單次大量飲酒和ALDH2基因多態(tài)性與OSAHS病情的相關(guān)性研究

汪斌如+張艷+梁耕田

[摘要]目的 探討單次大量飲酒后不同時(shí)間段內(nèi)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）男性患者的病情變化。方法 選取2014年1月～2016年12月武漢市第三醫(yī)院耳鼻咽喉科就診武漢地區(qū)漢族男性42例健康成人（對(duì)照組）和50例OSAHS患者（OSAHS組），即刻大量飲酒前后進(jìn)行多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(cè)，并檢測(cè)其外周血ALDH2基因多態(tài)性。結(jié)果 OSAHS組的BMI高于對(duì)照組（P<0.01）。OSAHS組即刻飲酒后3～5 h內(nèi)的AHI指數(shù)和LA/HT較飲酒前明顯增加，飲酒后5 h內(nèi)LSaO2較飲酒前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。OSAHS組和對(duì)照組的野生型純合子、突變型雜合子和突變型純合子三種ALDH2基因型出現(xiàn)頻率分別為76.0%（38/50）、22.0%（11/50）、2.0%（1/50）以及57.1%（24/42）、38.1%（16/42）、4.8%（2/42）。兩組間三種突變基因型及其等位基因分布無(wú)明顯差異（P>0.05）。OSAHS組不同ALDH2基因型之間AHI指數(shù)、最低血氧飽和度在飲酒前后差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 單次飲大量酒后3～5 h內(nèi)會(huì)加重OSAHS患者的病情，其與ALDH2基因多態(tài)性無(wú)顯著相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞]阻塞性睡眠呼吸暫停；飲酒；乙醛脫氫酶2；基因多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R766.49 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）09（b）-0019-05

Association analysis between single massive drinking and polymorphism of ALDH2 gene and OSAHS disease

WANG Bin-ru1 ZHANG Yan2 LIANG Geng-tian1

1.Department of Otorhinolaryngology，Tongren Hospital of Wuhan University The Third Hospital of Wuhan City，Hubei Province，Wuhan 430060，China；2.Department of Pharmacy，Tongren Hospital of Wuhan University The Third Hospital of Wuhan City，Hubei Province，Wuhan 430060，China

[Abstract]Objective To explore the change of condition of obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome （OSAHS） in male patients after different time periods of single massive drinking.Methods 42 healthy males with Han nationality in Wuhan area （the control group） and 50 patients with OSAHS （the OSAHS group） in the otolaryngology department of the Third Hospital of Wuhan City from January 2014 to December 2016 were selected.Polysomnography （PSG） monitoring was performed immediately before and after massive drinking，and the peripheral blood of aldehyde dehydrogenase-2 was detected.Results The BMI in the OSAHS group was higher than that of the control group （P<0.01）.The apnea-hypopnea index （AHI） and LA/HT of in the OSAHS group increased significantly in 3-5 hours after drinking，and the lowest oxygen saturation （LSaO2） decreased significantly in 5 hours after drinking，both comparisons showed statistical differences（P<0.05）.The frequencies of ALDH2 genotypes of the wild type，the mutant heterozygous type and the mutant homozygous type in the OSAHS group and the control group were respectively 76.0% （38/50），22.0% （11/50），2.0% （1/50），and 57.1% （24/42），38.1% （16/42），4.8% （2/42）.The distribution of the 3 genotypes and their respective alleles in the 2 groups was not significantly different （P>0.05）.The index of AHI and LSaO2 of different ALDH2 genotypes in the OSAHS group showed no statistical differences before and after drinking （P>0.05）.Conclusion In 3-5 hours，single massive drinking can aggravate OSAHS patients′ condition，which is not significantly associated with ALDH2 gene polymorphism.endprint

[Key words]Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome；Drinking；Aldehyde dehydrogenase-2；Gene polymorphism

飲酒與阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome，OSAHS）關(guān)系密切[1-2]，即刻大量飲酒可加重OSAHS患者睡眠呼吸暫停的頻率和時(shí)程以及低氧血癥的程度[2-3]。乙醛脫氫酶2（ALDH2）是人體進(jìn)行酒精代謝的關(guān)鍵酶之一，具有高度遺傳多態(tài)性，與ALDH2基因G1951A多態(tài)性密切相關(guān)[4-5]。目前有關(guān)即刻大量飲酒后不同時(shí)間段內(nèi)OSAHS病情變化的研究較少。本研究通過(guò)多導(dǎo)睡眠圖（PSG）監(jiān)測(cè)即刻大量飲酒后1～8 h內(nèi)OSAHS患者缺氧和低氧血癥的變化，同時(shí)檢測(cè)飲酒前后OSAHS與 ALDH2基因型間病情的差異，旨在探討OSAHS與飲酒和ALDH2基因型的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料

