大豆異黃酮對雄性大鼠脾臟IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ蛋白表達的影響

李立科，羅啟慧，2，黃 超，陳曉林，陳 蘋，李一帆，劉文濤，2，陳正禮，2，*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學 動物醫(yī)學院，動物疾病模型實驗室，四川 成都 611130； 2.四川農(nóng)業(yè)大學 預(yù)防獸醫(yī)研究所，四川 成都 611130)

大豆異黃酮對雄性大鼠脾臟IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ蛋白表達的影響

李立科1，羅啟慧1，2，黃 超1，陳曉林1，陳 蘋1，李一帆1，劉文濤1，2，陳正禮1，2，*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學 動物醫(yī)學院，動物疾病模型實驗室，四川 成都 611130； 2.四川農(nóng)業(yè)大學 預(yù)防獸醫(yī)研究所，四川 成都 611130)

試驗旨在探討不同劑量大豆異黃酮對雄性大鼠脾臟免疫功能的影響及其機理。將40只6周齡雄性SD大鼠隨機分為4組，每組10只。對照組和低、中、高劑量組分別灌胃添加不同水平的大豆異黃酮(0、50、250、500 mg·kg-1)，大鼠每周稱量體質(zhì)量，連續(xù)干預(yù)4周后處死大鼠并記錄脾臟質(zhì)量；利用免疫組織化學鏈霉親和素-生物素復合物(SABC)染色法研究大鼠脾臟中白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及干擾素γ(INF-γ)蛋白的表達水平。結(jié)果顯示，與對照組相比，各組間脾臟指數(shù)差異不顯著；中、高劑量組脾小體體積顯著減小，紅髓區(qū)淋巴細胞數(shù)量顯著減少；IL-2在低劑量組表達顯著降低，但在中、高劑量組表達增加且在高劑量組達到顯著水平；IL-4、TNF-α和INF-γ在大豆異黃酮干預(yù)后各劑量組表達水平均顯著降低。綜上，高劑量的大豆異黃酮能夠提高IL-2蛋白的表達水平，各劑量組總體抑制了IL-4、TNF-α和INF-γ蛋白的表達水平，這表明大豆異黃酮對雄性健康大鼠存在潛在的免疫抑制，且呈現(xiàn)一定的劑量差異。

大豆異黃酮；脾臟；免疫功能；大鼠

大豆異黃酮(Soy isoflavone， SIF)是一種植物雌激素，同17β雌二醇具有相似的結(jié)構(gòu)。SIF含有大量的染料木黃酮(genistein)、黃豆苷元(daidzein)和大豆黃素(glycitein)[1]，可作為雌激素α和β受體的激動劑或拮抗劑，從而調(diào)節(jié)細胞增殖和生長[2]。研究表明，SIF具有雌激素活性和抗雌激素活性雙重作用[3]，至于表現(xiàn)為何種活性，主要取決于其局部濃度、內(nèi)源性雌激素含量以及組織器官雌激素受體水平[4]。近年來研究表明，SIF具有降血脂[5]、抗氧化[6]、增強免疫[7]等多種生物學功能，同時，SIF對于癌癥、心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥和神經(jīng)退行性疾病也具有良好的預(yù)防和治療作用[8]。脾臟是機體最大的外周免疫器官，也是免疫細胞定居和產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的重要部位[9]。根據(jù)細胞因子的分泌方式不同，可將輔助T淋巴細胞(Th)分為Th1和Th2兩個功能亞群，其中Th1細胞以分泌IL-2、INF-γ為主，參與細胞免疫反應(yīng)；Th2細胞以分泌IL-4、IL-10為主，參與體液免疫反應(yīng)[10]。而TNF-α則由巨噬細胞分泌產(chǎn)生，可促進細胞增殖和分化。近年來，SIF作為一種保健食品被廣泛應(yīng)用，但對于其潛在的毒性研究還較少，如致癌作用[11-12]、生殖毒性[13]、內(nèi)分泌紊亂[14]等。因此本試驗以雄性大鼠脾臟為研究對象，探討補充不同劑量SIF對雄性大鼠脾臟IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ蛋白表達的影響，為揭示SIF對機體免疫功能的作用機理提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

