基于茶樹品種酶活性的鮮葉混合加工工夫紅茶品質比較

黃懷生，粟本文*，鐘興剛，舒 琿

（1.湖南省農業科學院 茶葉研究所，湖南 長沙 410125；2.湖南省沅陵碣灘茶業有限公司，湖南 沅陵 419600）

基于茶樹品種酶活性的鮮葉混合加工工夫紅茶品質比較

黃懷生1，粟本文1*，鐘興剛1，舒 琿2

（1.湖南省農業科學院 茶葉研究所，湖南 長沙 410125；2.湖南省沅陵碣灘茶業有限公司，湖南 沅陵 419600）

為了提升湖南中小種工夫紅茶品質，在測定湖南省茶葉研究所選育的茶樹品種多酚氧化酶（PPO）和過氧化物酶（POD）活性的基礎上，采用傳統工藝，以茶樹良種櫧葉齊和碧香早鮮葉為原料進行混合加工試驗，對樣品感官審評和生化檢測。結果表明：不同茶樹品種多酚氧化酶和過氧化物酶活性差異大，其加工的工夫紅茶品質差異明顯；采取不同品種鮮葉混合加工，能有效提高中小葉種工夫紅茶的品質。

工夫紅茶；品質成分；酶活性；中小葉種；加工

中小葉種工夫紅茶原料細嫩，制工精細，外形條索緊細、勻齊，色澤烏潤（金毫顯露），香氣濃郁，滋味醇和而甘濃，湯色、葉底紅勻明亮，具有形質兼優的品質特征[1]。中小葉種工夫紅茶由于其自身的外形特色及獨特飲用風味，受到廣大消費者的喜愛，消費市場不斷擴大。目前，除了久負盛名的“祁紅”和“正山小種”一直保持熱銷外，福建的三大傳統工夫紅茶也受到了市場的高度認同，創造出了良好經濟和社會效益，中小葉種工夫紅茶的研發已成為茶葉產業發展的新的熱點。

湖南地處大葉種向中、小葉種的過渡地帶，湖南工夫紅茶的生產歷史悠久，有較高的知名度。其中“湖紅工夫”主要產于湖南的安化、桃源、漣源、邵陽、平江、瀏陽、長沙等縣市；“湘紅工夫”主要產于湖南湘西的石門、慈利、桑植、大庸等縣市，歸入“宜紅工夫”范疇。湖南工夫紅茶品質特征與祁紅和正山小種有明顯區別，除去品種、地理環境、當地氣候外，加工技術也有較大的差異。湖南有著豐富的品種資源，不同品種其特性差異明顯，鮮葉中多酚類含量、酶活性等亦不同。本研究在探討湖南代表性茶樹品種多酚氧化酶（PPO）和過氧化物酶（POD）活性的基礎上，選用櫧葉齊和碧香早兩個不同酶活性品種的鮮葉，采取傳統工藝進行混合加工試驗，旨在提升中小葉種工夫紅茶品質。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

湖南省茶葉研究所高橋試驗基地種植的湘波綠2號、桃源大葉、碧香早、江華苦茶、尖波黃13號、櫧葉齊、黃金茶1號等茶樹良種，采摘春季鮮葉一芽一葉，其中取鮮葉100 g液氮固定，供酶活測定。

1.2 主要儀器與試劑

1.2.1 主要儀器與設備

島津HPLC-10A，721分光光度儀，分析天平，HH-2數顯恒溫水浴鍋，6CH-941型碧螺春烘干機（五斗），6CR-30型揉捻機，6CJK30型解塊機，S809茶葉烘焙機。

1.2.2 主要試劑

酒石酸亞鐵（分析純）、甲醇（色譜純）、冰醋酸（分析純）、水合茚三酮（分析純）、N,N-二甲基甲酰胺（色譜純）。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品制作

稱取鮮葉一芽一葉4 kg，置于竹篾席薄攤萎凋，萎凋適度（含水量60%）后揉捻90 min（無壓10 min、輕壓45 min、重壓30 min、松壓5 min），揉捻后下機解塊，置篾盤中濕布覆蓋發酵6 h（保溫、保濕），五斗烘干機120℃烘至7～8成干，攤涼30 min，采用五斗烘干機100℃整形提毫5 min左右，最后提香機（90℃）足干。

1.3.2 感官審評

參考GB/T 23776-2009規定進行。

1.3.3 樣品檢測

茶多酚測定：參照酒石酸亞鐵分光光度法（GB/T 8313-2002）；游離氨基酸測定：參照GB/T 8314茚三酮顯色法；咖啡堿測定：參照GB/T 8312紫外分光光度法；水浸出物測定：參照GB/T 8305規定方法。

酶活性測定：多酚氧化酶（PPO）活性采用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH5.6）勻漿浸提法和硫酸銨沉淀法，從茶鮮葉中提取多酚氧化酶，并通過分光光度法測定酶活[2]。過氧化物酶（POD）活性采用愈創木酚法[3]。

