四川部分地區禽源空腸彎曲菌ERIC-PCR分型及毒力相關基因分析

王 寒，張 博，莫亞霞，羅正中，姜思訊，孫成亮，曹隨忠，姚學萍

(四川農業大學 動物醫學院，動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130)

四川部分地區禽源空腸彎曲菌ERIC-PCR分型及毒力相關基因分析

王 寒，張 博，莫亞霞，羅正中，姜思訊，孫成亮，曹隨忠，姚學萍*

(四川農業大學 動物醫學院，動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130)

為了解四川地區禽源空腸彎曲菌(Campylobacterjejuni)的遺傳多樣性和毒力相關基因的攜帶情況，對從四川成都、雅安及眉山市采集的雞源、鴨源和鵪鶉源的盲腸及肛拭子樣品進行C.jejuni的分離鑒定、ERIC-PCR分型和17種毒力相關基因的檢測分析。結果顯示，總體分離率為10.23%(48/469)，其中雞源分離率顯著高于鵪鶉源(P<0.05)。ERIC-PCR聚類分析顯示48株C.jejuni可分為6簇、16類共31種基因型，不同場分離株多在某一類或某一簇內聚集分布，而部分菌株在不同地區、不同場之間呈交叉分布。毒力基因檢測結果顯示，15種毒力相關基因的攜帶率在50%以上，其中鵪鶉源分離株的毒力基因攜帶率高于其他動物的攜帶率。由此表明四川地區禽源C.jejuni毒力基因的攜帶率高并且具有較高的遺傳多樣性。

家禽；空腸彎曲菌；ERIC-PCR分型；毒力相關基因

空腸彎曲菌(Campylobacterjejuni)是一種重要的人獸共患致病菌，主要引起人的細菌性腹瀉，嚴重的可引發格林巴利綜合征等[1]。禽類是帶菌率最高的動物，有研究發現C.jejuni在肉雞盲腸的定殖高達109cfu·g-1，在其屠宰加工過程中腸內容物以及排泄物極易造成禽類食品的污染，人類食用被污染的禽類食品是感染C.jejuni的最主要來源[2]。近年來，人C.jejuni的感染率在世界范圍內呈普遍上升趨勢，國外調查發現，零售雞肉C.jejuni的污染率在90%～100%，加強C.jejuni的監測顯得尤為必要[3-4]。禽類腸道C.jejuni的攜帶情況高低不一，研究發現肉雞群C.jejuni的流行率在3%～90%，這種差異與肉雞群的地理分布密切相關，屠宰場陽性雞群C.jejuni的分離率可以高達80%[5-7]。因此調查不同地區禽類C.jejuni的攜帶情況對于防控人C.jejuni感染具有重要意義。

ERIC-PCR(enterrobacterial repetitive intergernic consensus PCR)作為一種有效的分子分型方法，已經成功運用于多種病原微生物的分子流行病學調查[8-10]。該技術以腸桿菌科基因間重復序列為引物進行PCR，能擴增出多態性的DNA圖譜，能夠同時平行分析不同屬別、種別乃至菌株間的差異，結合軟件的指紋分析技術，可以動態監測細菌的流行病學相關特征，同時能夠反映出不同菌株的基因型、系統進化和分類學關系[11]。

迄今為止，人們對C.jejuni感染的發病機制尚未完全了解，其致病機制包括黏附、趨化、定殖、侵襲、產生毒素以及致病相關的分泌蛋白等，有研究證實毒力相關基因是其主要的致病因素。翟海華等[12]、薛峰等[13]、鄭揚云等[14]分別調查過膠東半島、華東地區以及華南地區C.jejuni毒力相關基因的攜帶情況，但是尚未見四川地區C.jejuni毒力相關基因攜帶情況的有關調查。本研究對四川部分地區活禽市場及養殖場禽源C.jejuni進行分離鑒定，以便進一步了解四川地區禽源C.jejuni的分布，同時運用ERIC-PCR對分離菌株進行分型以及對毒力基因的攜帶情況進行調查，為分析菌株的分子流行病學特征及細菌的致病力提供一定的參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