試驗動物為40只6周齡SD雄性大鼠，體質(zhì)量(228.44±11.06)g，購自成都達碩實驗動物有限公司，使用許可證SCXK(川)2015-030。

1.1.2 試驗物品及試劑

試驗大鼠專用飼料和墊料均購自成都達碩實驗動物有限公司；SIF提取物購自西安天豐生物科技有限公司，產(chǎn)品批號NF-20140806，純度為90%；兔抗鼠IL-2，IL-4，TNF-α，INF-γ抗體試劑盒均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；即用型SABC-AP試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯示試劑均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.1.3 主要儀器

Leica冷凍切片機(德國徠卡有限公司)、Nikon50i-BF熒光生物數(shù)碼顯微鏡(日本尼康公司)、江蘇捷達801形態(tài)分析軟件(江蘇捷達科技發(fā)展有限公司)等。

1.2 試驗方法

1.2.1 大豆異黃酮干預(yù)試驗

將40只大鼠隨機分為4組，在晝夜交替的自然光下飼養(yǎng)，自由飲水進食。將低、中、高劑量(50、250、500 mg·kg-1)的SIF溶于0.5%羧甲基纖維素鈉中，每日各組大鼠按照2 mL·kg-1BW連續(xù)灌胃4周，對照組灌胃等劑量的羧甲基纖維素鈉，并每周記錄體質(zhì)量。試驗中對動物的處置符合中華人民共和國科技部《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》的規(guī)定。

1.2.2 動物處理

干預(yù)4周后，利用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，斷頸處死大鼠。迅速分離出脾臟并稱量其質(zhì)量，按以下公式計算脾臟指數(shù)，脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)，脾臟置于4%多聚甲醛溶液中進行固定。固定24 h后，將組織流水沖洗過夜，隨后依次梯度酒精脫水、石蠟包埋、切片(5 μm)、烤片備用。

1.2.3 H.E染色

利用蘇木精-伊紅(HE)對切片進行染色，在光學顯微鏡下觀察脾臟形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.2.4 免疫組化染色

將常規(guī)石蠟切片浸入二甲苯脫蠟，經(jīng)過梯度酒精后，在新鮮配制的3%過氧化氫溶液中避光反應(yīng)30 min以清除內(nèi)源性過氧化氫酶，然后用PBS沖洗3次，每次5 min。隨后將切片放入檸檬酸鈉緩沖液中進行高壓抗原修復，冷卻至室溫后，PBS潤洗3次，每次5 min。10%山羊血清常溫封閉1.5 h后，PBS潤洗3次，隨后滴加一抗4 ℃過夜(一抗稀釋比例均為1∶200)，陰性對照不加一抗。二抗(1∶100)常溫反應(yīng)1.5 h后用PBS潤洗3次，每次5 min。滴加鏈霉親和素-生物素復合物(SABC)常溫反應(yīng)1 h后，在光學顯微鏡下滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)，待出現(xiàn)藍色陽性反應(yīng)后浸入蒸餾水終止反應(yīng)，最后梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.2.5 圖像采集

每組動物10張切片，對每張切片進行全片統(tǒng)計陽性細胞積分光密度值，每張切片的積分光密度平均值作為該切片的最終積分光密度值，10張切片的積分光密度平均值作為該組動物的最終陽性細胞積分光密度值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1大豆異黃酮對大鼠脾臟指數(shù)的影響

從圖1可知，在SIF干預(yù)4周后，與對照組相比，大豆異黃酮干預(yù)各劑量組脾臟指數(shù)均無顯著性差異。

2.2大豆異黃酮對大鼠脾臟組織學結(jié)構(gòu)的影響

如圖2所示，對照組大鼠脾臟組織學結(jié)構(gòu)正常，脾小體結(jié)構(gòu)清晰，可見中央動脈；低劑量組大鼠脾小結(jié)直徑和紅髓區(qū)淋巴細胞數(shù)量雖有減少，但與正常組差異不明顯；而中、高劑量組可見脾小體直徑顯著減小(圖3-A)，紅髓區(qū)淋巴數(shù)量顯著減少(圖3-B)，間質(zhì)增加。