篩選2014年7月～2016年1月在武漢市第三醫(yī)院耳鼻咽喉科就診的OSAHS患者作為OSAHS組，共50例，年齡（40.15±16.45）歲，飲酒年限（7.56±10.09）年。納入標(biāo)準(zhǔn)：成年男性，漢族，出生地為武漢市及周邊，符合OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)，能接受實(shí)驗(yàn)白酒飲酒量，排除中樞性或混合性O(shè)SAHS。同時(shí)選擇武漢市及周邊的漢族、男性、有飲酒史、無(wú)OSAHS疾病、未飲酒而行夜間PSG的成年健康人作為對(duì)照組，共42例，年齡（42.92±13.52）歲，飲酒年限（6.11±11.47）年。所有入選者均排除心、腦、肺及神經(jīng)肌肉等疾病。研究方案經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 OSAHS診斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)2011年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)睡眠呼吸障礙學(xué)組制訂的“阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南（2011年修訂版）”[7]對(duì)本病進(jìn)行診斷。

1.3飲酒因素控制

大量飲酒標(biāo)準(zhǔn)：酒精在血液中的峰值濃度為酒精/體重（1 g/kg），推算出該濃度的白酒體積，所飲酒精體積（ml）=體重（kg）×酒精血中預(yù)期峰值濃度（1 g/kg）/白酒純度×酒精密度（0.789 g/ml）[6]。所有研究對(duì)象均于晚餐后即刻飲用42°統(tǒng)一類型的白酒，酒后1 h開(kāi)始PSG監(jiān)測(cè)。

1.4 PSG監(jiān)測(cè)

采用偉康公司Alice5的64導(dǎo)睡眠儀進(jìn)行7 h PSG，觀察指標(biāo)為睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI指數(shù)）、最低SaO2（LSaO2）和最長(zhǎng)呼吸暫停/低通氣時(shí)間（LA/HT）。

1.5 ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)

1.5.1脫氧核糖核酸（DNA）提取 抗凝處理后新鮮血液2 ml，TIANGEN DP318-02試劑盒通過(guò)吸附柱CB3提取基因組DNA。

1.5.2采用適時(shí)熒光定量PCR法 ALDH2多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性外圍上下游引物、FAM標(biāo)記探針及VIC標(biāo)記探針，上游引物序列為5′-TCGGGGAGTGGCCGGGAG-3′，下游引物序列為5′-ATCAAGCCCCAACAGGC-3′，引物由Invitrogen合成，F(xiàn)AM標(biāo)記探針序列為5′-CATACACTGAAGTGA-3′，VIC標(biāo)記探針序列為5′-CATACACTAAAGTGA-3′，探針由ABI合成，按照PCR反應(yīng)體系：2×PCR緩沖液（購(gòu)自大連寶生物有限公司）10 μl、上游引物（10 μM）0.5 μl、下游引物（10 μM）0.5 μl、FAM標(biāo)記探針（10 μM）0.5 μl、VIC標(biāo)記探針（10 μM） 0.5 μl、ddH2O 6 μl、DNA 2 μl配制20 μl反應(yīng)體系，根據(jù)反應(yīng)條件：95℃ 5 min，1個(gè)循環(huán)；95℃ 15 s，60℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)設(shè)置熒光定量PCR儀，進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，熒光定量PCR儀采用Strategene Mx3000P。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)采集數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，方差齊時(shí)兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊采用t′檢驗(yàn)，基因型和等位基因頻率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組一般臨床資料的比較

兩組的年齡、吸煙史、飲酒年限比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。OSAHS組的體重指數(shù)（BMI）高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1）。

2.2單次飲酒對(duì)OSAHS的影響

將飲酒后不同時(shí)段的AHI指數(shù)和LSaO2均值與飲酒前進(jìn)行比較，結(jié)果提示，OSAHS患者AHI指數(shù)在飲酒后3 h內(nèi)（7 h睡眠呼吸監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)前2 h）低于酒前；酒后5 h的LSaO2低于酒前；酒后4 h的LA/HT高于酒前；酒后平均AHI指數(shù)高于酒前，酒后平均LSaO2低于酒前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

2.3 OSAHS的ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)

人類ALDH2基因突變的三種亞型基因（野生型純合子GG、突變型雜合子GA、突變型純合子AA）擴(kuò)增曲線有較大差異（圖1）。OSAHS組三種基因頻率分別為76.0%（GG）、22.0%（GA）、2.0%（AA），對(duì)照組對(duì)應(yīng)三種基因頻率分別為57.1%、38.1%、4.8%。兩組間上述突變基因型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3）。

C

A.野生型純合子GG；B.突變型雜合子GA；C.突變型純合子AA；三角形曲線示多態(tài)位點(diǎn)野生型（GAA）序列，方形曲線示多態(tài)位點(diǎn)突變型（AAA）序列，點(diǎn)狀曲線為弱陽(yáng)性內(nèi)標(biāo)基因曲線endprint

