軟棗獼猴桃“寒玉1號”組培技術研究

杜鵬瑤　劉德江　徐彪

摘要[目的]探索軟棗獼猴桃“寒玉1號”適宜組培方法。[方法]以新生腋芽為外植體，篩選最佳消毒方法，并對影響其生長的NAA、6-BA 等生長調節物質的濃度進行篩選。[結果]以5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min為適宜消毒方法，污染率和褐化率均較低；腋芽在WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培養基中增殖效果最佳，增殖系數可達5.6，株高3.9 cm；叢生芽在WPM+NAA 0.3 mg/L培養基中誘導生根效果最佳，生根率可達100%，平均根條數為4.4條，平均根長為5.2 cm。[結論]軟棗獼猴桃“寒玉1號”可采用組織培養的方法進行快速繁殖。

關鍵詞軟棗獼猴桃；“寒玉1號”；腋芽；組織培養

中圖分類號S663.4文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）22-0098-03

Abstract [Objective] To explore the suitable tissue culture technique for Actinidia arguta “Hanyu No.1”. [Method] With axillary bud as explant， the best disinfection method was filtered， and the NAA， 6BA concentration were selected. [Result] The best disinfection methods were 5% NaClO 8 min+0.1%HgCl2 6 min or 9 min， 5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 6 min， in which the mortality rate and contamination rate were lower. The best medium of inducing germinating of explant was WPM+6BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L， in which the ratio of proliferation was 5.6 and the height of plant was 3.9 cm. The best medium of inducing rooting from cluster buds was WPM+NAA 0.3 mg/L， in which the rate of rooting was 100%， the average number of root was 4.4 and the average length of root was 5.2 cm. [Conclusion] It concluded that Actinidia arguta “Hanyu No.1” can adopt the method of tissue culture for rapid propagation.

Key wordsActinidia arguta；“Hanyu No.1”；Axillary bud；Tissue culture

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta），屬于獼猴桃科獼猴桃屬，是多年生藤本落葉植物，別名軟棗子、獼猴桃、獼猴梨、中華軟棗獼猴桃等。軟棗獼猴桃果實可食用，富含多種營養成分，具有很高的營養和經濟價值[1]，可加工成果脯、罐頭、果汁、果醬，也可以用來制作糕點或釀酒等[2]。軟棗獼猴桃還可藥用，具有健胃、解熱、止血等功能，其根及根皮對消化道癌癥具有一定的抑制和治療作用[3]。軟棗獼猴桃屬于雌雄異株植物，以野生為主，果實的產量和質量不高。自20世紀90年代開始馴化人工栽培，多采用種子播種、枝條扦插等方式進行常規繁殖。種子繁殖存在無法辨別雌雄植株的缺點，扦插等繁殖方法存在繁殖系數低等缺點，很難滿足市場的需求[4-5]。為了快速獲得大量可結果雌株，對其組培技術進行研究，通過篩選最佳消毒方法和植物生長調節物質使用濃度，建立高效快速繁殖體系，以期為軟棗獼猴桃的大面積推廣栽培提供支持。

1材料與方法

1.1材料

試驗材料為軟棗獼猴桃“寒玉1號”枝條，實驗室內水培促使其腋芽萌發，取新生3～5 cm腋芽進行試驗。

1.2方法

1.2.1腋芽消毒方法。

將腋芽剪切成2 cm長的小段置于無菌瓶內，用5% NaClO和0.1% HgCl2浸泡消毒，消毒時間如下：X1（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 3 min），X2（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min），X3（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 9 min），X4（5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 3 min），X5（5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min），X6（ 5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 9 min）。NaClO和HgCl2浸泡消毒后再用無菌水沖洗3次，最后放入帶有濾紙的無菌培養皿上備用。

1.2.2腋芽增殖培養。

將消毒后的腋芽接種到增殖培養基中，培養基配方如下：Y1（WPM+6-BA 2.0 mg/L），Y2（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y3（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y4（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y5（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y6（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y7（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y8（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y9（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y10（WPM+6-BA 4.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L）。每瓶培養基接種5個腋芽，每個處理接種5瓶，重復3次。統計腋芽增殖系數（增殖系數=再生叢生芽總數/接種腋芽總數）、平均株高等。