2.3大豆異黃酮對雄性大鼠脾臟細胞因子蛋白表達的影響

SIF對雄性大鼠脾臟IL-2、IL-4、TNF和IFN-γ蛋白表達影響及積分光密度值顯著性統(tǒng)計詳見圖4、圖5。與對照組相比，低劑量SIF能夠顯著的降低IL-2蛋白的表達水平(P<0.05)，而高劑量SIF卻能夠顯著的增加IL-2蛋白的表達水平(P<0.05)；組間比較表明低劑量組IL-2蛋白的表達水平顯著低于中、高劑量組(P<0.05，圖4-A)。與對照組相比，低、中、高劑量SIF組均顯著地降低了IL-4、TNF-α、INF-γ蛋白的表達水平(P<0.05，圖4B-D)；組間比較發(fā)現(xiàn)中劑量組IL-4蛋白的表達水平顯著高于低、高劑量組(P<0.05，圖4-B)，中劑量組TNF-α蛋白的表達水平顯著高于高劑量組(P<0.05，圖4-C)，中劑量組INF-γ蛋白的表達水平顯著高于低、高劑量組，且高劑量組顯著高于低劑量組(P<0.05，圖4-D)。

圖1 大豆異黃酮對大鼠脾臟指數(shù)的影響Fig.1 Effect of SIF on spleen index of rats

圖2 大鼠脾臟HE染色結(jié)果Fig.2 The spleen HE staining of rats

3 討論

作為亞洲國家的傳統(tǒng)飲食，大豆及其制品中含有豐富的染料木黃酮、黃豆苷元和大豆黃素等成分，這些異黃酮具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等功能[15]。許多流行病學研究也表明大豆及其制品能夠有效地改善更年期癥狀、代謝相關(guān)疾病，降低癌癥風險[16]。目前大豆食品和異黃酮補充劑的消費量在不斷增加，然而有關(guān)SIF的毒性研究發(fā)現(xiàn)，補充異黃酮后會顯著增加腫瘤面積[17]，降低內(nèi)源性雌激素含量，促進癌細胞生成[11]；減少雄性動物前列腺重量，影響睪丸發(fā)育，使雌性動物卵巢異常，間質(zhì)萎縮變性[18]等。目前有關(guān)SIF對正常雄性大鼠免疫功能的研究報道還較少，因此對于其作用機制的研究顯得非常重要。