兒茶素及組分測定：參照王增盛等[4]的方法，采用welchrom C18柱（4.6×200 mm，5 μm），流動相：水相A：去離子水；有機相B：N，N-二甲基甲酰胺/甲醇/乙酸=40∶2∶1.5；梯度洗脫，流動相B在13 min內由14 %線性梯度變化到24 %，22 min線性梯度變化到34%，30 min回到初始狀態，平衡5 min，流速為1.0 mL/min，柱溫40 ℃；檢測波長：278 nm；進樣量：10 μL。試驗重復三次（n=3）。

茶黃素及組分的測定：王坤波等[5]的方法，采用ODSC18柱（4.6×150 mm，5 μm），流動相：水相A：2%醋酸，有機相B：乙睛-乙酸乙酯（體積比21∶3），梯度洗脫，流動相B在30 min內從18%線性梯度變化到30 %，流速0.9 mL/min，柱溫40℃，檢測波長280 nm，進樣量10 μL，試驗重復三次（n=3）。

茶色素測定：參照《茶葉品質理化分析》分光光度法；可溶性糖測定：蒽酮比色法。

2 結果與分析

2.1 不同茶樹品種PPO、POD酶活性差異

工夫紅茶的加工關鍵工序是發酵，發酵主要是以PPO、POD酶催化的多酚類氧化還原反應，因此，PPO、POD酶對工夫紅茶品質形成至關重要。試驗結果表明，7個茶樹品種酶活性差異較大，PPO活性最大的是櫧葉齊，高達3.06 △OD/(g·min)；最低的為桃源大葉，僅1.6 △OD/(g·min)，兩者相差1.9倍。POD活性以尖波黃13號表現最為突出，達32.85 △OD/(g·min)，活性最低的是桃源大葉，兩者相差近4倍。可見，茶樹品種間PPO和POD酶活性差異性明顯（表1）。

2.2 不同品種工夫紅茶品質比較

表2結果表明，外形上，除江華苦茶（完全不顯金毫）、桃源大葉（條形欠緊、金毫較少）外，其它幾個品種外形比較接近，基本能達到高檔工夫紅茶的外形品質要求。內質上，黃金茶1號的香氣和滋味均表現突出，綜合品質最優 ；櫧葉齊、碧香早、尖波黃13號綜合品質較好，其它均表現一般。結合酶活性來看，多酚氧化酶活性高的櫧葉齊品質表現優于其他，而多酚氧化酶活性較低的桃源大葉品質不如其他品種。過氧化物酶活性高的尖波黃13號也有較好的紅茶品質。

表1 不同茶樹品種PPO、POD酶活性比較Table 1 the comparison of PPO and POD enzyme activity of different tea cultivars

表2 不同茶樹品種工夫紅茶感官品質Table 2 The sensory quality of Gongfu black tea made by different tea cultivars

2.3 鮮葉混合加工對紅茶品質的影響

試驗采用PPO活性較高、POD活性中等的櫧葉齊和PPO活性中等、POD活性較高的碧香早鮮葉以1∶1混合加工，結果（表3）表明，混合鮮葉樣品外形金毫明顯較櫧葉齊多，金毫滿披；湯色僅較櫧葉齊濃度稍淡，比碧香早湯色明亮。綜合品質明顯較碧香早好。生化成分測定結果（表4）表明，混合鮮葉樣品水浸出物、茶多酚、咖啡堿含量介于兩者之間，氨基酸低于碧香早（3.64%），三大色素含量除茶黃素低于櫧葉齊外，茶紅素和茶褐素均為最高。但與櫧葉齊和碧香早的平均值有差異，水浸出物比平均值低0.6%，茶多酚比平均值高1.76%，氨基酸低3.48%，咖啡堿低0.27%，茶黃素高8.89%，茶紅素高5.23%，茶褐素高3.89%。

表3 櫧葉齊和碧香早鮮葉混合加工試驗Table 3 The processing experiment of mixed fresh tea leaves of Zhuyeqi and Bixiangzao

表4 混合鮮葉工夫紅茶生化品質測定結果 (%)Table 4 The testing result of the chemical quality content of Gongfu black teamade by mixed fresh tea leaves (%)

試驗進一步研究表明，采用碧香早、櫧葉齊一芽一葉鮮葉分別按7/3、5/5、3/7等3種比例混合加工，感官品質以7/3（碧香早/櫧葉齊，下同）處理外形金毫滿披，滋味較濃；5/5處理富金毫，滋味甜醇，甜香高；3/7處理金毫顯露，湯色紅濃，甜香高，滋味濃醇。總體表現以3/7處理感官品質最好。生化檢測（表6）表明，7/3處理茶樣茶多酚含量（14.67%）和茶褐素含量高（9.24%）；5/5處理水浸出物較低（31.48%），茶多酚最低（12.77%），茶黃素和茶紅素也較低，分別為0.471%、4.737%；3/7處理茶黃素、茶紅素含量最高，分別為0.543%和5.463%，但茶黃素最低（7.869%）。

表5 不同比例混合鮮葉樣品感官品質Table 5 The sensory quality of the tea samples made by different ratio of mixed fresh tea leaves