采集四川省成都市(溫江、金堂)3家活禽市場和3家養雞場，雅安市1家養雞場和眉山市1家鵪鶉養殖場的雞、鵪鶉和鴨盲腸及肛拭子樣品共計469份。

1.1.2 培養基、試劑、抗生素及引物

腦心浸液肉湯、改良Skirrow氏瓊脂基礎、改良Skirrow瓊脂添加劑、氧化酶試劑、1%馬尿酸鈉、吲哚醋酸酯紙片均購自青島高科技工業園海博生物技術有限公司；哥倫比亞血瓊脂基礎購自OXOID公司；脫纖維綿羊血、小牛血清購自北京平睿生物科技有限公司；其他試劑均為國產分析純。

細菌基因組提取試劑盒、TaqDNA 聚合酶(5 U·μL-1)、10×PCR Buffer、dNTPs(2.5 mmol·L-1)、2×TaqPCR Master Mix均購自上海生工生物工程有限公司；DNA Marker 2000、DNA Marker 5000購自寶生物工程(大連)有限公司。

引物：多重PCR鑒定引物參照何蕊等[15]，用于ERIC-PCR分型引物參照Versalovic等[16]，毒力基因檢測引物參照翟海華等[12]、薛峰等[13]。以上引物均由北京六合華大基因科技有限公司合成。

1.2 細菌分離培養

樣本制成生理鹽水混懸液后用接種環直接沾取劃線接種在改良Skirrow血平板上，置于含10%氣體環境的二氧化碳培養箱中，42 ℃培養48 h后，挑取不溶血、灰色、扁平、濕潤、邊緣不整齊、沿劃線處生長，或是分散的單菌落呈灰色、凸起、沿線生長的可疑菌落轉接到哥倫比亞血平板上純化培養，42 ℃微需氧培養48 h后進行進一步鑒定。

1.3 細菌鑒定

1.3.1 多重PCR鑒定

選取彎曲菌屬16S rRNA基因、空腸彎曲菌mapA 基因和結腸彎曲菌ceuE 基因設計引物，引物序列見表1。PCR反應體系為25 μL，其中2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，模板DNA 2 μL，上、下游引物各0.25 μL，滅菌ddH2O補足體系。反應程序：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，59 ℃退火90 s，72 ℃延伸1 min，35個循環；最后72 ℃延伸10 min，在凝膠成像儀上觀察結果。

1.3.2 生化鑒定

參照國標GB/T4789—2014食品空腸彎曲菌的檢驗方法，對分離株進行生化鑒定。

1.4 模板制備

取經鑒定過的純培養菌落按市售用于細菌 DNA 提取試劑盒方法提取細菌的DNA，置于-20 ℃冰箱中備用。

1.5 空腸彎曲菌分離株的ERIC-PCR分型

1.5.1 ERIC-PCR反應條件

上游引物：5′-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3′；下游引物：5′-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3′。反應體系 25 μL，其中含DNA模板1 μL、10 μmol·L-1引物各2 μL、2.5 mmol·L-1dNTPs 2.5 μL、25 mmol·L-1MgCl23 μL、10 × PCR Buffer 2.5 μL、5 U·μL-1TaqDNA聚合酶0.3 μL。反應程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，35 ℃退火1 min，72 ℃延伸4 min，35個循環；最后72 ℃延伸10 min，擴增產物經20 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳檢測。隨機挑取14株空腸彎曲菌進行ERIC-PCR擴增，以驗證ERIC-PCR的分型能力。為進一步證實不同時間ERIC-PCR的可重復性，對隨機挑選的空腸彎曲菌在2周后進行重復性試驗。

表1彎曲菌PCR擴增基因及引物序列

Table1Gene amplification and primer sequences ofCampylobacterPCR

引物名稱Primername堿基序列(5'-3')Sequence(5'-3')片段長度Productsize/bp16SrRNA-FATCTAATGGCTTAACCATTA-AAC85716SrRNA-RGGACGGTAACTAGTTTAG-TATTmapA-FCTATTTTATTTTTGAGTGCTT-GTG589mapA-RGCTTTATTTGCCATTTGTTT-TATTAceuE-FATTTGAAAATTGCTCCAAC-TATG462ceuE-RTGATTTTATTATTTGTAG-CAGCG

