反相高效液相色譜法測定利伐沙班原料藥的含量

黃艷 陳雪云 楊雪峰 符乃光 劉俠

[摘要] 目的 建立反相高效液相色譜法測定利伐沙班的含量。方法 色譜柱為ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；以乙腈-水（40：60）為流動相；流速1.0 mL/min，檢測波長為250 nm。結果 利伐沙班在濃度為10.15～30.45 μg/mL范圍內與峰面積的線性關系良好（r=0.999 9，n=5），平均回收率為99.64%（RSD為0.16%，n=9）。 結論 方法準確度、精密度良好，適用于利伐沙班的含量測定。

[關鍵詞] 高效液相色譜法；利伐沙班；含量

[中圖分類號] R7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2017）06（b）-0041-02

[Abstract] Objective To establish the reversed phase high-performance liquid chromatography in measuring the content of rivastopharan raw drug. Methods Chromatographic column was ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）， and acetonitrile/water（40：60）was the mobile phase and the velocity was 1.0 mL/min，and the test wavelength was 250 nm. Results The concentration of rivastopharan had a good liner correlation with peak area in 10.15～0.45 μg/mL，（r=0.999 9，n=5）， and the average recycle rate was 99.64%（RSD，0.16%，n=9）. Conclusion The accuracy of the method is good with good precision， which is suitable for the content measurement of rivastopharan.

[Key words] High-performance liquid chromatography； Rivastopharan； Content

抗凝藥物在預防血栓中發揮重要作用，但傳統的抗凝藥物如肝素需胃腸道外給藥，院外使用不便。口服抗凝藥如華法林治療窗窄，需經常監測凝血酶原時間，給患者使用帶來不便。新型口服抗凝劑利伐沙班（rivaroxaban）是直接Xa因子抑制劑，具有使用方便、無需監測的優點[1]。利伐沙班對Xa因子具有高度的選擇性，用于髖或膝關節置換術后靜脈血栓栓塞癥的預防，體內活性和生物利用度極好，具有良好的應用前景[2-3]。為了保證藥品的有效性，現對自制的利伐沙班原料藥的含量測定方法進行研究，建立了高效液相色譜法（HPLC）測定利伐沙班的含量。方法簡便、快速，準確度、精密度良好，適用于利伐沙班的質量控制。

1 儀器與試藥

島津LC-2010AHT色譜儀，安捷倫1260Bin Pump VLb泵，安捷倫1260DVD VL檢測器，Agilent色譜工作站，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，利伐沙班（自制，批號為20140801、20140901、20140902），利伐沙班對照品（MedChem Express，批號為03201）。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

取利伐沙班供試品適量，精密稱定，加乙腈超聲溶解并稀釋制成約含利伐沙班20 μg/mL的溶液，作為供試品溶液；另取利伐沙班對照品適量，精密稱定，加乙腈超聲溶解并稀釋制成約含利伐沙班20 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。精密量取上述兩種溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱為ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；以乙腈-水（40：60）為流動相；檢測波長為250 nm；柱溫：30℃；流速1.0 mL/min。精密量取2.1項下供試品溶液、對照品溶液及空白溶劑各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖1。理論塔板數按利伐沙班主峰計算為2 800，利伐沙班主峰的拖尾因子為1.02，空白溶劑不干擾利伐沙班的含量測定，色譜條件滿足系統適用性試驗要求。

2.3 進樣精密度

取2.1項下的對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，連續進樣6次測定，結果各色譜峰面積的RSD為0.69%。表明方法的進樣精密度良好。

2.4 線性關系考察

取利伐沙班對照品適量，精密稱定，加乙腈稀釋制成每1 mL中約含利伐沙班對照125 μg的對照品儲備液，分別精密量取該溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，分別量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度C（μg/mL）對峰面積A作標準曲線，線性回歸方程為：A=34089C+769.4，相關系數r=0.999 9，利伐沙班在濃度為10.15～30.45 μg/mL范圍內與峰面積的線性關系良好。

2.5 回收率試驗

取供試品（批號為20140801，含量為99.86） 8、10、12 mg各3份，精密稱定，分別加入對照品適量，用乙腈配制成約相當于供試液濃度的80%、100%、120%的溶液，分別進樣測定，計算回收率。結果見表1，平均回收率為99.64%，RSD為0.16%（n=9）。表明方法準確度良好。

2.6 重復性試驗

取批號為20140801的樣品6份及對照品適量，精密稱定，照2.1項下的方法制備溶液。分別取20 μL注入液相色譜儀測定含量，RSD為0.10%。表明方法的重復性良好。

2.7 溶液穩定性試驗

取批號為20140801的供試品溶液，分別在放置0、2、4、6、8、12后測定，結果主峰峰面積的RSD為1.24%，表明供試品溶液12 h內穩定。

2.8 樣品含量測定

取3個批次的樣品及對照品，照2.1項下的方法制備溶液并依法測定，以外標法按峰面積計算含量，結果3批供試品含量分別為99.86%、99.83%、99.79%。

3 討論

精密稱取利伐沙班對照品適量，分別加溶劑溶解并稀釋制成中約含各對照品10 μg/mL的溶液，照分光光度法[4]，于190～400 nm波長范圍內掃描，利伐沙班在250 nm波長處有最大吸收，參照國家食品藥品監督管理局利伐沙班片JX20080077，將利伐沙班含量測定檢測波長確定為250 nm。

調整柱溫（25～35℃）、流速（0.8～1.2）mL/min、乙腈-水比例[（38：62）～（42：58）]及色譜柱[ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；inertsil ODS-3（4.6×150 mm，5 um）； Symmetry Shield RP18（4.6×250 mm，5 um）]進行試驗，色譜條件仍然滿足系統適用性要求，說明方法耐用性良好。

[參考文獻]

[1] 柯永勝.新型抗凝藥物直接Xa因子抑制劑利伐沙班[J].中國臨床藥理學與治療學，2009，14（4）：361-367.

[2] 袁靜，黃長江，張俊偉，等.利伐沙班的合成[J].中國新藥雜志，2010，19（23）：2185-2187.

[3] 高娜娜，孫宏斌.利伐沙班衍生物的合成及Xa因子抑制活性[J].中國藥科大學學報，2011，42（5）：392-399.

[4] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典（4部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

（收稿日期：2017-03-11）