四倍體刺槐組織培養(yǎng)研究

蘇立琢

摘要 選擇當(dāng)年生長(zhǎng)發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料，研究組織培養(yǎng)的最佳條件。結(jié)果表明，最佳啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+0.3 mg/L，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+N AA 0.1 mg/L。在對(duì)試管苗移栽過程中應(yīng)做好遮蔭并控制溫室內(nèi)溫度和濕度條件，確保成活率在90%左右。

關(guān)鍵詞 四倍體刺槐；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號(hào) S792.27 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）17-0140-01

四倍體刺槐根萌蘗性較強(qiáng)、根系發(fā)達(dá)，自身含有豐富的根瘤菌，可提升土壤內(nèi)有機(jī)質(zhì)含量、改良土壤、形成土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，還具有耐低溫、耐貧瘠、速生豐產(chǎn)特性，在治理沙漠化、防風(fēng)固沙、水土保持和綠化上具有優(yōu)勢(shì)，屬優(yōu)質(zhì)蜜源植物，有利于促進(jìn)地方養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展，經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益顯著。為確保優(yōu)良四倍體刺槐品種快速繁殖，對(duì)四倍體刺槐組織培養(yǎng)加強(qiáng)研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

四倍體刺槐生長(zhǎng)的季節(jié)在春季，此時(shí)應(yīng)選取萌發(fā)的幼嫩帶芽莖段。

1.2 外植體滅菌

將葉片去除并用自來(lái)水清洗干凈，在超凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下，使用70%酒精對(duì)四倍體刺槐消毒30 s，使用0.1%升汞消毒7 min，再利用無(wú)菌水清洗3～4遍，使用無(wú)菌濾紙將材料表面水分吸收干凈，在帶腋芽莖段切取1 cm并將其在啟動(dòng)培養(yǎng)基上接種[1-3]。

1.3 啟動(dòng)培養(yǎng)

啟動(dòng)培養(yǎng)基主要是將MS作為基本培養(yǎng)基，在啟動(dòng)培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的6-BA和 NAA，每瓶接種1株，每處理完30瓶，在生長(zhǎng)30 d后觀察啟動(dòng)培養(yǎng)基上四倍體刺槐生長(zhǎng)情況，做好誘導(dǎo)率統(tǒng)計(jì)。

1.4 培養(yǎng)基的篩選

1.4.1 增殖培養(yǎng)基的篩選。將誘導(dǎo)成功的試管苗，分別切割成為單個(gè)小苗，接種在附加6-BA 0.1～1.5 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L幾種組合的MS培養(yǎng)基上。將5株小苗放置在1個(gè)小瓶上，每完成20瓶后重復(fù)1次，在生長(zhǎng)30 d后，觀察小苗生長(zhǎng)，計(jì)算平均增值系數(shù)和生長(zhǎng)量，找出最佳組合。

1.4.2 生根培養(yǎng)基的篩選。將試管苗生長(zhǎng)到2 cm的莖段切下，接種到生根培養(yǎng)基上，將IBA 0.1～0.5 mg/L、NAA 0.1～0.3 mg/L的幾種組合中分別附加到生根培養(yǎng)基1/2MS上，將5株小苗放置在小瓶上，每完成20瓶后重復(fù)1次，生長(zhǎng)30 d后，觀察小苗生長(zhǎng)，計(jì)算平均生根條數(shù)、根長(zhǎng)、生根率，找出最佳生根條件。

1.5 培養(yǎng)條件

分別將白糖30 g/L、瓊脂0.6 g/L加入到增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基內(nèi)，pH值6.3，培養(yǎng)溫度為25 ℃左右，光照強(qiáng)度2 000 lx，光照時(shí)間12 h/d。

1.6 移栽

4月上旬將試管苗移栽到溫室內(nèi)，選取根系生長(zhǎng)較好的試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移入72穴育苗盤，以珍珠巖為基質(zhì)，使用0.2%高錳酸鉀溶液消毒，澆水后，放入備好的塑料小拱棚，棚內(nèi)溫度25～30 ℃，相對(duì)濕度大于85%，將遮陽(yáng)網(wǎng)放置在拱棚上方。持續(xù)1周后，降低拱棚相對(duì)濕度，28 d后撤去拱棚，移栽植入大田，澆水，蓋遮陽(yáng)網(wǎng)，5 d后去除[4-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 激素對(duì)啟動(dòng)培養(yǎng)的影響

在帶莖段接入啟動(dòng)培養(yǎng)基后，若持續(xù)>10 d，腋芽處明顯萌動(dòng)，后進(jìn)入芽膨大期，產(chǎn)生葉片；30 d后，生成3 cm高叢芽，最佳培養(yǎng)基組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.2 激素對(duì)試管苗增殖的影響

在將細(xì)胞分裂素6-BA加入增殖培養(yǎng)基后，出現(xiàn)增殖效果，增殖系數(shù)隨6-BA濃度增加而加大，增殖培養(yǎng)基內(nèi)6-BA濃度達(dá)1.0 mg/L時(shí)，其增殖系數(shù)逐漸減少。這是由于6-BA濃度增加，易形成愈傷組織，有效苗數(shù)量減少，增殖系數(shù)降低。當(dāng)NAA濃度達(dá)0.1 mg/L時(shí)，阻礙苗正常生長(zhǎng)；當(dāng)NAA濃度達(dá)0.3 mg/L時(shí)，苗生長(zhǎng)較好。最佳增殖培養(yǎng)組合為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.3 生長(zhǎng)素對(duì)試管苗生根的影響

若將生長(zhǎng)素IBA單一添加到培養(yǎng)基內(nèi)，會(huì)促進(jìn)試管苗生根，但莖部生長(zhǎng)發(fā)育減緩，且根部側(cè)根數(shù)量少，若在培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)素NAA時(shí)，會(huì)促進(jìn)莖部生長(zhǎng)，同時(shí)根部側(cè)根數(shù)量增加，提升移栽成活率。若將生長(zhǎng)素IBA 0.5 mg/L和 NAA 0.1 mg/L配合使用，其效果達(dá)到最佳，生根率達(dá)95%，平均生根4條/株左右，且根生長(zhǎng)發(fā)育較好。

2.4 苗木移栽及生長(zhǎng)

珍珠巖內(nèi)生長(zhǎng)25 d的生根試管苗，移栽成活率達(dá)95%，移栽大田后，生長(zhǎng)20 d后成活和移栽成活率均大于97%。試管苗移栽當(dāng)年，四倍體刺槐平均高度為20 cm左右，葉片數(shù)量為15枚；單株高度在30 cm左右，葉片數(shù)量也達(dá)40枚。

3 結(jié)論

選擇當(dāng)年生長(zhǎng)發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料。分化培養(yǎng)基種類為將MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為啟動(dòng)培養(yǎng)基，將MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為增殖培養(yǎng)基，將1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L作為生根培養(yǎng)基。選擇4月上旬移栽，以珍珠巖為移栽基質(zhì)，移栽大田成活率大于90%。

4 參考文獻(xiàn)

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