骨橋蛋白的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系

童雪影 陳 敏 祝河忠 梁 惠 潘慶敏

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

骨橋蛋白的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系

童雪影 陳 敏 祝河忠 梁 惠 潘慶敏

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院,湖北 十堰 442000)

目的探討骨橋蛋白(OPN)的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系。方法收集健康青年(40歲以下)、中年(40～65歲)、老年組(>65歲)，并經(jīng)冠脈造影結(jié)果診斷無(wú)冠心病的血清標(biāo)本各20份，并收集冠心病非老年組(<65歲)及冠心病老年組(>65歲)標(biāo)本各20例，所有冠心病患者診斷均以冠脈造影結(jié)果為準(zhǔn)，并進(jìn)行Western印跡法檢測(cè)OPN的含量，并同時(shí)采集各組吸煙史，飲酒史，血脂等生化指標(biāo)。結(jié)果OPN在老年組中呈陽(yáng)性表達(dá)，而在青、中年組呈陰性；老年組、中年組及青年組OPN光密度值分別為7.34×104±8.97×103，1.34×103±4.15×102，1.58×102±0.096× 102，各組間差異顯著(F=4.29，P=0.02)；OPN在冠心病非老年組和老年組間表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論OPN存在增齡性變化，當(dāng)存在冠脈病變時(shí)，OPN不再有年齡差異，可能對(duì)冠心病的發(fā)生存在作用。

增齡；骨橋蛋白；冠心病

正常情況下骨橋蛋白(OPN)最先于破骨細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，是源于單核細(xì)胞系的具有骨吸收功能的多核細(xì)胞，在許多骨質(zhì)的疾病中起重要作用，如骨質(zhì)疏松〔1〕、牙周炎等疾病，目前發(fā)現(xiàn)在多種細(xì)胞中均有表達(dá)，如骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞，主要通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)特異性信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)而介導(dǎo)細(xì)胞黏附、遷移、增殖〔2〕。但老年患者中是否存在增齡性O(shè)PN改變，OPN是否參與年齡增長(zhǎng)后老年人動(dòng)脈粥樣硬化的改變并不十分明確。本實(shí)驗(yàn)擬觀察OPN的增齡性變化及其與冠心病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)采取青年組(20～39歲)，中年組(40～65歲)，老年組(>65歲)，冠脈造影結(jié)果陰性，血樣標(biāo)本各20份，并收集太和醫(yī)院心內(nèi)科冠脈造影結(jié)果陽(yáng)性者40份，并按年齡分為冠心病非老年組及老年組各20份，所有冠心病診斷患者均以冠脈造影結(jié)果為準(zhǔn)，所有標(biāo)本均選取非吸煙飲酒者。

1.2方法 Western印跡法將收集到的血液標(biāo)本放入低溫高速離心機(jī)中3 000 r/min離心，取上清，常規(guī)勻漿，提蛋白，蛋白質(zhì)變性。采用考馬斯亮藍(lán)比色法檢測(cè)蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE 電泳。電泳完畢后用去離子水沖洗干凈，使用三明治電轉(zhuǎn)法，將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，然后置于5%的脫脂奶粉中封閉，4℃下過(guò)夜。棄去封閉液，用PBST漂洗2～3次，加入按1∶50稀釋后的一抗，室溫下于搖床孵育2 h，PBST漂洗后，加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗鼠二抗，室溫下于搖床孵育1 h，PBST漂洗后進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，最后以Gel pro4.0 版凝膠光密度分析軟件進(jìn)行測(cè)量分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

OPN在老年組中均為陽(yáng)性表達(dá)；而在青年組和中年組表達(dá)量較少，見圖1。各組OPN光密度值：青年組(1.58×102±0.96×102)，中年組(1.34×103±4.15×102)，老年組(7.34×104±8.97×103)。青年組與中年組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，老年組與青年及中年組表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。冠心病非老年組OPN光密度值(4.35×102±7.01×102)與老年組(6.01×104±6.27×104)無(wú)明顯差異(P>0.05)。

圖1 各組OPN表達(dá)

