg/L，MIC值范圍為0.064～4.000 mg/L，MIC50為0.250 mg/L，MIC90為4.000 mg/L，其中16%（4/25）的菌株對阿奇霉素耐藥。

如表1所示，頭孢曲松對分離自既往有淋病患者的淋球菌的MIC均值為（0.042±0.019）mg/L，與來自無淋病患者的淋球菌的MIC均值［（0.025±0.017）mg/L］差異有統計學意義（t=2.256，P=0.034）；頭孢曲松和阿奇霉素對其他不同人群臨床分離菌株的MIC值差異無統計學意義。

表1 不同人群淋球菌分離株體外對頭孢曲松和阿奇霉素的敏感性比較

2.頭孢曲松和阿奇霉素在體外對淋球菌的聯合作用：頭孢曲松MICA值和FICI之間的相關系數r為-0.133，P=0.525，差異無統計學意義。阿奇霉素MICB值和FICI之間的相關系數r為-0.255，P=0.280，差異無統計學意義。共檢測25株大連地區淋球菌臨床分離菌株，FICI值在0.724～2.696之間，頭孢曲松和阿奇霉素對所有淋球菌臨床分離菌株都表現為相加作用，無協同作用，也無拮抗作用。

三、討論

淋球菌是一種易對抗生素產生耐藥的革蘭陰性雙球菌，近年來國外報道淋球菌對一線治療藥物頭孢曲松敏感性逐漸下降，并且出現治療失敗的病例［2-3，7］。在中國淋球菌對頭孢曲松的敏感性也逐漸下降［8］，但在中國知網、萬方數據庫（檢索詞：淋球菌、頭孢曲松；起止時間：2000年2月至2015年10月）中未檢索到頭孢曲松耐藥淋球菌株，亦無頭孢曲松治療失敗病例報道，我們亦未發現頭孢曲松耐藥菌株。研究報道［9-11］中國淋球菌對阿奇霉素的耐藥率在0～16.5%之間，本研究中淋球菌對阿奇霉素耐藥率為16%，與之前報道相似。按照WHO規定抗生素對微生物耐藥率＞5%不宜作為治療該微生物感染的一線用藥，因此阿奇霉素不宜單獨作為治療淋病的一線用藥。另外，本研究發現頭孢曲松MIC值在曾患淋病患者中更高，提示既往感染淋病患者的淋球菌臨床分離株對頭孢曲松更容易產生耐藥。

我們應用Etest法檢測發現頭孢曲松和阿奇霉素體外抗淋球菌有相加作用，無協同或拮抗作用，這與既往報道一致［12-13］。本研究存在一定的局限性，樣本量較小僅在大連皮膚病醫院性病門診收集標本，不能代表中國淋球菌對頭孢曲松和阿奇霉素在體外聯合作用的敏感性。另外不同研究采用的FICI計算方法不同，不同計算方法對實驗結果可能也有影響。

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In vitro combined effect of ceftriaxone and azithromycin against Neisseria gonorrhoeae

Yu Ruixing,Yin Yueping,Dai Xiuqin,Chen Shaochun,Han Yan,Zhang Zhenguo,Chen Xiangsheng
Department of Dermatology and Venereology,China-Japan Friendship Hospital,Beijing 100029,China（Yu RX）;Reference Laboratory of STD,Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Nanjing 210042,China（Yin YP,Dai XQ,Chen SC,Han Y,Chen XS）;Dalian Dermatosis Hospital（Zhang ZG）

Yin Yueping,Email:yinyp@ncstdlc.org

ObjectiveTo investigatein vitrocombined effect of ceftriaxone and azithromycin against clinical isolates ofNeisseria gonorrhoeae（NG）.MethodsA total of 25 NG clinical isolates were collected from the STD clinic of Dalian Dermatosis Hospital in 2012.Epsilometer test（Etest）method was used to determine the minimum inhibitory concentrations（MICs）of ceftriaxone and azithromycin against NG isolates.Fractional inhibitory concentration index（FICI）was calculated to evaluate thein vitrocombined effect of ceftriaxone and azithromycin against NG isolates.ResultsThe mean MICs of ceftriaxone and azithromycin were 0.032 mg/L（range,0.008-0.064 mg/L）and 0.834 mg/L（range,0.064-4.000 mg/L）,respectively.The FICI ranged from 0.724 to 2.696,and ceftriaxone and azithromycin showed an additive effect against the above NG isolates.ConclusionCeftriaxone and azithromycin show an additive effect against NGin vitro,but further studies with large sample size are needed to confirm their effects.

Neisseria gonorrhoeae;Ceftriaxone;Azithromycin;Drug interactions

尹躍平，Email：yinyp@ncstdlc.org

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.05.012

中國醫學科學院醫學與健康科技創新工程項目（2016-I2M-3-021）

Fund program:CAMS Medical and Health Science and Technology Innovation Program（2016-I2M-3-021）

2016-08-29）

（本文編輯：尚淑賢）