1.5.2 ERIC-PCR指紋圖譜分析

以Gel-Pro-Analyzer4.0軟件對電泳條帶進行處理，制作二進制數列的矩陣圖。數據導入 NTSYS-pc 2.10 軟件，按非加權對數算術平均法(unweighted pair group method using averages algorithm，UPMGA)進行聚類分析，繪制遺傳關系圖。每一個分離株看作一個分類學單位(operational taxonomic unit, OTU)，并把相似性大于或等于 90%的菌株看作起源相同的分離株，即為同一基因型，并把相似性大于80%的菌株歸為一類，相鄰的類處于同一分支的歸為一簇[17-18]。

1.6 毒力基因檢測

合成17個毒力相關基因引物：flaA、cheY、cheW、cdtA、cdtC、racR、cadF、iamA、dnaJ、virBⅡ、grpE、peb1A、cdtB、pldA、neuB1、wlaN和ciaB。引物序列和反應條件見表2，在凝膠成像儀上觀察結果。反應體系為25 μL，其中模板DNA 1 μL，2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，上下游引物(10 μmol·L-1)各0.5 μL，滅菌ddH2O補足體系。

2 結果與分析

2.1 禽源空腸彎曲菌的分離結果

經細菌培養、多重PCR鑒定以及生化鑒定，從四川成都、雅安、眉山采集的469份禽盲腸及肛拭子樣品中共分離出48株空腸彎曲菌，總體分離率為10.23%，具體信息如表3。不同動物來源C.jejuni的分離率在統計學上有顯著差異(P<0.05)，其中雞源C.jejuni分離率顯著高于鵪鶉源(P<0.05)，鴨源和鵪鶉源、鴨源和雞源的分離率無顯著性差異(P>0.05)。 由表4可知，金堂養雞場的分離率高達22.50%，除此之外，來自溫江3個活禽市場C.jejuni的分離率均高于15%，其他場的分離率均在10%以下，養殖場來源的分離率普遍高于市場來源。

2.2 ERIC-PCR分型

2.2.1 ERIC-PCR擴增

對隨機挑選的14株C.jejuni分離株的DNA模板進行ERIC-PCR擴增、電泳，結果表明ERIC-PCR具有較強的分型能力(圖1)。為了進一步證實不同時間ERIC-PCR結果的可重復性，對上述空腸彎曲菌在2周后進行了重復試驗，結果一致。

表2毒力相關基因的PCR引物序列及反應程序

Table2PCR primer sequence and reaction procedure of virulence related genes

基因名稱Gene引物序列(5'→3')Primersequence產物長度Productlength/bpPCR反應程序PCRreactionprogramflaAAATAAAAATGCTGATAAAACAGGTGTACCGAACCAATGTCTGCTCTGATT85595℃5min,95℃30s,57℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincadFTTGAAGGTAATTTAGATATGCTAATACCTAAAGTTGAAAC39794℃5min,94℃30s,45℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minpeb1AGTCGACATGGTTTTTAGAAAATCCTCGAGTGGTTCAAAACTATCTGGC67595℃5min,95℃30s,55℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minracRGATGATCCTGACTTTGTCTCCTATTTTTACCC58494℃5min,94℃30s,45℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minpldAAGAAACCAACTATCAACCATCATCACCTAAATACGCTA29794℃5min,94℃30s,55℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincheYCCCTAACAAGACTTGGACACGATTACCGCTCTTCTACGATAAAG40795℃5min,95℃30s,56℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincheWGCAAACTCAGATGGCTGGTCGCATTTCCTCCAACTCCAG31295℃5min,95℃30s,56℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minciaBATTTGTTCCTTATGCGAGATAAAAACCACTCTGATTCATTG77395℃5min,95℃30s,53℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincdtACCTTGTGATGCAAGCAATCACACTCCATTTGCTTTCTG37095℃5min,95℃30s,56℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincdtBGAACAGCCACTCCAACAGGCCTCCGCTTGCTTGAGTT46095℃5min,95℃30s,56℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mincdtCCGATGAGTTAAAACAAAAAGATATTGGCATTATAGAAAATACAGTT18294℃5min,94℃30s,55℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10miniamAGCACAAAATATATCATTACATTCACGACTACTATGAGG52195℃5min,95℃30s,55℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minwlaNTTTCCATCATACTACCAACTTTCGCAAGCATTAAGTTCT29394℃5min,94℃30s,53℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mindnaJAAGGCTTTGGCTCATCCTTTTTGTTCATCGTT72095℃5min,95℃30s,46℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minvirBⅡTCTTGTGAGTTGCCTTACCCCTTTTCCTGCGTGTCCTGTGTTATTTACCC49495℃5min,95℃30s,53℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10minneuB1CAAAACTTATGGTAGATGCGCCTATACATGCAAGATTGTTT55994℃5min,94℃30s,51℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10mingrpECTGTTAATGTTGAATGCCAAGTGCTACACTAACTTTGGTTG26095℃5min,95℃30s,55℃30s,72℃1min,35cycles,72℃10min