2.4 ADHL2不同基因型與AHI指數(shù)及LSaO2的相關(guān)性分析

ALDH2基因突變型包括雜合子和純合子（包括GA+AA型），野生型和突變型飲酒前后AHI指數(shù)、LSaO2和LA/HT比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4）。

3討論

飲酒是OSAHS重要危險(xiǎn)因素之一，酒精可能通過(guò)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的雙重抑制作用參與OSAHS的發(fā)生發(fā)展[8-9]。酒精通過(guò)降低舌下神經(jīng)及喉神經(jīng)的活性而降低環(huán)杓后肌、肌-頦舌肌的張力，導(dǎo)致氣道狹窄甚至閉塞；酒精還可以將中樞神經(jīng)對(duì)低氧、高氣道阻力的喚醒作用鈍化，使阻塞性呼吸暫停持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)[3，10]。酒精可導(dǎo)致呼吸道黏膜上皮細(xì)胞腫大，大量飲酒還可使患者睡眠呼吸暫停頻率、時(shí)程加重，夜間低氧血癥加重[11]。國(guó)外部分學(xué)者認(rèn)為，飲酒是OSAHS重要的危險(xiǎn)因素，而非性別、年齡及肥胖[1]。本研究結(jié)果可知，OSAHS患者即刻大量飲酒后可增加AHI指數(shù)和LA/HT，降低LSaO2，飲酒3 h內(nèi)AHI指數(shù)明顯升高，LSaO2下降則延遲至酒后5 h，這可能與睡眠在凌晨1～3時(shí)飲酒對(duì)機(jī)體影響程度較深，易出現(xiàn)缺氧和呼吸暫停有關(guān)。待飲酒后3～5 h后體內(nèi)酒精儲(chǔ)存量減小，OSAHS癥狀就會(huì)減輕。

人體肝臟中的乙醇脫氫酶和ALDH可將酒精最終氧化生成H2O和CO2。ALDH包括ALDH1和ALDH2兩種形式，ALDH2是酒精代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶。ALDH2基因具有高度遺傳多態(tài)性，可影響ALDH2的功能活性。ALDH2基因的G1951A位點(diǎn)包含純合野生型ALDH2*1/2*1（GG）、雜合突變型ALDH2*1/2*2（GA）及純合突變型ALDH2*2/2*2（AA）三種基因型。GG編碼的ALDH具有正常的催化活性；GA編碼的ALDH活性僅是正常酶的6.25%，導(dǎo)致該基因型攜帶者飲酒后體內(nèi)乙醛不易被消除，乙醛水平高達(dá)野生型的6倍，而GG編碼的ALDH催化能力完全喪失[12-13]。ALDH2基因型的分布存在種族、地域差異性，該基因突變型在亞洲人群中比較普遍，在歐美白種人中少見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示武漢地區(qū)漢族男性O(shè)SAHS患者中突變型基因的比例（24.0%）低于對(duì)照組（42.9%），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與樣本量較少有關(guān)。

GG型患者酒后血液中的乙醛濃度是GA型和AA型患者的19倍和3倍，乙醛在血液中蓄積，飲酒后易出現(xiàn)臉紅、惡心、心動(dòng)過(guò)速等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，一定程度上限制了ALDH2型飲酒量[14]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者報(bào)道OSAHS患者ALDH2不同基因型之間AHI、LSaO2、最長(zhǎng)呼吸暫停時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[15-16]。本研究結(jié)果顯示，ALDH2基因G1951A多態(tài)性可能與男性O(shè)SAHS飲酒者的AHI、LSaO2無(wú)相關(guān)。推測(cè)可能原因?yàn)椋孩傺芯繉?duì)象地區(qū)較局限，樣本量較小，影響結(jié)果。② 乙醇脫氫酶和ALDH是目前僅有確定飲酒行為相關(guān)的基因[9]，需研究多基因的交互作用與OSAHS的相關(guān)性。③即刻大量飲酒后患者耐受性不同導(dǎo)致不易暴露ALDH2突變基因?qū)SAHS的影響，需研究飲酒頻率與基因多態(tài)性的關(guān)系。以上疑問(wèn)課題組將繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)研究。

本研究顯示，單次大量飲酒后3～5 h內(nèi)對(duì)OSAHS患者的呼吸暫停和缺氧都有顯著影響。OSAHS的發(fā)病機(jī)制及并發(fā)癥的形成與氧化應(yīng)激關(guān)系密切[17]。課題組前期研究顯示，OSAHS通過(guò)氧化應(yīng)激造成患者海馬和腦皮質(zhì)代謝紊亂而影響認(rèn)知功能[15，18]，故對(duì)于飲酒的OSAHS患者，在飲酒后的5 h內(nèi)保持上呼吸道通暢尤為重要，不僅會(huì)避免誤吸，還會(huì)減輕OSAHS對(duì)患者心腦血管等多器官功能的損害。

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（收稿日期：2017-06-19 本文編輯：祁海文）endprint