五參口服液聯合電針內關穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細胞凋亡的影響

肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430014)

五參口服液聯合電針內關穴對糖尿病心肌病大鼠心率變異性及心肌細胞凋亡的影響

肖鳳英 崔金濤 張壓西 賀 勁 李 敏 張 軍

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430014)

目的觀察五參口服液聯合電針內關穴對糖尿病心肌病(DCM)大鼠心率變異性(HRV)及心肌細胞凋亡的影響。方法50只雄性Wistar大鼠隨機分為正常組、模型組、五參組、內關組和五參+內關組各10只，采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立DCM大鼠模型，治療8 w后，對HRV進行對照分析，處死大鼠，迅速取出心肌，心肌細胞凋亡指數檢測采用TUNEL法測定。結果與正常組比較，模型組各HRV時域指標〔24 h平均值的標準差(SDNN)、RR間期平均值標準差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個數點總竇性心搏個數的百分比(PNN50)〕及各HRV頻域指標〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕均明顯降低(P<0.05)，心肌細胞凋亡指數明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，五參組時域指標RMSDNN及頻域指標HF顯著升高(P<0.05)，內關組及五參+內關組各指標均顯著升高(P<0.05)，內關組及五參+內關組心肌細胞凋亡指數明顯降低(P<0.01)；與內關組比較，五參+內關組各HRV指標顯著升高(P<0.05)。結論五參口服液聯合電針內關穴治療DCM大鼠能明顯提高大鼠HRV各指標，且能顯著降低心肌細胞凋亡指數，心肌細胞凋亡的改善可能是提高HRV的機制之一。

糖尿病心肌病；五參口服液；內關穴；心率變異性；心肌細胞凋亡

糖尿病性心肌病(DCM)是引起糖尿病患者最終死亡的常見慢性心血管并發癥，臨床上缺乏理想有效的治療手段。研究表明〔1〕，DCM心臟自主神經功能紊亂(CAN)，在所有反映交感活性的心率變異性(HRV)參數變化上具有一致性，表現為時域指標及頻域指標降低。由此，本文旨在通過觀察第五批名老中醫崔金濤教授經驗方五參口服液聯合電針內關穴治療DCM對大鼠HRV及心肌細胞凋亡的影響，并對其相關機制進行探討。

1 材料與方法

1.1實驗動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠70只，體質量(160～180)g，由華中科技大學實驗動物中心提供(湖北省實驗動物管理委員會，合格證001號，環境設施合格證028號)。實驗動物分組飼養，飼以標準顆粒飼料。分籠喂養，自由飲食攝水，自然晝夜光線照明，實驗室內通風良好，溫度保持在16℃～20℃，相對濕度30%～80%。 試驗前用快速血糖儀檢查血糖，剔除血糖異常大鼠。

1.2試劑 鏈脲佐菌素(STZ，Sigma公司,批號S01301178);血糖試紙(美國雅培公司,批號0701051),細胞凋亡檢測(TUNEL)試劑盒。

1.3模型制備 大鼠適應性喂養1 w后，隨機取大鼠50只，參考文獻〔2〕方法建立DCM大鼠模型。造模成功后隨機分為模型組，五參組、內關組和五參+內關組，每組各10只，另10只為正常組。

1.4治療方法 內關組及五參+內關組參照中國針灸學會實驗針灸會制定的《動物針灸穴位圖譜》〔3〕，P6，H7和L14對應選取內關穴施予針刺。內關位于大鼠腕橫紋正中上5 mm處，針剌深度約5 mm。造模同時分別針刺大鼠雙側內關穴，大鼠穿自制鼠衣，用0.30 mm×15 mm華佗牌毫針直刺穿皮達筋間,捻轉1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續波,頻率2 Hz,強度1 mA,通電治療20 min,每日1次,共8 w。其他組行內關穴假針刺，穴位的定位和消毒法同上,使用英國DONGBANGAcuPrime針灸器械有限公司的假針灸針(嚴格按照說明書進行操作),不銹鋼針同上,并采用以下刺激方法:針頭露出套管1 min,輕觸皮膚,開始記錄時間。留針時,壓下針柄使針頭露出1 mm,輕觸皮膚,捻轉1 min后,接HANS-200型電針治療儀,左右各接一電極,連續波,頻率2 Hz,強度1 mA,通電治療20 min，每日1次,共8 w。五參組及五參+內關組給予大鼠1支五參口服液(由西洋參、北沙參、南沙參、三七、丹參、降香、苦參等中藥組成)灌胃，每日1次，其他組給予等量的生理鹽水灌胃，共8 w。

1.5HRV指標 治療8 w后，出針1 min后，各組進行HRV取樣,用MODEL No.7303050心電裝置,通過RM-86型八導生理記錄儀及SKY-A4 生物信號處理系統,記錄停針即刻的心電圖波形。并輸入功能學科實驗軟件包,分析計算各組大鼠停針即刻各HRV時域指標〔24 h平均值的標準差(SDNN)、RR間期平均值標準差(SDANN)、HRVindex、相鄰RR間期差值的均方根(RMSDNN)、相鄰R-R間期>50 ms的個數占總竇性心搏個數的百分比(PNN50)〕及頻域指標〔總功率、極低頻(VLF)、低頻(LF)、高頻(HF)〕的情況。采樣過程中避免干擾,將大鼠用25%氨基甲酸乙酯(4 ml/kg)麻醉,固定四肢,采集V1心電信號,避免各種影響自主神經系統(ANS)活動的因素。