表3不同動物C.jejuni的分離情況

Tabble3Isolation ofC.jejunifrom different animals

動物Animal樣品數Samplenumber分離菌株數Bacterianumber分離率Separationrate/%雞Chicken3093812.30鴨Duck12216.67鵪鶉Quail14885.41總計Total4694810.23

2.2.2 ERIC-PCR對不同地區及不同場來源空腸彎曲菌分型

運用ERIC-PCR對四川不同地區及不同場來源的48株C.jejuni進行分析，如圖2所示，共得到31種基因型(E1-E31)，菌株分布最多的基因型為E28， 共包含8株菌，分別為V9-V16，其中V9、V10、V11、V15與V16以及 V12、V13與V14的相似性均為100%，可以看作相同菌株。相似性在80%以上的菌株可以認為是同一來源菌株，48株菌可分為16類，相鄰的類別處于同一分支的聚為一簇，48株菌又可分為6簇(Ⅰ-Ⅵ)，相似性在66%～100%。表5為不同場空腸彎曲菌的類型分布表，由表5可以看出，不同場分離株多在某一類或某一簇內聚集分布，而部分菌株在不同地區、不同場之間呈交叉分布。

表4不同場C.jejuni的分離情況及菌株分布

Table4Isolation and distribution ofC.jejuniin different farms

采樣地點Samplingposition樣品數Samplenumber菌株數Bacterianumber分離率Separationrate/%菌株分布Straindistribution溫江活禽市場1Wenjianglivepoultrymarket139615.38V21、V22、V23、V24、V25、V26溫江活禽市場2Wenjianglivepoultrymarket240820.00C1、C2、C3、C4、V5、V6、V7、V8溫江活禽市場3Wenjianglivepoultrymarket350816.00V41、V42、V43、V44、V45、V46、V47、V48溫江養雞場1Wenjiangchickenfarm18744.60V9、V10、V11、V12溫江養雞場2Wenjiangchickenfarm23026.67V39、V40金堂養雞場Jintangchickenfarm40922.50V30、V31、V32、V33、V34、V35、V36、V37、V38雅安養雞場Yaanchickenfarm3538.57V27、V28、V29眉山鵪鶉養殖場Meishanquailfarm14885.41V13、V14、V15、V16、V17、V18、V19、V20

M， DNA分子質量標準；1～14， ERIC-PCR型別；15， 陰性對照M， DL5000 DNA Marker; 1-14， ERIC-PCR profiles; 15， negative control圖1 十四株C.jejuni ERIC-PCR電泳圖Fig.1 The subtype of ERIC-PCR for fourteen C. jejuni isolates

2.3 空腸彎曲菌的毒力相關基因分析

由圖3C.jejuni分離株毒力相關基因分析顯示，黏附相關基因flaA、peb1A、cadF的攜帶率分別為91.67%、81.25%、93.75%；定殖相關基因

cheY、racR的攜帶率均為95.83%，侵襲相關基因pldA、iamA、ciaB和cheW的攜帶率分別為89.58%、68.75%、87.50%和100%；毒素調節基因cdtA、cdtB、cdtC的攜帶率分別為79.17%、97.92%、83.33%；C.jejuni脂多糖外核心寡糖(LOS)合成相關基因wlaN、neuB1的攜帶率為52.08%和35.42%；熱休克相關蛋白基因grpE、dnaJ的攜帶率分別為95.83%、89.58%，質粒基因virBⅡ的攜帶率為2.08%。其中同時攜帶有13種毒力相關基因的菌株有35株，占總分離數的72.92%，同時攜帶有14種毒力相關基因的菌株有27株，占總分離數的56.25%，18株含有15種以上的毒力基因，占總數的37.50%，7株攜帶16種以上的毒力基因，占總數的14.58%。

