血管內皮生長因子Rs3025039基因多態性與腦卒中關聯研究的Meta分析

徐炳東， 詹 銳， 麥鴻成， 陳丹霞， 周銳意， 徐安定， 張玉生

血管內皮生長因子Rs3025039基因多態性與腦卒中關聯研究的Meta分析

徐炳東1， 詹 銳2， 麥鴻成1， 陳丹霞1， 周銳意1， 徐安定1， 張玉生1

目的系統評價血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF) Rs3025039基因多態性與腦卒中關聯性。方法檢索PubMed、EMbase、Wed of Science、The Cochrane Library、Elsevier、中國知網、中國生物醫學文獻數據庫、萬方數據庫、維普數據庫和中國科技論文在線中關于VEGF Rs3025039 基因多態性與腦卒中關系研究，對納入研究進行方法學質量評價，采用Rev Man 5.3軟件進行Meta分析。結果共納入11項研究，其中10項研究均為亞洲人群。包括病例3597例，對照2748例。分析結果顯示：(1)VEGF Rs3025039 T/C等位基因、TT/CC基因型、遺傳顯性模式和隱性模式的合并OR值以及95%CI分別是1.25(1.15～1.37)、1.38(1.08～1.76)、1.26(1.03～1.54)和1.33(1.06～1.68)，均P<0.05；(2)雜合基因型CT相對于CC的合并OR值及95%CI為1.12(0.86～1.46)，P=0.40；(3)在顯性模式下，腦梗死組納入7項研究(OR=1.31，95%CI1.01～1.70)，腦出血組納入3項研究(OR=1.09，95%CI0.68～1.73)，大動脈粥樣硬化型組納入3項研究(OR=1.36，95%CI0.74～2.51)，小動脈閉塞型組納入4項研究(OR=1.25，95%CI0.90～1.73)，均P>0.05。結論VEGF Rs3025039 T位點多態性可能增加腦卒中風險，特別在中國等亞洲人群中。

血管內皮生長因子； 基因多態性； 腦卒中； Meta分析

Abstract：ObjectiveTo evaluate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF) gene Rs3025039 polymorphism and stroke by a meta-analysis.MethodsAll eligible published literatures regarding to the VEGF Rs3025039 polymorphism and stroke were retrieved from searching PubMed，EMbase，Wed of Science，The Cochrane Library，Elsevier，China National Knowledge Infrastructure，China Biology Medicine disc，WanFang Data，VIP Database for Chinese Technical Periodicals，Sciencepaper Online. The methodological quality of the included studies was evaluated and meta-analysis was performed with Rev Man 5.3 software.ResultsA total of 11 case-control studies with 3597 stroke cases and 2748 controls，of which 10 were Asian，were recruited into this study. The meta-analysis revealed that the combined odds ratio (OR) for T allele was 1.25(1.15～1.37) times higher than C allele；TheORfor homozygous TT and CC was 1.38(1.08～1.76)；TheORsof dominant model and recessive model were 1.26(1.03～1.54) and 1.33(1.06～1.68) respectively；All abovePvalues were less than 0.05.TheORfor heterozygous CT and CC was 1.12(0.86～1.46)，P=0.40.Under the dominant model，theORof infarction group (including 7 studies)，hemorrhage group (including 3 studies)，large artery atherosclerosis group (including 3 studies)，small artery occlusion group (including 4 studies) was 1.31(1.01～1.70)，1.09(0.68～1.73)，1.36(0.74～2.51)，1.25(0.90～1.73)，respectively. However，allPvalues were more than 0.05.ConclusionThe VEGF T polymorphism may be a risk factor for stroke，especially in Chinese and other Asians.

Keywords： VEGF； Polymorphism； Stroke； Meta-analysis

腦卒中發病機制復雜，可能是遺傳和環境等多種因素共同作用的結果[1]。全基因組關聯研究已篩查到一些腦卒中易感基因，但這些易感基因對腦卒中的真正貢獻仍不清楚[2]。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前公認最重要、最有效的一種高度特異性促血管內皮生長的細胞因子，與腦卒中關系密切，參與動脈粥樣硬化、血管生成、腦水腫及腦卒中后血管修復等[3]。人類VEGF基因至少有30個單核苷酸多態性位點，其中Rs3025039(936C/T)是VEGF基因多態性與腦卒中關系研究的熱門位點，但因不同研究在檢測方法、樣本量大小、研究群體等不同，導致VEGFRs3025039基因多態性與腦卒中的關系存在爭論。本研究擬收集國內外有關探討VEGF Rs3025039 (936C/T)基因多態性與腦卒中發病關系的研究，系統評價二者之間關系，旨在為腦卒中防治提供一定依據。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索 計算機檢索PubMed、EMbase、Wed of Science、The Cochrane Library、Elsevier、中國知網、中國生物醫學文獻數據庫、萬方數據庫、維普數據庫和中國科技論文在線共10個數據庫，查找VEGF Rs3025039基因多態性與腦卒中關系研究，檢索時限從建庫至2017年3月。英文檢索詞包括：“VEGF”or “vascular endothelial growth factor” or “vasculotropin”，“single nucleotide polymorphism” or “SNP”or “polymorphism” or “mutation” or “genetics” or “variant”，and “stroke” or “cerebral infarction” or “cerebrovascular disorders”。中文檢索詞包括：“卒中”；“腦出血”；“蛛網膜下腔出血”；“腦梗死”；“腦梗死”；“血管內皮生長因子”；“單核苷酸多態性”；“基因多態性”。對綜述性文獻進行二次檢索。