1.6心肌細胞凋亡指數 隨后處死大鼠，迅速取出心肌，心肌細胞凋亡指數檢測采用TUNEL法測定。

1.7統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件進行單因素方差分析。

2 結 果

2.1各組HRV時域指標的比較 與正常組比較，模型組SDNN、SDANN、HRVindex、RMSDNN、PNN50均明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，五參組RMSDNN有統計學差異(P<0.05)，內關組及五參+內關組各HRV時域指標顯著升高(P<0.05或P<0.01)；與內關組比，五參+內關組各HRV時域指標顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 各組治療后HRV時域指標的比較

與正常組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05，3)P<0.01；與內關組比較:4)P<0.05；下表同

2.2各組HRV頻域指標的比較 與正常組比較，模型組各HRV頻域指標(總功率、VLF、LF、HF)均明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，五參組HF指標顯著升高(P<0.05)，內關組及五參+內關組各頻域指標均顯著升高(P<0.05或P<0.01)；與內關組比較，五參+內關組各HRV頻域指標顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 各組治療后HRV頻域指標的比較

2.3各組心肌凋亡指數的比較 與正常組(0.15±0.02)比較，模型組心肌細胞凋亡指數(0.53±0.04)明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，內關組(0.34±0.21)及五參+內關組心肌凋亡指數(0.30±0.17)顯著降低(P<0.01)；五參組為0.49±0.36。

3 討 論

心臟自主神經病變是引起DCM患者發生各種心律失常的重要原因，而HRV是國際上公認的反映心臟自主神經功能狀態量化指標〔4〕。在糖尿病及其并發癥的發生和發展過程中,細胞凋亡起著重要作用〔5〕。心肌細胞的損傷致使心臟傳入與傳出神經纖維受損，致使心臟HRV降低。本實驗結果發現，五參口服液聯合電針內關穴治療DCM，明顯改善了心肌缺血狀態，增強了心肌細胞營養，改善了心肌細胞凋亡，由此修復了心臟傳入及傳出神經纖維，提高HRV指標，獲得較好的臨床療效。

DCM病程長，后期常表現為氣陰兩虛證，經典方五參口服液由西洋參、北沙參、南沙參、丹參、苦參、三七、降香等中藥組成，緊扣其病因病機辨證論治，西洋參補氣滋陰清熱，為治療氣陰兩虛之要藥，藥理作用能抗心律失常、增加胰島素敏感性及降血糖〔6〕。南北沙參養陰生津，北沙參水浸液在低濃度時，能夠加強離體蟾蜍心臟的收縮，濃度高時，則抑制直至心室停博〔7〕。現代藥理學研究表明，丹參改善射血分數、減少細胞凋亡方面的作用明顯。苦參清心瀉火，滌痰化濁，苦參中主要成分苦參堿及金雀花堿，具有“奎尼丁樣效應”能降低心肌收縮力、延緩房性傳導及降低自律性等作用，在實驗篩選抗心律失常植物藥過程中，苦參作為心悸的專用藥之一應用于臨床〔8〕，三七具有抗血小板集聚和溶栓的作用，能夠減慢心率，對各種原因引起的心率失常都有保護作用〔7〕;降香所含黃檀素有微弱的抗凝作用，能明顯增強冠狀動脈血流量，減慢心率，輕度增加心跳振幅，而不會引起心律不齊〔9〕;另外，DCM屬于祖國醫學消渴心病范疇，歸為手厥陰心包經。手厥陰心包經與心臟在生理病理上有著密切的聯系。歷代醫家臨床實踐表明，當心臟發生疾病時，多取手厥陰心包經的穴位進行治療。葉向榮等〔10〕指出，電針內關穴可以促進缺血性心肌恢復。

1劉化芋，胡志耕.氣陰兩虛型糖尿病心率變異性及 SCL-90的觀察分析〔J〕 中西醫結合心腦血管病雜志，2006;4(12)：1040-2.

2張春虹,臧偉進,徐 靜.建立糖尿病心肌病動物模型方法的實驗研究〔J〕.衛生研究，2006;35(6)：706-8.

3華興邦.大鼠穴位圖譜的研制〔J〕.實驗動物與動物實驗,1991;(1):1-5.

4中華心血管病雜志編委會心率變異性對策專題組.心率變異性檢測臨床應用的建議〔J〕.中華心血管病雜志，1998;26(4)：252-5.

5陳 青.糖尿病及其慢性并發癥與細胞凋亡〔J〕.國外醫學·內分泌學分冊,2001;21(5):236-9.

6張春鳳，于 敏，歐陽雪琴，等.西洋參及其提取物降血糖作用的實驗研究〔J〕.中國中醫藥科技，2005;12(6)：353-4.

7崔金濤.三七對心血管疾病的防治作用〔J〕.中國醫院藥學雜志，1999;19(1)：36-8.

8高學敏，顏正華，張延模，等.中藥學〔M〕.北京:中國中醫藥出版社，2002：35-6.

9江蘇省新醫學院.中國中藥大辭典〔M〕.上海:上海人民出版社，1977:1560-5.

10葉向榮，張素芬.電針“內關”、“足三里”對家兔紅細胞膜流動性的影響〔J〕.針刺研究，1992;17(1):42-4.

〔2016-03-30修回〕

(編輯 苑云杰/王一涵)

R587.1

A

1005-9202(2017)19-4737-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.020

武漢市衛生局項目(No.WZ11C06)

肖鳳英(1974-)，女，副主任醫師，在讀博士，主要從事2型糖尿病并心血管病變研究。