結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達及臨床意義

楊立平 李曉峰 秦 偉 戴 勇 黨寶寶 楊生虎 韓 云 耿興隆 董 晉

(青海大學附屬醫院腹部腔鏡外科，青海 西寧 810001)

結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達及臨床意義

楊立平 李曉峰 秦 偉 戴 勇 黨寶寶 楊生虎 韓 云 耿興隆 董 晉

(青海大學附屬醫院腹部腔鏡外科，青海 西寧 810001)

目的探討結直腸癌組織中凋亡抑制基因Survivin、基質金屬蛋白酶(MMP)-2、nm23-H1及血管內皮生長因子(VEGF)的表達及臨床意義。方法選擇手術切除的結直腸癌患者組織標本150例，另選擇正常結直腸組織標本77例作為對照，采用免疫組化SP法檢測其Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF陽性表達情況，分析結直腸癌組織Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽性表達與患者臨床特征及預后的關系。結果結直腸癌組織中，Survivin、MMP-2、VEGF的陽性表達率均高于正常結直腸組織，而nm23-H1的陽性表達率低于正常結直腸組織(P<0.05)；Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF在結直腸癌組織中表達與患者的年齡、性別、腫瘤原發部位、腫瘤直徑、病理類型無關(P>0.05)，與浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移及預后有關(P<0.05)。結論Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF參與了結直腸癌的發病及進展過程，聯合檢測有助于了解浸潤情況，辨別腫瘤分期、是否伴有淋巴結轉移及判斷預后。

結直腸癌；Survivin；基質金屬蛋白酶-2；nm23-H1；血管內皮生長因子

惡性腫瘤的形成與發展與血管形成、腫瘤細胞克隆增殖及腫瘤凋亡抑制等有關〔1〕。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，具有腫瘤特異性；基質金屬蛋白酶(MMP)-2與腫瘤的發生、轉移及侵襲等密切相關；nm23-H1具有核苷二磷酸激酶活性，通過影響微管解聚及G蛋白介導信號傳導通路，參與腫瘤發病及進展過程；血管內皮生長因子(VEGF)又稱為血管通透因子，通過在體內誘導血管新生參與腫瘤發病及進展〔2〕。本文探討結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達情況。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇2013年1月至2015年10月經青海大學附屬醫院手術切除的結直腸癌患者組織標本150例。納入標準：(1)經術前活檢或術后病理證實為結直腸癌；(2)術前無放、化療史。排除標準：(1)術后生存期<12個月；(2)術后脫落病例及隨訪時間<12個月。其中男94例，女56例；年齡32～87〔平均(53.76±7.68)〕歲；腫瘤部位：結腸77例，直腸73例；根據國際抗癌聯盟制訂的第7版TNM分期標準〔3〕，Ⅰ期25例，Ⅱ期39例，Ⅲ期63例，IV期23例；病理類型：管狀腺癌86例，乳頭狀腺癌45例，黏液細胞癌19例；分化程度〔4〕：高分化37例，中分化63例，低分化50例；腫瘤直徑≤5 cm 59例，>5 cm 91例，浸潤深度：T1～T3 66例，T4 84例；有淋巴結轉移76例，無淋巴結轉移74例。另選擇本院同期收集的正常結直腸組織標本77例作對照，男48例，女29例；年齡30～81〔平均(52.08±8.43)〕歲。兩組性別構成、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 所有標本采用10%的中性甲醛固定，常規石蠟包埋切片(厚度4 μm)，免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶法(SP)染色。鼠抗人Survivin單克隆抗體、兔抗人MMP-2單克隆抗體、兔抗人nm23-H1單克隆抗體及兔抗人VEGF多克隆抗體均購于美國Santa Cruz公司，二氨基聯苯胺(DBA)顯色試劑盒及SP試劑盒均購于北京天根生化科技有限公司。以本實驗室自行配制磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照，用已知標志物的陽性組織切片為陽性對照，具體檢測操作步驟嚴格按照所用試劑盒的操作說明進行。陽性表達判斷標準：Survivin定位于細胞核，MMP-2、nm23-H1及VEGF定位于細胞核和細胞質，以細胞核內出現少量著色顆粒及細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性細胞，在高倍鏡(×200)下隨機取10個視野進行觀察，若陽性細胞數<10%為陰性，≥10%的為陽性。

1.3觀察指標 (1)比較結直腸癌組織與正常結直腸組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽性表達率。(2)分析結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽性表達與患者臨床特征的關系：包括性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理類型、臨床分期、浸潤深度、淋巴結轉移等臨床特征的關系。(3)分析結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的陽性表達與預后的關系：術后隨訪12～48個月，比較末次隨訪時Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達情況與生存率的關系。

1.4統計學方法 應用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗、方差分析。

2 結 果

2.1免疫組化檢測結果 與正常結直腸組織比較，結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、VEGF的陽性表達率均升高，而nm23-H1的陽性表達率降低(P<0.05)。見表1。

2.2各檢測指標的表達與結直腸癌病理特征的關系 結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達與患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、病理類型等無關(P>0.05)與浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移等有關(P<0.05)。見表2。

2.3各指標表達與生存率的關系 150例結直腸癌患者術后均獲得隨訪，無脫落病例，隨訪成功率100.00%，末次隨訪時死亡率為20.67%(31/150)，生存率79.33%(119/150)，術后生存率與Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達有關(P<0.05)。見表3。