脾臟是機體外周最大的免疫器官，由紅髓、白髓和邊緣區(qū)三個部分組成，紅髓和脾小結(jié)主要由B淋巴細胞組成，白髓的動脈周圍淋巴鞘主要由T淋巴細胞組成，而邊緣區(qū)則含有大量的巨噬細胞。HE染色結(jié)果顯示，中、高劑量組脾小結(jié)體積顯著減小，紅髓區(qū)淋巴細胞數(shù)量顯著減少。由于機體免疫功能的高低與淋巴細胞的數(shù)量密切相關(guān)，而脾小結(jié)和紅髓含有大量的B淋巴細胞，在B淋巴細胞顯著減少后，其分化增殖而產(chǎn)生的漿細胞也相應(yīng)減少，分泌免疫球蛋白的能力減弱，最終導致機體體液免疫受到抑制[19]。Th1細胞分泌的IL-2和INF-γ能夠誘發(fā)巨噬細胞活化和遲發(fā)超敏反應(yīng)，進而調(diào)節(jié)機體細胞免疫[7]。IL-2是引起T細胞增殖的主要細胞因子，可以刺激NK細胞的生長，同時增強其殺傷力，激發(fā)B細胞生長及產(chǎn)生抗體。而INF-γ能夠激活巨噬細胞并促進其功能和激活中性粒細胞功能以及NK細胞殺傷力等作用[9]。Th2細胞分泌的IL-4能夠誘發(fā)肥大細胞和嗜酸性粒細胞生長、分化。巨噬細胞分泌的TNF-α能夠殺傷或抑制腫瘤細胞，促進細胞增殖和分化，增強大核細胞的細胞毒作用，激活LAK細胞和NK細胞。因而IL-2、IL-4、TNF-α和INF-γ在機體免疫調(diào)節(jié)過程中起著重要的作用。免疫組化結(jié)果顯示，低劑量的SIF抑制了IL-2 的表達，然而中、高劑量的SIF卻增加了IL-2的表達且在高劑量時達到顯著水平。體外研究表明，在培養(yǎng)的奶牛脾臟和腸系膜淋巴結(jié)中添加0.25～5 μg·mL-1的SIF會增加IL-2的表達，在培養(yǎng)的鼠脾細胞中添加0.01～10 μmol的黃豆苷元也會增加IL-2的表達[20]。這表明SIF能夠促進IL-2的表達，而增加的IL-2通過刺激B淋巴細胞的增值和分化，從而提高B淋巴細胞分泌抗體的功能，增加機體抗體水平。然而本文發(fā)現(xiàn)不同劑量的SIF卻顯著的抑制了IL-4、TNF-α和INF-γ蛋白的表達，這與大量研究結(jié)果相一致，如Kogiso等[21]給雌性Balb/c小鼠口服4～20 mg·kg-1的染料木黃酮能夠顯著的減少IL-4和INF-γ的表達。Davis等[22]給正常健康男性補充50 mg·d-1的SIF會降低TNF-α的表達。Huang等[23]給絕經(jīng)后女性口服10～1000 nmol的染料木黃酮和黃豆苷元會降低血清中以及培養(yǎng)單核細胞中的TNF-α表達水平。Wang[24]和O’Connor[25]分別給卵巢摘除的SD大鼠和雄性Lewis大鼠灌胃和靜脈注射20 mg·kg-1的染料木黃酮會減少INF-γ的分泌。以上表明SIF會影響T細胞和巨噬細胞分泌，導致IL-4、TNF-α和INF-γ蛋白表達減少，而這些細胞因子表達的減少會抑制細胞的生長、分化和增值，降低單核細胞和巨噬細胞等殺傷活性，從而使機體細胞免疫受到抑制。然而也有文獻報道異黃酮能夠提高免疫功能，如Zhang等[26]給Swiss小鼠口服黃豆苷元后發(fā)現(xiàn)胸腺質(zhì)量和血液中的淋巴細胞數(shù)量顯著增加。Guo等[27]研究發(fā)現(xiàn)口服2～20 mg·kg-1的染料木黃酮能夠增加T細胞和NK細胞活性從而抵抗腫瘤。Sakai等[28]給DO11.10轉(zhuǎn)基因小鼠口服20 mg·kg-1的染料木黃酮后能夠顯著增加T細胞中IFN-γ和IL-4的表達。由此可見，SIF是抑制或增強免疫功能，可能與給藥途徑、使用劑量、給藥時間、動物性別和品種密切相關(guān)。

綜上所述，本試驗結(jié)果顯示，當灌胃劑量超過50 mg·kg-1時，SIF會顯著抑制雄性大鼠免疫功能，這表明補充過量的SIF在雄性大鼠上具有潛在的免疫毒性。

[1] KURZER M S, XU X. Dietary Phytoestrogens[J].AnnualReviewofNutrition, 1997, 17∶353-381.

[2] MING Q R, GERDA K, JOCHEN W, et al. Isoflavones, substances with multi-biological and clinical properties[J].EuropeanJournalofNutrition, 2001, 40(4)：135-146.

[3] KALDAS R S, HUGHES C L. Reproductive and general metabolic effects of phytoestrogens in mammals[J].ReproductiveToxicology, 1989, 3(2)：81-89.

[4] THAM D M, GARDNER C D, HASKELL W L. Potential health benefits of dietary phytoestrogens: a review of the clinical, epidemiological, and mechanistic evidence[J].JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism, 1998, 83(7)：2223-2235.

[5] HUANG C, PANG D J, LUO Q H, et al. Soy isoflavones regulate lipid metabolism through an AKT/mTORC1 pathway in diet-induced obesity (DIO) male rats[J].Molecules, 2016, 21(5)：1-9.

[6] WISEMAN H, OREILLY J D, ADLERCREUTZ H, et al. Isoflavone phytoestrogens consumed in soy decrease F2-isoprostane concentrations and increase resistance of low-density lipoprotein to oxidation in humans[J].TheAmericanJournalofClinicalNutrition, 2000, 72(2)：395-400.

