沉默ski基因?qū)Υ笫笮切文z質(zhì)細(xì)胞活化增殖及Cyclin D1表達(dá)的影響①

趙鑫，郭永強，寇江力，丁寧，周開升，南偉，張海鴻

沉默ski基因?qū)Υ笫笮切文z質(zhì)細(xì)胞活化增殖及Cyclin D1表達(dá)的影響①

趙鑫1,2，郭永強1,2，寇江力1,2，丁寧1,2，周開升1,2，南偉1,2，張海鴻1

目的 研究ski基因?qū)Υ笫笮切文z質(zhì)細(xì)胞增殖的影響及其分子機制。方法 分離3日齡Sprague-Dawley大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞，體外培養(yǎng)。合成ski和陰性對照小干擾片段。設(shè)置ski-siRNA組、陰性對照組和空白對照組，采用脂質(zhì)體法將特異性針對ski基因的siRNA和陰性對照siRNA轉(zhuǎn)入ski-siRNA組、陰性對照組星形膠質(zhì)細(xì)胞中。Western blotting分析ski、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和Cyclin D1蛋白表達(dá)；CCK8法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活力；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。結(jié)果 ski-siRNA組星形膠質(zhì)細(xì)胞ski蛋白表達(dá)明顯降低(F=38.611,P＜0.01)，GFAP(F=7.547,P＜0.05)和Cyclin D1蛋白(F=3.901,P＜0.05)表達(dá)降低；培養(yǎng)12 h后，ski-siRNA組增殖活力明顯降低(F＞30.507,P＜0.01)，G1期細(xì)胞比例明顯增加，S期明顯減少(F＞48.425,P＜0.01)。結(jié)論 沉默ski基因可能通過下調(diào)Cyclin D1表達(dá)，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。

ski；RNA干擾；增殖；星形膠質(zhì)細(xì)胞；大鼠

ski基因是Stavnezer等[1]于1986年首次在感染病毒Bratislava77的雞胚細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。ski作為細(xì)胞內(nèi)的一個原癌基因，在不同物種間和組織內(nèi)分布極為廣泛，參與并調(diào)節(jié)機體多種生理和病理過程[2-4]。本課題組已明確ski在正常脊髓組織和星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)很低，而在脊髓損傷和活化星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)逐漸增高，推測ski可能作為新型信號分子影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖特性，進(jìn)而調(diào)節(jié)致密膠質(zhì)瘢痕的生成[5-7]。本研究采用RNA干擾技術(shù)，觀察ski對大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及其相關(guān)蛋白的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和主要試劑

3日齡Sprague-Dawley大鼠，購于甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。……