1.2 文獻納入和排除標準 納入標準：(1)國內外已公開發表的關于VEGF基因多態性與腦卒中發病文獻；(2)各研究的目的、統計方法相似，文獻數據齊全；(3)所選文獻研究方法相似；(4)基因型或等位基因數據完備；(5)對照組人群基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定理(P>0.05)。排除標準：(1)未給出具體方法、具體數據的研究；(2)研究對象年齡、性別等一般資料存在較大差異且可能存在較明顯偏倚文獻；(3)相同數據重復發表文獻；(4)對照組人群基因型頻率分布不符合Hardy-Weinberg平衡定理(P<0.05)，或未做該平衡檢驗。

1.3 文獻篩選、資料提取與質量評價 由2位研究者按納入和排除標準獨立篩選文獻、提取資料并評價納入研究方法學質量，如遇分歧討論解決或交由第三位研究者協助裁定。利用Newcastle-Ottawa scale (NOS) 量表評分系統對各個獨立研究文獻進行質量控制。

1.4 統計學方法 采用Cochrane協作網提供的Rev Man 5.3軟件進行Meta分析。以I2統計量評價各研究間異質性，I2<25%無異質性，I2≥25%低度異質性，I2≥50%中度異質性，I2≥75%高度異質性。當異質性較小或無異質性時，以固定效應模型合并。如I2>50%，表明研究間異質性較大，先嘗試亞組分析解釋，若無法解釋，則采用隨機效應模型進行Meta分析。對每個匯總指標進行敏感性分析，比較固定效應和隨機效應模型匯總指標有無區別及通過逐個剔除單個研究對總體分析結果的影響進行敏感性分析。以漏斗圖及Begg檢驗評估發表偏倚。

2 結 果

2.1 文獻基本特征及質量評估 初篩共獲得2743篇文獻，按納入和排除標準剔除文獻2732篇，最終納入11篇文獻進行Meta分析[4～14]。納入文獻研究對象共包括病例組3597例，對照組2748例。其中亞洲人群5945例；非亞洲人群400例。納入文獻檢測方法上均通過采集研究對象外周靜脈血提取基因組DNA，TaqMan或PCR-RFLP或LDR技術分別產生三種VEGF Rs3025039基因型：野生純合型CC、突變雜合子CT及突變純合子TT。分別用基因型TT對CC、CT對CC比較，并進行等位基因模型、顯性模型和隱性模型比較。納入文獻中關于VEGF基因多態位點的基因型、等位基因及單體型頻率、等位基因連鎖狀態等結果(見表1)。

2.2 Meta分析結果 (1)VEGF Rs3025039 T等位基因相較C等位基因合并OR值為1.25 (95%CI1.15～1.37，見表2)；(2)純合基因型TT相對于CC合并OR值為1.38 (95%CI1.08～1.76，見表2)；(3)遺傳顯性模式和隱性模式合并OR值及95%CI分別是1.26 (95%CI1.03～1.37) 和1.33 (95%CI1.06～1.68，見圖1、圖2)。表明Rs3025039的T位點多態性可能增加腦卒中風險，特別是在中國等亞洲人群中。按腦卒中類型又將顯性模型分為腦出血組、腦梗死組、大動脈粥樣硬化型組、小動脈閉塞組，上述分組及共顯性模型CT比較CC組P值均>0.05，差異無統計學意義(見表2)。

2.3 敏感性分析和發表偏倚評估 對合并等位基因及各遺傳模型下基因型數據分別采用對應Rev Man 5.3統計模型(固定效應或隨機效應模型)進行分析，結果顯示換用相反的效應模型合并結果與原效應模型合并結果一致，分別剔除單個研究后的合并結果均與未剔除時結果一致。等位基因模型、共顯性模型、顯性模型及隱性模型組研究數目≥10個，因此采用漏斗圖分析這兩組發表偏倚，結果顯示漏斗圖兩側均對稱分布(見圖3)，Begg檢驗pr>|z|，提示無明顯發表偏倚。