[7] 王明，孫志剛，劉文奇，等. 大豆異黃酮對奶牛脾臟和腸系淋巴結(jié)淋巴細胞干擾素γ、白介素2和白介素4濃度以及雌激素受體β mRNA表達的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2012，24(5)：859-869. WANG M, SUN Z G, LIU W Q, et al. Effects of soy isoflavones on concentrations of interferon γ, interleukin 2 and interleukin 4 and mRNA expression of estrogen receptor β in lymphocytes of spleen and intestinal lymph nodes of dairy cows[J].ActaZoonutrimentaSinica, 2012, 24(5)：859-869.(in Chinese with English abstract)

[8] WATANABE S, UESUGI S, KIKUCHI Y. Isoflavones for prevention of cancer, cardiovascular diseases, gynecological problems and possible immune potentiation[J].BiomedicineandPharmacotherapy, 2002, 56(6)：302.

[9] 單增天，田岳鳳，李雷勇，等. 不同灸法對免疫抑制兔脾臟指數(shù)及細胞因子的影響[J]. 湖南中醫(yī)藥大學學報, 2016, 36(11)： 83-86. SHAN Z T, TIAN Y F, LI L Y, et al. Influence of different moxibustion on spleen index and cytokines in immunosuppressive model rabbits[J].JournalofHunanUniversityofChineseMedicine, 2016, 36(11)：83-86.(in Chinese with English abstract)

[10] 陳姍姍，羅啟慧，曾文，等. Ⅱ型糖尿病獼猴部分靶器官中Th1/Th2型細胞因子表達分析[J]. 浙江大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版)，2015，41(3)：302-308. CHEN S S, LUO Q H, ZENG W, et al. Expression of Th1/Th2 cytokines in partial target organs of type 2 diabetes mellitus rhesus monkey[J].JournalofZhejiangUniversity(Agriculture&LifeSciences), 2015, 41(3)：302-308.(in Chinese with English abstract)

[11] YANG J, NAKAGAWA H, TSUTA K, et al. Influence of perinatal genistein exposure on the development of MNU-induced mammary carcinoma in female Sprague-Dawley rats[J].CancerLetters, 2000, 149(1/2)：171-179.

[12] NEWBOLD R R, BANKS E P, BULLOCK B, et al. Uterine adenocarcinoma in mice treated neonatally with genistein[J].CancerResearch, 2001, 61(11)：4325-4328.

[13] CEDERROTH C R, ZIMMERMANN C, NEF S. Soy, phytoestrogens and their impact on reproductive health[J].MolecularandCellularEndocrinology, 2012, 355(2)：192-200.

[14] SOSIC J B, FILIPOVVIC B, WIRTH E K, et al. Soy isoflavones interfere with thyroid hormone homeostasis in orchidectomized middle-aged rats[J].ToxicologyandAppliedPharmacology, 2014, 278(2)：124-134.

[15] MADHAN M, WEI J, SAMPSON H A. Regulation of the immune response by soybean isoflavones[J].ImmunologicResearch, 2012, 54(1/3)：95-110.

[16] LIN Q Y, MATHIEU O, TOMPKINS T A, et al. Modulation of the TNFα-induced gene expression profile of intestinal epithelial cells by soy fermented with lactic acid bacteria[J].JournalofFunctionalFoods, 2016, 23:400-411.

[17] JU Y H, ALLRED C D, ALLRED K F, et al. Physiological concentrations of dietary genistein dose-dependently stimulate growth of estrogen-dependent human breast cancer (MCF-7) tumors implanted in athymic nude mice[J].TheJournalofNutrition, 2001, 131(11)：2957-2962.

[18] DELCLOS K B, BUCCI T J, LOMAX L G, et al. Effects of dietary genistein exposure during development on male and female CD (Sprague-Dawley) rats[J].ReproductiveToxicology, 2001, 15(6)：647-663.

[19] SUSAN L S, LINDA M B, MICHAEL C, et al. Helper T-cell subsets: phenotype, function and the role of lymphokines in regulating their development[J].ImmunologicalReviews, 1991, 123(1)：115-144.

[20] WANG W, HIGUCHI C M, ZHANG R. Individual and combinatory effects of soy isoflavones on the in vitro potentiation of lymphocyte activation[J].NutritionandCancer, 1997, 29(1)：29-34.