3 討 論

OPN具有平衡骨代謝，參與組織修復(fù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解，介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)型，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和鈣化以及機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)等等諸多的生理和病理功能〔3～5〕。前期工作已發(fā)現(xiàn)OPN在人胸主動(dòng)脈瘤及腹主動(dòng)脈瘤中均存在重要作用，并在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也得到同樣結(jié)果〔6，7〕。而OPN最早及最多被發(fā)現(xiàn)為破骨細(xì)胞產(chǎn)生的一種非膠原蛋白，研究表明OPN可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的黏附功能，促進(jìn)冠心病等血管內(nèi)炎癥細(xì)胞附著于病變血管，進(jìn)而分泌多種炎癥因子，促進(jìn)炎癥細(xì)胞及血脂黏附于病變血管，加速冠脈血管狹窄的發(fā)展，從而成為冠心病的重要原因之一〔8〕。本文結(jié)果提示OPN存在增齡性變化。Jono等〔9，10〕研究表明細(xì)胞所分泌的OPN有磷酸化和未磷酸化兩種形式，而其磷酸化與其功能密切相關(guān)，磷酸化后的OPN與細(xì)胞表明整合素受體結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮其在炎癥細(xì)胞中促進(jìn)其黏附功能的作用及血管平滑肌細(xì)胞鈣化作用。OPN在老年人群中含量的增高，提示人體老年化后可能造成磷酸化形式存在的OPN增高，而根據(jù)OPN在冠心病中多種作用，使老年人出現(xiàn)冠心病風(fēng)險(xiǎn)明顯增高。在已存在冠心病患者中，病變冠脈中OPN持續(xù)分泌，并發(fā)揮其促炎癥作用，而其相關(guān)致病機(jī)制可能為促進(jìn)炎癥細(xì)胞黏附功能，但仍需要實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，而在老年人中其含量增高，可能使其患冠心病風(fēng)險(xiǎn)增高，綜上所述，OPN存在增齡性變化，可能是冠心病發(fā)生及發(fā)展的重要因子。由于冠心病是一個(gè)多個(gè)發(fā)病機(jī)制共同作用的復(fù)雜的病變過(guò)程，OPN在其中的具體作用機(jī)制還有許多不明確之處，仍需要進(jìn)行更加深入的探索和研究。

1Kanis JA，McCloskey EV，Johansson H，etal.Guidlines for diagnosis and management of osteoprosis in post menopausal women〔J〕.Osteoporosis Int，2012；24(1)：23-57.

2Eun H，Keun H,Kim SW,etal.High serum osteopontin levels are associated with low bone mineral density in postmenopausal women〔J〕.J Korean Med Sci，2013；28(10)：1496-9.

3Xu G，Nie H，Li N.Role of osteopontin in amplification and perpetuation of rheumatoid synovitis〔J〕.J Clin Invest,2005;115(4)：1060-7.

4Yumoto K，Ishijima M，Ritting SR，etal.Osteopontin deficiency protects joints against destruction in anti-type Ⅱ collagen antibody-induced arthritis in mice〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2002;99(7)：4556-61.

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6Mi T，Nie B，Zhang C.The elevated expression of osteopontin and NF-kB in human aortic aneurysms and its implication〔J〕.J Huazhong Univ Sci Technol Med Sci,2011；31(5)：602-7.

7童雪影,武亞麗,周洪蓮，等.大鼠腹主動(dòng)脈瘤發(fā)生與骨橋蛋白及核因子-kB表達(dá)的關(guān)系〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2012;29(11)：2150-2.

8Huang W，Carlsen B，Miller TA，etal.Osteopontin is a negative regulator of proliferation and differentiation MC3T32EI preosteoblastic cells〔J〕.Bone，2004;34(5)：799-808.

9Jono S，Peinado C，Giachelli CM,etal.Phosphorylation of osteopntin is required for inhibition of vascular smooth muscle cell calcification〔J〕.Biol Chem，2000;275(4)：20197-203.

10Christensen B，Nielsen MS，Sorensen ES,etal.Posttranslationally modified residues of native human osteopontin are located in clusters：identification of 36 phosphorylation and five glycosylation sites and their biochemical implication〔J〕.Biochem J，2005;390：285-92.

〔2016-04-23修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

R541.4

A

1005-9202(2017)19-4790-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.044

湖北省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃資助項(xiàng)目(D20152101)

潘慶敏(1963-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事心血管疾病研究。

童雪影(1985-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事老年心血管病研究。