表1 腦卒中血管內皮生長因子Rs3025039分布病例對照研究文獻特征

CC、CT、TT分別代表VEGF Rs3025039野生型、雜合突變型、純合突變型；C、T分別為野生型、突變型等位基因；NA指原始文獻中未提供數據

表2 血管內皮生長因子Rs3025039遺傳與腦卒中關聯性分析

T、C分別為突變型、野生型等位基因；CC、CT、TT分別代表VEGF Rs3025039野生型、雜合突變型、純合突變型

圖1 腦卒中發病風險與血管內皮生長因子Rs3025039位點CC/(CT+TT)基因型Meta分析

圖2 腦卒中發病風險與血管內皮生長因子Rs3025039位點(CC+CT)/TT基因型Meta分析

A：等位基因模型；B：顯性模型；C隱形模型；D：共顯性模型TT VS CC。漏斗圖顯示兩側均基本對稱分布，提示無明顯發表偏倚

3 討 論

VEGF又名血管通透因子，是一種直接作用于血管內皮細胞的特異性有絲分裂原，由兩個相同相對分子質量(24 kDa)亞基以二硫鍵相連而成的同源二聚體糖蛋白，染色體位于6p21.3，其基因由8個外顯子和7個內含子組成，編碼區大約14 kb。VEGF家族主要包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生長因子。VEGF家族與相應受體結合后可發揮增加血管通透性，誘導血管內皮細胞增殖，促進新生血管形成[15]，參與神經細胞保護[16]，促進神經修復與功能恢復等生物學功能。

VEGF與腦卒中密切相關。在缺血性腦組織中，血管完整性喪失導致血漿蛋白質外滲到鄰近組織中，激活基質金屬蛋白酶、組織纖維蛋白溶酶原等相關因子，并促進VEGF誘導內皮細胞增殖。周細胞釋放血管生成素-1，通過結合于內皮細胞上的Tie-2受體形成緊密連接。VEGF通過破壞血管周細胞來阻礙新生血管成熟[17]。腦缺血后VEGF可通過誘導內皮細胞增殖參與生理和病理性血管生成，其表達水平可能增加卒中風險[3]。因此，在正確的時間和地點VEGF和血管生成素協調作用使神經恢復成為可能。VEGF可增加血管通透性和擴張血管，與出血性疾病有關[18]。在出血性腦組織中，VEGF可促進蛛網膜下腔出血后腦水腫形成[19]，引起斑塊內出血和斑塊破裂[20]。研究顯示腦動靜脈畸形患者組織VEGF水平和基質金屬蛋白酶含量與腦出血風險成正相關，且VEGF能上調基質金屬蛋白酶活性[21]。亞型VEGF121和VEGF165過表達加速腫瘤周圍血管生長和崩解[22]。VEGF信號通路如何影響卒中發病機制目前仍存在爭議。總之，VEGF信號的缺乏可能導致血管內皮功能障礙、血管變性、薄壁血管形成、降低血管順應性及增加自發性血管壁破裂風險[23]。最新研究表明在動物模型中VEGF-B通過與其受體結合促進神經功能修復[24]。因此，探討VEGF基因多態性與腦卒中危險性關系，有助于探究腦卒中發病機制。

腦卒中發病機制復雜，遺傳因素在卒中易感性中起重要作用。薈萃分析證實亞甲基四氫葉酸還原酶[25]和白細胞介素-1[26]基因突變與腦卒中發病有關。近年來，有關基因多態性和腦卒中關系的研究越來越多[27]。VEGF基因的單核苷酸多態性位點可影響該基因的表達導致VEGF蛋白異常表達而誘發疾病。單核苷酸多態性位點在CG 序列上出現最為頻繁，且C常轉換為T。本文選擇目前研究較多的VEGF多態性位點Rs3025039(936C/T)，該位點位于3’非翻譯區，研究發現該多態性位點會影響VEGF表達量并與急性呼吸窘迫綜合征[28]、早產兒視網膜病變[29]、卵巢癌[30]等密切相關。本文對11篇關于VEGF Rs3025039與腦卒中關聯研究的文獻進行薈萃分析，結果顯示VEGF Rs3025039與卒中風險相關，特別在中國等亞洲人群中。雖然腦卒中4個亞組(腦出血組、腦梗死組、大動脈粥樣硬化型組、小動脈閉塞組)分析均無統計學差異，但腦梗死組P值處于臨界點(0.05)，若增加樣本量可能會獲得陽性結果。

本研究存在一些局限性：(1)研究數量有限，僅11個；(2)納入的10個亞洲人群研究中，中國大陸文獻7個，韓國2個，尼泊爾1個，故本研究文獻的亞洲地區分布面較窄，結果對整個亞洲代表性來說有待進一步證實；(3)納入歐美國家文獻僅1個，結果不具有全球廣泛代表性。期待開展更多高質量、大樣本、多中心研究，以更全面評價VEGFRs3025039多態性與腦卒中關系。

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CorrelationbetweenvascularendothelialgrowthfactorgeneRs3025039polymorphismandstroke：ameta-analysis

XUBingdong，ZHANRui，MAIHongcheng，etal.

(DepartmentofNeurologyandStrokeCenter，TheFirstAffiliatedHospitalofJiNanUniversity，Guangzhou510632，China)

1003-2754(2017)09-0792-05

2017-07-20；

2017-08-22

國家自然科學基金(No. 81171084)；廣東省自然科學基金(No. 2014A030313384)；廣東省醫學科研基金(No. A2014381)；廣州市科技計劃(No. 2014Y2-00505、201508020004)

(1.暨南大學附屬第一醫院神經內科和腦血管病中心，廣東 廣州 510632；2.暨南大學附屬第一醫院消化內科，廣東 廣州 510632)

張玉生，E-mail：zhangys@jnu.edu.cn

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