1.2.3生根培養。

將組培增殖形成的幼苗接種到生根培養基中進行生根培養，培養基配方如下：G1（WPM+NAA 0.1 mg/L），G2（WPM+NAA 0.2 mg/L），G3（WPM+NAA 0.3 mg/L），G4（WPM+NAA 0.4 mg/L），G5（WPM+IBA 0.1 mg/L），G6（WPM+IBA 0.2 mg/L），G7（WPM+IBA 0.3 mg/L），G8（WPM+IBA 0.4 mg/L）。每瓶培養基接種5個叢生芽苗，每個處理接種5瓶，重復3次。每天定期觀察統計其生根時間，20 d后計算生根率（生根率=生根苗數/接種苗數）、每株苗生根數、根長等指標。

1.2.4培養條件。

培養溫度為（21±2）℃，空氣相對濕度 40%～50%，光照時間 12 h/d，光強為1 500～2 000 lx[6]。

1.3數據處理與分析

用Excel 2003對數據進行計算，用SPSS16.0軟件進行統計分析。

2結果與分析

2.1不同處理外植體生長情況

接種7 d后，對不同消毒方法外植體的污染率和褐化率進行統計，結果見表1。由表1可知，X3和X6處理外植體污染率較低，二者間差異不顯著。X1處理污染率最高，達33.3%。X6處理外植體褐化率最高，為30.7%。X1 、X2和X4處理外植體褐化率較低，3個處理間差異不顯著。固定NaClO消毒時間，隨著HgCl2 消毒時間的延長，污染率會逐漸降低，褐化率會逐漸增高。固定HgCl2 消毒時間，隨著NaClO消毒時間的延長，在污染率方面，除X1和X4 處理差異顯著外，其他處理變化不顯著；在褐化率方面，除X1和X4 處理差異不顯著外，其他處理差異顯著。這說明NaClO和HgCl2對外植體的消毒及褐化均產生了一定的作用。綜合考慮，X2 、X3和X5處理在軟棗獼猴桃“寒玉1號”外植體消毒方面為較適宜的方法。

2.2不同處理腋芽增殖情況

腋芽接種30 d后，調查其增殖情況，結果見表2。腋芽接種及增殖生長情況見圖1a、b。

由表2可知，10種不同的培養基均能誘導外植體增殖，Y6處理的腋芽增殖系數最高，為5.6；增殖苗株高最高，為3.9 cm，均顯著高于其他處理。這說明在誘導腋芽增殖上Y6處理為

適宜的培養基配方。固定6-BA濃度，隨著NAA濃度的增大，增殖系數出現先增后降的現象。當6-BA濃度為2.0和3.0 mg/L時，隨著NAA濃度的增大，株高出現先增后降的現象；當6-BA濃度為4.0 mg/L時，隨著NAA濃度的增大，株高出現下降的現象。固定NAA濃度，隨著6-BA濃度的增大，增殖系數和株高均出現先增后降的現象。

2.3不同處理組培苗生根情況

接種后20 d，調查組培苗生根情況，結果見表3和圖1c。由表3可知，叢生芽苗在附加不同濃度IBA和NAA的培養基上均能生根。G3、G4、G7處理的生根率均為100%，顯著高于其他處理。G3處理的生根時間最短，為5 d。G3處理的根數和根長表現最好，根數為4.4條，根長為5.2 cm，均顯著高于其他處理。在提高生根時間和生根率方面，適宜濃度的IBA和NAA均能達到良好的效果，但在促進根數及根長方面NAA效果優于IBA。綜合各因素考慮，G3處理為促進軟棗獼猴桃“寒玉1號”組培苗生根的適宜培養基配方。

3結論與討論

通過對6種不同消毒方法進行比較發現，不同消毒劑的處理時間對軟棗獼猴桃外植體的消毒效果有較大影響，5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min這3個處理為外植體適宜消毒方法；在增殖培養過程中，WPM+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L為腋芽增殖最佳培養基，低濃度的NAA對叢生芽的誘導有促進作用，濃度過高會對誘導有抑制作用；在生根培養過程中，WPM+NAA 0.3 mg/L為最佳生根培養基，在提高生根時間和生根率方面，適宜濃度的IBA和NAA均能達到良好的效果，但在促進根數及根長方面NAA效果優于IBA。

目前，國內外已有許多軟棗獼猴桃優良品種的人工繁殖及栽培獲得成功。我國具有豐富的野生軟棗獼猴桃品種資源，但這些品種人工繁殖并開發利用的極少。軟棗獼猴桃的開發利用研究還需要進一步的努力。該研究建立了軟棗獼猴桃“寒玉1號”的高效植株再生體系，為軟棗獼猴桃及其優良品種的開發利用和工廠化育苗奠定了基礎。

參考文獻

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