表1 結直腸癌與正常結直腸組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達情況〔n(%)〕

表2 結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達與患者臨床特征的關系〔n(%)〕

表3 結直腸癌患者Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達與預后的關系〔n(%)〕

3 討 論

目前，關于結直腸癌的發病原因尚不十分明確，可能與結直腸肉息、慢性潰瘍性結腸炎、血吸蟲病等癌前病變和飲食習慣(高脂肪飲食發病率高)、遺傳等因素有關。研究指出，結直腸癌的發生、發展及術后復發轉移與多種生物學指標密切相關〔5〕。本文探討結直腸癌組織中Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF的表達及臨床意義。Survivin在惡性腫瘤組織中的作用機制尚不十分清楚，通常認為其通過抑制細胞凋亡參與腫瘤的發生及進展過程，其具體途徑可能包括兩條：一是抑制凋亡終末效應酶Caspase-3 和Caspase-7活性，從而阻斷各種刺激誘導的細胞凋亡過程；二是與周期蛋白激酶(CDK4)結合，使CDK2/cyclin-E激活和核糖體磷酸化啟動細胞進入周期加快了G1/S期的轉換，阻斷凋亡信號轉導通路〔6〕。MMP-2一方面可降解基底膜中的Ⅳ型膠原，另一方面能分解多種重要活性分子結合蛋白，導致活性分子游離，從而破壞癌細胞浸潤的物理屏障〔7〕。nm23-H1是得發現的首個人類nm23基因，定位與人17q21-22，由5個外顯因子和4個內含因子構成，全長8.5 kb，編碼區有533個核苷酸，分子量17 kDa，具有核苷二磷酸激酶、組氨酸蛋白激酶活性和絲氨酸自身磷酸化作用，通過與相關基因的相互作用參與腫瘤侵襲轉移，參與腫瘤增殖、分化及轉移過程〔8〕。VEGF又稱為血管通透因子，位于6p21.3，由8個外顯因子和7個內含因子構成，全長14 kb，具有促進新血管形成和增強血管通透性的雙重功能，而腫瘤細胞的生長、轉移均依賴于新血管的形成，因此認為VEGF在腫瘤代謝及轉移中扮演了重要角色〔9〕。本研究結果提示Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF參與了結直腸癌的發生、進展過程。分析原因可能為nm23-H1表達水平降低可能增強結直腸癌細胞的侵襲能力和腫瘤細胞的運動能力，VEGF高表達可促進腫瘤血管及淋巴管增多，從而加速腫瘤的生長及轉移〔10〕。郭穎等〔11〕的研究認為，MMP-2在結直腸癌侵襲轉移中有重要作用，是惡性侵襲性腫瘤的一個敏感指標，本研究與之基本相符。另外本研究結果提示通過檢查Survivin、MMP-2、nm23-H1及VEGF表達有助于判斷腫瘤浸潤情況、惡性程度，了解是否伴有淋巴結轉移，評估預后生存率。

1伊日貴.腫瘤侵襲轉移機制研究進展〔J〕.中華實用診斷與治療雜志，2014；28(10)：937-9.

2劉家云.結直腸癌藥物敏感基因檢測與治療的研究進展〔J〕.醫學綜述，2014；20(5)：810-3.

3姚宏偉，劉蔭華.第7版結直腸癌TNM分期(2010)更新內容解讀〔J〕.中華外科雜志，2010；48(21)：1601-4.

4楊 軍，郭 睿，康安靜，等.一種新的結直腸癌組織學分型、分級-評分方案〔J〕.南方醫科大學學報，2014；34(2)：169-73.

5Gibson TM，Park Y，Robien K，etal.Body mass index and risk of second obesity-associated cancers after colorectal cancer：a pooled analysis of prospective cohort studies〔J〕.J Clin Oncol，2014；32(35)：4004-41.

6Sun L，Huang Y，Wei Q，etal.Cyclin E-CDK2 protein phosphorylates plant homeodomain finger protein 8 (PHF8) and regulates its function in the cell cycle〔J〕.J Biol Chem，2015；290(7)：4075-85.

7Schwegmann K，Bettenworth D，Hermann S，etal.Detection of early murine colorectal cancer by MMP-2/-9-guided fluorescence endoscopy〔J〕.Inflamm Bowel Dis，2016；22(1)：82-91.

8Fiore LS，Ganguly SS，Sledziona J，etal.c-Abl and Arg induce cathepsin-mediated lysosomal degradation of the NM23-H1 metastasis suppressor in invasive cancer〔J〕.Oncogene，2014；33(36)：4508-20.

9谷 芳，李秀麗，姚元慶.血管內皮生長因子165b抑制腫瘤血管生成的研究進展〔J〕.解放軍醫學院學報，2014；35(7)：770-2.

10焦彥華，王秀艷，劉葉廷.結直腸癌組織中血管內皮生長因子-C及nm23-H1蛋白的表達及意義〔J〕.中國醫師進修雜志，2014；37(8)：20-3.

11郭 穎，顧 鑫，張林西，等.結直腸腺癌中Cox-2、MMP-9和E-cadherin的表達及臨床意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2015；31(7)：810-2.

〔2016-12-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

R73

A

1005-9202(2017)19-4819-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.058

李曉峰(1972-)，男，副主任醫師，主要從事普外研究。

楊立平(1976-)，男，碩士，主治醫師，主要從事普外研究。