體外培養大鼠星形膠質細胞水通道蛋白4的表達①

徐立新，董麗萍，師忠芳，閆旭，楊少華，袁芳

體外培養大鼠星形膠質細胞水通道蛋白4的表達①

徐立新1,2，董麗萍1,2，師忠芳1,2，閆旭1,2，楊少華3，袁芳1,2

目的 研究水通道蛋白4(AQP4)在體外培養大鼠星形膠質細胞中的表達規律。方法 取新生1 d Wistar大鼠大腦皮層行星形膠質細胞原代培養，分別于原代培養3 d、5 d、7 d、9 d及傳代培養9 d行膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色；實時熒光定量聚合酶鏈反應及AQP4免疫熒光染色檢測AQP4 mRNA及蛋白的表達。結果 原代及傳代培養不同時間點95%以上細胞GFAP免疫熒光染色陽性，且GFAP表達量逐漸增加。原代培養3 d有AQP4 mRNA表達，3 d和5 d AQP4 mRNA表達水平無顯著性差異(P＞0.05)，7 d AQP4 mRNA表達升高(P＜0.05)，9 d持續升高(P＜0.05)；傳代培養9 d與原代培養9 d AQP4 mRNA表達無顯著性差異(P＞0.05)。AQP4蛋白表達與AQP4 mRNA表達一致。結論 大鼠星形膠質細胞原代培養3 d即有AQP4表達，之后逐漸增加，9 d左右表達漸趨穩定。

水通道蛋白4；星形膠質細胞；細胞培養；大鼠

水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是近年來發現的位于細胞膜上與水的通透性相關的轉運蛋白，其中AQP4是腦內最重要的AQPs，在腦組織中分布最廣，含量最多，主要參與鉀離子緩沖、體液自身調節、中樞滲透壓調節等[1-2]，特別與癲癇、腦缺血、腦外傷、腦腫瘤等所致的腦水腫密切相關[3-4]。研究發現，AQP4高表達于星形膠質細胞和室管膜細胞，尤其是與毛細血管和軟腦膜接觸的星形膠質細胞膜處[5]。Yamamoto等[6]利用體外培養神經細胞研究發現，AQP4只在星形膠質細胞表達。本研究觀察體外培養條件下大鼠星形膠質細胞AQP4表達的時程規律，為進一步研究提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑與儀器