表6 不同混合比例鮮葉工夫紅茶生化品質測定結果(%)Table 6 The testing result of the chemical quality content of Gongfu black tea made by different ratio of mixed fresh tea leaves (%)

3 討論

紅茶屬全發酵茶，其品質特征的形成取決于鮮葉原料所含化合物的種類，其中對風味影響最重要的是茶多酚和多酚氧化酶。在工夫紅茶加工中，必須充分利用酶活性。不同茶樹品種，其多酚氧化酶活性差異明顯，試驗中櫧葉齊品種的PPO酶活性最高（3.06 △OD/g·min），但其POD酶活性較低（15.06 △OD/g·min），其所加工的工夫紅茶品質較好，但櫧葉齊茸毛較少，在外形上金毫不多。碧香早PPO活性較低（2.32 △OD/g·min），但POD活性較高（24.80△OD/g·min），且其鮮葉芽頭茸毛多，加工的紅茶外形優美，金毫滿披，但湯色尚紅濃，滋味濃度稍欠，總體品質不如櫧葉齊。為了改善不同品種加工工夫紅茶的品質，從酶活性和品質兩方面考慮，采用酶活性互補、滋味濃淡相宜的品種進行混合加工，試驗表明能較好地彌補兩個品種加工的工夫紅茶的短板，達到提高工夫紅茶品質的效果。從生化檢測結果也可以看出，混合后POD酶活性提高，加快了茶紅素的形成，與李大祥[6]、趙和濤[7]等的研究結果基本一致。

為進一步探索品質最優化，試驗更進一步探討了兩品種鮮葉的不同混合比例加工，從樣茶感官審評結果來看，以3/7（碧香早/櫧葉齊）混合處理的品質最佳，以高PPO酶活性的品種為主，配比少量的高POD酶活性品種，能夠提高茶湯的濃度。而以高POD酶活性的品種為主，配比少量的高PPO酶活性品種（如7/3），可以增加茶湯濃度，但茶湯的亮度上有所降低。生化檢測結果也證明了這一點，3/7混合處理茶黃素、茶紅素增加，但茶褐素較低；而7/3處理茶黃素、茶紅素處較高水平，但茶褐素比3/7比例高17.42%，茶湯湯色稍暗。

綜上所述，采用不同茶樹品種鮮葉混合加工工夫紅茶，能有效提高工夫紅茶的品質。本試驗僅僅是一個新的探索，在品種選擇，搭配方式（倆倆搭配、多品種搭配）以及搭配比例方面尚需更系統的研究，從而為充分發揮茶樹品種特性、加工出優質的中小葉種工夫紅茶提供技術支撐。

[1]鞏志.中國紅茶[M]. 杭州：浙江攝影出版社, 2005.

[2]滑金杰,袁海波,王偉偉,等. 萎凋溫度對鮮葉主要生化成分和酶活動態變化規律的影響[J].茶葉科學,2015,35(1)：73-81.

[3]宛曉春. 茶葉生物化學[M]. 北京：中國農業出版社, 2003.

[4]王增盛,童小麟,朱尚同.茶兒茶素的高效液相色譜測定方法 [J].茶葉科學 ,1991(11)：93-99.

[5]王坤波,劉仲華,黃建安,等.高效液相色譜法測定紅茶中的茶黃素[J].色譜,2004,22(2)：151-153.

[6]李大祥, 宛曉香, 楊昌軍.茶兒茶素氧化機理[J].天然產物研究與開發 ,2006,18(1)：171-181.

[7]趙和濤.茶多酚氧化酶研究及應用[J].茶葉科學技術,1996(1)： 16-18.

Comparison of the Quality of Gongfu Black Tea Processed by Mixed Tea Leaves of Different Tea cultivars with Different Enzyme Activity

HUANG Huai-sheng1，SU Ben-wen1*，ZHONG Xing-gang1，SHU Hui2

（1 Tea Research Institute of Hunan Academy of Agricultural Sciences，Changsha 410125，China;2 Hunan Yuanling Jietan Tea Industry co., LTD，Yuanling 419600，China）

The selected varieties of fresh tea leaves were selected from Hunan Tea Research Institute, and the samples were produced by traditional techniques of black tea processing. The characteristics and processing techniques of small and medium leaf varieties were studied. The samples were examined by sensory examination and the main quality components were determined. The results showed that the difference of the time quality of different tea varieties Black Tea processing,especially the polyphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POD) activity differences; based on the variety characteristics,using new technology of mixed processing varieties, can effectively improve the small leaf's Black Tea quality.

Gongfu black tea, Quality components, Enzyme activity, Medium and small leaf, Processing

S571.1

A

1009-525X（2017）03-32-35

2017-05-17

2017-07-25

國家自然科學基金（31570693）

黃懷生（1976-），男，湖南邵陽人，副研究員，主要從事茶葉加工與利用研究。

*通訊作者：粟本文（1963-），男，湖南邵陽人，研究員，主要從事茶葉加工利用與品質化學研究。E-mail： Suyi1121@126.com