不同來源菌株的毒力相關基因統計如表6，雞源C.jejuni攜帶所有的毒力相關基因，只有cheW的攜帶率為100%；鵪鶉源攜帶除毒力質粒基因virBⅡ之外的所有毒力相關基因，除cdtC、wlaN和neuB1外，其他13種毒力相關基因的攜帶率均為100%；鴨源不攜帶cdtC、neuB1、wlaN、iamA和virBⅡ基因，除cdtA基因攜帶率為50%外，其他毒力相關基因的攜帶率均為100%。

表5不同場空腸彎曲菌的類、型分布

Table5Classification and type distribution ofC.jejuniisolated from diffirent farms

地點Samplingposition菌株Strain類型Type類別Category溫江活禽市場1Wenjianglivepoultrymarket1V21,V22,V23,V24,V25,V26E3,E4,E5,E7,E8,E15L3,L4,L5,L7,L10溫江活禽市場2Wenjianglivepoultrymarket2C1,C2,C3,C4,V5,V6,V7,V8E1,E2,E25,E29,E30,E31L1,L2,L14,L16溫江活禽市場3Wenjianglivepoultrymarket3V41,V42,V43,V44,V45,V46,V47,V48E14,E15,E16,E18L10,L11溫江養雞場1Wenjiangchickenfarm1V9,V10,V11,V12E28L15溫江養雞場2Wenjiangchickenfarm2V39,V40E12,E20L8,L12金堂養雞場JintangchickenfarmV30,V31,V32,V33,V34,V35,V36,V37,V38E6,E9,E21,E22,E23,E24L7,L8,L9,L12,L13雅安養雞場YaanchickenfarmV27,V28,V29E15,E17,E19L10,L11,L12眉山鵪鶉養殖場MeishanquailfarmV13,V14,V15,V16,V17,V18,V19,V20E26,E27,E28L14,L15

圖2 空腸彎曲菌分離株ERIC-PCR分型結果Fig.2 Results of ERIC-PCR typing of C. jejuni isolates

圖3 空腸彎曲菌毒力相關基因檢測結果Fig.3 The result of virulence-related genes in C. jejuni isolates

3 討論

3.1 禽源C. jejuni的分離鑒定

C.jejuni能定殖于包括雞、鴨、鵪鶉在內的多種家禽，其中肉雞群C.jejuni的攜帶率很高。本研究中禽源C.jejuni的總體分離率為10.23%，其中活禽市場的分離率普遍高于養殖場來源的分離率，提示動物在運輸加工過程中可能存在交叉污染的風險。鴨源的分離率最高，可能與采集的鴨源樣本較少有關，雞源的分離率顯著高于鵪鶉來源，說明肉雞C.jejuni的帶菌率高。國內報道的禽類C.jejuni的流行在1.9%～40%[19-23]；國外報道肉雞群C.jejuni的流行在3%～90%。不同研究結果有差異，推測可能原因是由于不同地區、季節和不同生產類型都會影響禽類C.jejuni分布。

表6不同動物來源C.jejuni毒力相關基因的攜帶率

Table6The percentage of virulence-related genes inC.jejuniisolates from different animal sources

毒力相關因子Virulence-relatedgenes雞源Chicken/%鵪鶉源Quail/%鴨源Duck/%flaA89.47100100cheY94.74100100cheW100100100cdtA76.3210050cdtB97.37100100cdtC89.47750racR94.74100100cadF97.371000pldA86.84100100neuB139.47250wlaN52.63250iamA65.791000dnaJ86.84100100ciaB84.21100100virBⅡ2.6300grpE94.74100100peb1A78.95100100

3.2 空腸彎曲菌ERIC-PCR分型分析

由于受到環境、藥物及動物本身等因素的影響，C.jejuni的遺傳物質也發生了一定的變化，產生了新的基因特征。已經測序的空腸彎曲菌的全基因組測序結果表明，該菌的基因組呈高度的可塑性，提示該菌可能呈現較高的基因多樣性[24]。