[21] KOGISO M, SAKAI T, MITSUYA K, et al. Genistein suppresses antigen-specific immune responses through competition with 17beta-estradiol for estrogen receptors in ovalbumin-immunized BALB/c mice[J].Nutrition, 2006, 22(7/8)：802-809.

[22] DAVIS J N, KUCUK O, DJURIC Z, et al. Soy isoflavone supplementation in healthy men prevents NF-kappa B activation by TNF-alpha in blood lymphocytes[J].FreeRadicalBiology&Medicine, 2001, 30(11)：1293-1302.

[23] HUANG Y, CAO S, NAGAMANI M, et al. Decreased circulating levels of tumor necrosis factor-alpha in postmenopausal women during consumption of soy-containing isoflavones[J].JournalofClinicalEndocrinologyandMetabolism, 2005, 90(7)：3956-3962.

[24] WANG J, ZHANG Q, JIN S, et al. Genistein modulate immune responses in collagen-induced rheumatoid arthritis model[J].Maturitas, 2008, 59(4)：405-412.

[25] TIMOTHY P O, DANIEL A L, PAUL C M, et al. A high isoflavone soy protein diet and intravenous genistein delay rejection of rat cardiac allografts[J].Nutrition, 2002, 132(8)：2283-2287.

[26] ZHANG R, LI Y, WANG W. Enhancement of immune function in mice fed high doses of soy daidzein[J].NutritionandCancer, 1997, 29(1)：24-28.

[27] GUO T L, MCCAY J A, ZHANG L X, et al. Genistein modulates immune responses and increases host resistance to B16F10 tumor in adult female B6C3F1 mice[J].Nutrition, 2001, 131(12)：3251-3258.

[28] TOHRU S, MARI K, KAORI M, et al. Genistein enhances antigen-specific cytokine production in female DO11.10 transgenic mice[J].JournalofNutritionalScienceandVitaminology, 2006, 52(5)：327-332.

(責任編輯盧福莊)

EffectsofsoyisoflavonesonexpressionofIL-2,IL-4,TNF-αandINF-γinmalerats’spleen

LI Like1， LUO Qihui1，2， HUANG Chao1， CHEN Xiaolin1， CHEN Ping1， LI Yifan1， LIU Wentao1，2， CHEN Zhengli1，2，*

(1.LaboratoryofAnimalDiseaseModel，CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，China；2.InstituteofPreventiveVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，China)

In the present study， effects of different dose of soy isoflavones (SIF) on splenic immune function in male rats were studied and mechanism was explained. Forty rats aged 6 weeks were randomly divided four groups fed with SIF 0 (control group)，50 (low dose group)，250 (medium dose group)， 500 (high dose group) mg·kg-1body weight. Body weight were recorded every week， and at the end of experiment the rats’ spleens were separated and weighed. The expression levels of IL-2， IL-4， TNF-α and INF-γ in rats spleen were detected by immunohistochemistry SABC method. The results showed that compared with control group， there were no significantly differences in spleen index among the groups. Splenic corpuscles in middle and high group were smaller than those in other groups with the lymphocytes number significantly decreased in red pulp. The expression of IL-2 in low dose group was significantly decreased， but rapidly increased in middle and high dose group with a dose-dependent. However， the expression levels of IL-4， TNF-α and INF-γ were all significantly reduced after treated by isoflavones. All above，even though high dose isoflavones can increase IL-2 level，the expressions of IL-4， TNF-α and INF-γ were inhibited with the dose of isoflavones increasing， which indicated SIF had potential immunosuppression to male rats and appeared dosage difference.

soy isoflavone; spleen; immune function; rats

S811.2；S816.7

：A

：1004-1524(2017)09-1458-07

李立科，羅啟慧，黃超，等. 大豆異黃酮對雄性大鼠脾臟IL-2、IL-4、TNF-α、INF-γ蛋白表達的影響[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學報，2017，29(9): 1458-1464.

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.09.06

2017-02-23

國家科技支撐計劃課題(2014BAI03B01);國家重大科學儀器設(shè)備開發(fā)專項(2013YQ49085906)

李立科(1990—)，男，四川成都人，碩士研究生，主要從事實驗動物疾病模型研究。E-mail: 394580507@qq.com

*通信作者，陳正禮，E-mail: chzhli75@163.com