多功能超高倍顯微分析儀在檢測男性泌尿道病原體感染中的應用

廣東省工傷康復醫院（510440）劉金華 簡慶佳 陳暉 邱輝強 黃健林 劉建文

近年來，國內男性發生泌尿生殖道疾病感染率呈現出逐年上升的趨勢，特別是性傳播疾病（STD），并且在不斷增加多種病原體合并感染的數量[1][2][3]，尤其是在南方沿海地區，會嚴重危害男性身心健康。傳統培養、PCR、免疫學檢驗等檢測方法，是檢測男性病病原體的主要措施，但因為存在操作繁瑣、復雜，費用高，時間長等的影響，容易導致發生漏診的現象[1]，在門診患者應用中存在一定的限制。本文采取TH—II型超高倍顯微進行系統分析，實行取樣涂片活體鏡檢方法，現對我院自2014年12月～2015年10月間來自泌尿外科門診收治以及住院實施生殖道體液檢測的986例患者展開了研究，對臨床涂片觀察結果進行以下報告。

附表 病原體分布表[n(%)]

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取我院泌尿外科收治的986例男性患者，其中取材尿道分泌物345例，精液116例，前列腺液525例，最大年齡70歲，最小年齡17歲，平均年齡35歲，最多的是22～45歲年齡段。

1.2 取樣方法

1.2.1 尿道分泌物 消毒處理尿道口，將男性拭子插入患者尿道大約2～3cm，旋轉，停留大約30S然后取出拭子進行檢查。

1.2.2 前列腺液 排空患者尿液，從肛門內開始對前列腺進行按摩，收集尿道口前列腺液，并且放置在無菌試管中進行送檢。

1.2.3 精液 采取常規取精液法，放置在無菌試管中進行送檢。

1.3 儀器與觀察方法

1.3.1 儀器 利用清華同方神火科技公司生的TH—II型超高倍顯微進行系統分析，儀器特點：有效分辨率達0.25um，放大倍率為20000倍，共軛變焦，高清晰度，無級變倍，橫向放大倍數為120～20000，可以隨意調整；中心可以免調試，明暗場能夠進行快速轉換，可以顯著觀察明場、暗場的差距，然后利用多媒體計算機技術并且配合大屏幕，具有實時凍結、真彩色、回放、動靜態存儲、檢索、查詢、打印等特點[2]。

1.3.2 方法 在潔凈玻片上直接將送檢標本制成厚涂片，壓上蓋片，同時在TH—II型超高倍顯微鏡下進行活體觀察，依據實際需要選擇不同的視場鏡檢。鏡檢內容主要有：衣原體、支原體、線索細胞、雙球菌、梅毒螺旋體、杜克雷嗜血桿菌等，同時給予常規檢驗的各類標本數據。

1.4 診斷標準

1.4.1 支/衣原體活體檢查，具有以下特點：①衣原體與支原體的大小處于病毒以及細菌之間，在放大萬倍的時候存在低于球菌的顆粒泳動，并且活躍度高于一般球菌泳動，存在不定的顆粒運動方向[3]。②上皮細胞內存在相同顆粒的不停泳動。③上皮細胞內有繁殖體或者包涵體（內含不停泳動的顆粒）。④上皮細胞外存在游離的包涵體，依據滾動式朝著前方游動，白細胞朝支原體方向進行變形運動，促使細胞表面附著支原體，并進行吞噬、吞飲，進而殺傷降解吞噬體的支原體。雖然支原體包涵體存在于細胞內、外，衣原體僅僅出現在細胞內，但是因為兩種原體大小以及形態比較相似，檢查時比較常見的為細胞內外均存在，如果僅僅依據人為鏡下觀察不能對兩者進行良好的區分；所以，檢測過程中將兩者統稱為支/衣原體感染。結果符合參照新編臨床檢驗圖譜以及曹興午擬訂標準[4][5]。

1.4.2 雙球菌活體檢查 基于相差視野情況下能夠對細胞內、外著色相對比較深的雙腎形淋球菌結構進行觀察，345例尿道分泌物標本中可以檢出66例細胞內雙球菌，占據總數的19.1 %；細胞內外均檢出35例雙球菌，占據總數的10.1%，同時實施革藍氏染色。

1.4.3 念珠菌與線索細胞的活體檢查

1.4.3.1 念珠菌（霉菌） 基于相差視野情況下可以檢測出芽生孢子、真菌孢子以及假菌絲，然后結合革藍氏染色給予相應報告[4]。1.4.3.2 線索細胞（加德納桿菌） 引發女性細菌性陰道炎中加德納桿菌（GV）是常見病原體，經檢查得出目前男性也存在不低的感染率，一般都是雙重感染，在986例標本中檢出137例陽性，占據總數的13.9%，98例雙重感染，占據71.5%。

1.4.4 其他病原體涂片活檢 取患者體表潰爛處皮膚制作印片，加蓋片之后基于暗視野中對活動梅毒螺旋體進行直觀觀察，利用相差視野顯微設備還能夠直觀、方便的觀察出各類球菌、滴蟲及桿菌[5]。

2 結果

986例次標本中的病原體分布，以支/衣原體感染率最高，檢出292例，占總標本例數的30%，其次是念珠菌和線索細胞，結果見附表。

3 討論

泌尿生殖道感染是因不同因素引發的疾病，一般顯微鏡僅僅只能觀察到比較大的病原體，例如加德納桿菌、念珠菌以及滴蟲等，一般來說支原體大小在0.3～0.5um范圍內，呈高度多形性，無細胞壁，存在桿形、球形、絲狀等多種形態；在體內衣原體存在兩種形式，一是直徑約0.1～0.5um的原體，另一形式為直徑約為0.6～1.2um的繁殖體，利用用普通光學顯微鏡不能檢測到如此微小病原體，目前國內近年來尋找的主要方式為簡便、準確、快速的非培養檢測生殖系統病原體感染。多功能超高倍顯微分析系統是屬于超高倍率顯微放大系統之一，設備使用獨有的共軛放大技術，存在120～20000的倍率變化范圍，達到0.25um的分辨率，是完美結合數字化圖像處理與顯微放大技術的檢測方式。在不同視野下應用超高倍顯微分析儀可對活體動態直接進行鏡檢，可以檢測出男性泌尿道感染的主要原因，例如衣原體、支原體、念珠菌、淋病雙球菌等。本文在統計了986例男性標本病原體數據之后發現，662例結果顯示為陽性標本，陽性率占據67.1%，其中292例支/衣原體感染，占44.1%，是所有當中感染率最高的；69例淋病雙球菌感染，占10.4%，一般都是雙重感染；44例精液中支/衣原體感染，陽性率37.9%，是引發致男性不育的根本因素[6]。