本研究選擇一對廣泛使用的引物進行ERIC-PCR分型，48株不同來源的C.jejuni共得到了31個基因型。除溫江養雞場1以外，其他場均呈現豐富的基因多樣性。具有相同基因型的菌株多來源于同一個場，如來自溫江活禽市場3的分離株V41、V42、V46、V47、V48，同為E14型；來自眉山鵪鶉養殖場的V17、V19、V20同為E26型。而少數基因型在不同場均有分布，如溫江活禽市場1、活禽市場3和雅安養雞場同時有E15型分布。來自溫江養雞場1的V9、V10、V11、V12與來自眉山鵪鶉養殖場的V13、V14、V15、V16同為E28型，表明不同地區、不同場來源的C.jejuni呈交叉分布，這與薛峰等[13]的研究結果一致。ERIC-PCR分型結果表明，ERIC-PCR具有很高的異質性，對于了解不同地區不同場菌株的流行特點具有重要的指導意義。

3.3 毒力相關基因與致病性相關分析

迄今為止，人們對C.jejuni的致病機制尚不十分清楚。但已有研究證實了一些與該菌的致病性相關的基因及調控機制。本研究選擇了目前國內外研究較多的17種毒力相關基因，對分離的48株C.jejuni毒力相關基因的攜帶情況進行調查。趨化因子對于具有高度運動能力的C.jejuni來說不僅有利于其尋找更合適的生存環境，且有利于其侵入宿主。本研究中趨化相關因子cheY和cheW的攜帶率在95%以上，與翟海華等[12]的報道一致，表明趨化作用在致病過程中可能具有重要的作用；有研究證實作為C.jejuni主要毒力因子之一的 pVir 質粒上的virBⅡ的突變能引起細菌的黏附與侵襲率的下降，virBⅡ質粒基因的平均攜帶率為 2.08%，比張茂俊等[25]報道的低。其他一些毒力相關基因pldA、ciaB、iamA等的攜帶率低于國外Müller等[26]和Datta等[27]的報道，與國內的研究報道具有較大差異，說明不同宿主之間毒力基因的攜帶存在一定差異，但是否對宿主致病，還有待于進一步研究。本次調查中，鵪鶉源的C.jejuni分離株毒力相關基因攜帶率普遍高于雞源，有72.92%的分離株攜帶有13種以上的毒力相關基因。

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(責任編輯張 韻)

ERIC-PCRtypingandvirulence-relatedgenesdetectionofCampylobacterjejuniisolatedfrompoultryinsomeareasofSichuanProvince

WANG Han， ZHANG Bo， MO Yaxia， LUO Zhengzhong， JIANG Sixun， SUN Chengliang， CAO Suizhong， YAO Xueping*

(CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince，Chengdu611130，China)

In order to investigate the genetic diversity and virulence related genes ofCampylobacterjejuniin some areas of Sichuan， the samples of the cecum and anal swab collected from the chickens， ducks and quails from Chengdu， Ya’an and Meishan were isolated and identified forC.jejuni， and the ERIC-PCR typing and seventeen virulence-related genes were detected and analyzed. The results of isolation showed a 10.23% separation rate (48/469)， and the isolation rate from chicken was higher than that from quail(P<0.05). ERIC-PCR cluster analysis showed that forty-eight strains ofC.jejunicould be divided into six clusters， and there were sixteen species and thirty-one genotypes. The isolates from each farm were clustered and distributed in some species or cluster， while some isolates showed cross distribution in different regions and different farms. The carrying rate of fifteen virulence related genes was above 50%， and the carrying rate of virulence related genes of quail was higher than other animals. The results suggested that theC.jejuniisolates from poultry of Sichuan area possessed high carrying rate and high genetic diversity.

poultry;Campylobacterjejuni; ERIC-PCR typing; virulence-related genes

S855.1+2

：A

：1004-1524(2017)09-1465-09

王寒，張博，莫亞霞，等. 四川部分地區禽源空腸彎曲菌ERIC-PCR分型及毒力相關基因分析[J].浙江農業學報，2017，29(9)： 1465-1473.

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.09.07

2017-03-15

四川農業大學學科建設雙支計劃(3572070)；四川省教育廳重點項目(15ZA0024)

王寒(1991—)，女，湖南永州人，碩士研究生，研究方向為動物臨床分子診斷與治療。E-mail：791390483@qq.com

*通信作者，姚學萍，E-mail: yaoxueping74@126.com