臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)探析

河南省濮陽(yáng)市安陽(yáng)地區(qū)醫(yī)院（455000）李艷紅

在臨床疾病的治療當(dāng)中，抗生素藥物發(fā)揮著十分重要的作用，能夠有效殺滅致病菌株，進(jìn)而治愈疾病。但是在長(zhǎng)期的應(yīng)用過(guò)程中，部分致病細(xì)菌對(duì)于藥物產(chǎn)生一定的耐藥性，藥物的作用效果被極大削弱，導(dǎo)致治療效果不佳[1]。抗生素藥物的不合理應(yīng)用，往往會(huì)誘發(fā)耐藥菌株的大量繁殖，增加疾病的治療難度。為了提升抗生素藥物使用的合理性和有效性，需要加強(qiáng)對(duì)細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)和分析。本研究通過(guò)臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，分析其檢測(cè)結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究以我院各科室2014年7月～2015年12月期間采集的1308份檢測(cè)標(biāo)本作為樣本。標(biāo)本類型：血液405份，尿液363份，痰液327例及各種分泌物213例。科室：外科267份：內(nèi)科507份、ICU243份以及兒科291份。以上檢測(cè)標(biāo)本取樣方式、送檢時(shí)間、檢測(cè)方式基本一致，檢測(cè)人員的操作水平接近，其一般資料對(duì)照相仿（P＞0.05），可進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2 方法 對(duì)以上檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，首先進(jìn)行菌株鑒定。通過(guò)細(xì)菌和微生物培養(yǎng)，獲得其純種培養(yǎng)物，在顯微鏡下觀察其個(gè)體形態(tài)，分析其營(yíng)養(yǎng)要求，觀察其生理和生化反應(yīng)，分析其代謝產(chǎn)物。然后鑒定其生長(zhǎng)溫度、氧需及宿主種類，綜合分析，進(jìn)而鑒定其菌種。根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)特征和理化特性仍無(wú)法準(zhǔn)確鑒定其菌種時(shí)，則需要提取該細(xì)菌基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增16s rDNA片段，使用DNAMAN序列分析軟件，進(jìn)而確定菌種[2]。由梅里埃公司生產(chǎn)的藥物敏感度紙片（革蘭陰性桿菌藥敏板條GN13、GN09、陽(yáng)性球菌藥敏板條P535），對(duì)于血、尿以及痰液中培養(yǎng)的細(xì)菌和微生物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

然后使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（滬食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2012第1400203號(hào) 梅里埃(上海)生物制品有限公司），采用肉湯稀釋法和E-test法，接著檢測(cè)抗生素藥物的MIC值。應(yīng)用青霉素G、頭孢唑啉、氧氟沙星、環(huán)丙沙星以及頭孢他啶等抗生素藥物。根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)，鑒定細(xì)菌的耐藥性。同時(shí)行瓊脂稀釋法和紙片擴(kuò)散法，進(jìn)一步測(cè)定其測(cè)定藥物抑菌或殺菌能力，觀察耐藥菌株的檢出結(jié)果。

附表 檢出菌株的耐藥情況

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理和分析，計(jì)數(shù)資料以n或 %表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果P ＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢出結(jié)果 在1308份檢測(cè)標(biāo)本當(dāng)中，檢出多重耐藥菌株（M D R）2 9 7 份，檢出率為2 2.7%，其中外科5 4 例，檢出率為20.2%；內(nèi)科117例，檢出率為23.1%；ICU科室81份，檢出率為33.3%；兒科45份，檢出率為15.5%。在297份耐藥菌株當(dāng)中，其中凝固酶陰性葡萄球菌117例（39.4%）、金黃色葡萄球菌81例（27.3%），銅綠假單胞菌45例（15.2%），大腸埃希菌27例（9.1%）以及腸球菌27例（9.1%）。

2.2 檢出菌株的耐藥情況 通過(guò)藥敏試驗(yàn)，凝固酶陰性葡萄球菌對(duì)于青霉素G的耐藥性最高，頭孢他啶其次，對(duì)于其他三種抗生素藥物的耐藥性相對(duì)不高；金黃色葡萄球菌對(duì)于青霉素G的耐藥性較高；銅綠假單胞菌對(duì)于頭孢唑啉和青霉素G的耐藥性較高；大腸埃希菌對(duì)于青霉素G的耐藥性較高；而腸球菌對(duì)于頭孢他啶的耐藥性較高。不同菌株的耐藥性存在著顯著的差異（P＜0.05）。與其他菌株相比，凝固酶陰性葡萄球菌的耐藥性最為顯著，其對(duì)于多種抗生素藥物均具有較高的耐藥性。而青霉素G在凝固酶陰性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌以及大腸埃希菌均存在較高的耐藥性。在27株腸球菌中，耐青霉素腸球菌9株，其中糞腸球菌1株，屎腸球菌8株，其對(duì)于青霉素G的耐藥性分別為11.4%和72.1%，對(duì)比差異顯著（P ＜0.05）詳見(jiàn)附表。

3 討論

細(xì)菌的耐藥性在很大程度上影響著抗生素藥物的療效，這與抗生素藥物的長(zhǎng)期使用或不合理用藥有關(guān)。目前，廣譜抗生素藥物得到廣泛的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，但是隨之而來(lái)的是對(duì)藥物的濫用。在細(xì)菌性疾病治療中，過(guò)分依賴抗生素藥物，導(dǎo)致耐藥性菌株種類明顯增加，給臨床疾病的治療帶來(lái)了一定的困擾。經(jīng)研究表明，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）對(duì)于β-內(nèi)酰胺類和頭孢類抗生素具有較強(qiáng)的耐藥作用，其具有廣譜耐藥性。而大腸桿菌、肺炎克雷伯桿菌中易生產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs），ESBLs菌株對(duì)于青霉素類、第三代頭孢菌素具有水解滅活的作用，其耐藥性較強(qiáng)。即使在同類型菌株當(dāng)中，不同細(xì)菌對(duì)于相同藥物的耐藥性也存在著較大的差異，糞腸球菌對(duì)于青霉素G的耐藥性明顯低于屎腸球菌，耐青霉素腸球菌株以屎腸球菌為主。

鑒于細(xì)菌耐藥性的普遍存在，為了保證合理、安全的應(yīng)用抗生素藥物，需要通過(guò)嚴(yán)格的監(jiān)測(cè)與鑒定，判斷不同類型抗生素藥物是否適用于臨床治療當(dāng)中。不同菌株對(duì)于抗生素藥物的耐藥性不同，需要根據(jù)臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果，準(zhǔn)確予以篩查和鑒別，為臨床治療提供可靠的參考依據(jù)，提高臨床用藥的合理性，降低用藥風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，通過(guò)臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，了解菌株對(duì)于抗生素藥物的耐藥性，以此為參考，合理使用藥物，以提高藥物治療效果，具有重要的臨床意義和價(jià)值。