飼養密度對中華蟾蜍幼蟾生長發育的影響△

趙群，李軍德，康彥，高波，李燈林，楊艷

(1.道地藥材國家重點實驗室培育基地，中國中醫科學院 中藥資源中心，北京，100700；2.皖西學院，安徽 六安 237012；3.安徽華潤金蟾藥業股份有限公司，安徽 淮北 235000)

·中藥農業·

飼養密度對中華蟾蜍幼蟾生長發育的影響△

趙群1,2，李軍德1*，康彥3，高波3，李燈林3，楊艷3

(1.道地藥材國家重點實驗室培育基地，中國中醫科學院 中藥資源中心，北京，100700；2.皖西學院，安徽 六安237012；3.安徽華潤金蟾藥業股份有限公司，安徽 淮北235000)

目的：研究飼養密度對中華蟾蜍BufogargarizansCantor幼蟾生長發育的影響。方法：將中華蟾蜍幼蟾分別飼養在20、40、60、80只/m2的不同密度條件下。每隔7d測量和記錄1次幼蟾的體重和體長。結果：(1)幼蟾在第一次冬眠前的成活率為7.9%～30.0%；(2)飼養密度對幼蟾的體重和體長無顯著影響。中華蟾蜍幼蟾的最適養殖密度為20只/m2。結論：中華蟾蜍幼蟾的最適養殖密度為20只/m2。

中華蟾蜍；幼蟾；養殖密度；生長發育

中華蟾蜍Bufogargarizans是中藥蟾皮和蟾酥的重要基源動物[1-3]，隸屬于蟾蜍科Bufonidae蟾蜍屬Bufo。其耳后腺分泌物——蟾酥作為常用藥材外，其皮中含有多種化學成分，利用其水溶性成分生產的華蟾素注射液具有顯著的抗腫瘤效果[4-5]。由于中華蟾蜍野生資源下降[6]，必須開展和推廣其規范化人工養殖，才能滿足日益增長的對該種蟾蜍的需求。

提高蝌蚪和幼蟾的成活率與質量是中華蟾蜍規范化養殖的關鍵之一。研究表明，在特定人工飼養條件下，中華蟾蜍蝌蚪臨近變態時(變態前)和剛變態的成活率分別為68.7～96.3%和5.7～36.0%，最適養殖密度為1000只/m2[7]。然而關于飼養密度對中華蟾蜍幼蟾成活率和質量影響的研究，至今未見報道。本文主要探討在人工飼養條件下，中華蟾蜍幼蟾的合理飼養密度，以提高幼蟾成活率，解決中華蟾蜍規范化人工養殖技術體系中的關鍵問題。

1 材料與方法

1.1實驗材料與設施

1.1.1實驗材料 實驗所用幼蟾為采集于山東和河北2個產地的中華蟾蜍種蟾經人工飼養并產卵自然孵化后，蝌蝌經人工飼養后變態得到的個體。2個產地的幼蟾隨機混合，在相同環境飼養馴化約14天后，開始實驗。通過稱重，挑選體重沒有顯著差異的個體，按下文中實驗要求放入每個實驗用玻璃飼養缸中。

1.1.2實驗設施 每個玻璃飼養缸的長×寬×高為150cm×100cm×60cm，缸內水深30cm。用沙子和磚塊在缸內鋪建三分之二面積的陸地，陸地和水接觸的邊緣設置一定的緩坡，便于幼蟾登陸和下水。玻璃飼養缸放置于有良好光照條件、通風和自然室溫的實驗室中。

1.2實驗方法

將幼蟾分為4個大組，每個大組中幼蟾的飼養密度分別為20只/m2、40只/m2、60只/m2和80只/m2。其中每個大組有3個平行組，每個平行組分別飼養于1個玻璃飼養缸中。在實驗過程中，通過定時檢測主要水質指標，以保證其符合《漁業水質標準(GB11607-1989)》的規定。每天上午8∶30和下午6∶30各喂食1次；每次投食量為每平行組幼蟾實際總體重的10%左右。

每隔7天測量和記錄1次數據，每大組的其中2個平行組分別測量5至10個樣本，測量數據主要為幼蟾的體重和體長。體長是自吻部最前端端至臀部最后端的長度[2]。每大組的第3個平行組作為對照組，平時正常進行喂食和其他實驗管理，但不進行定期7天1次的數據測量，只在實驗結束時從4個對照組中分別隨機挑出5個共20個樣本測量1次體重和體長，用于和實驗組進行比較，以確認實驗時對幼蟾的測量是否影響了幼蟾的體重和體長指標，在幼蟾第一次冬眠前停止攝食時結束本實驗。

1.3數據處理

先對實驗數據進行正態分布和方差的同質性檢驗。如果數據符合正態分布和方差的同質性，可以直接進行方差分析；如果數據不呈正態性分布或不具有同質性，必須先將數據轉換以達到正態性和同質性的要求后方能對其進行方差分析。

以飼養密度和生長發育時間為作用因素，用統計軟件STATISTICA6.0分別對體重、體長和成活率進行相關性分析、單因素方差分析或二因素方差分析，找出幼蟾在第一次冬眠前成活率高、體重較大和體長較長的飼養密度，這個密度可以認為是人工養殖幼蟾的適宜密度。

2 結果

由表1可知，中華蟾蜍幼蟾在生長發育過程中，其體重和體長分別受到生長發育時間與密度的顯著影響(P值均小于0.05)；而且，飼養密度和幼蟾發育時間對體重和體長具有互作影響(P值均小于0.05)。

在幼蟾生長發育后期(從實驗開始到之后的第112d)幼蟾體重和體長與密度均沒有直線相關性(r=0.1113，P=0.3812；r=0.1861，P=0.1409)(表2)。但體長與體重之間具有正相關(密度實驗：r=0.9363，P=0.0000，表2)，兩者之間的直線回歸方程詳見表2。

表1 以生長發育時間和密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重和體長的二因素方差分析

注：當P<0.05時，差異顯著；差異顯著的變異來源用*表示

表2 第112 d測量的體重、體長和密度之間的直線相關分析

注：當P<0.05時，差異顯著，具相關性

2.1幼蟾生長發育期、密度與體重的關系

表3中各密度實驗組中幼蟾的體重大多隨生長發育時間的增長而增加，但有部分時期體重隨時間增長并無顯著增加。其中，在密度為20只/m2的條件下，從第49d到第56d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體重在這兩個時間段的前后分別略有減少，但前后之間并無顯著差異(F1，30=1.738，P=0.1974；F1，23=0.023，P=0.8799)，在其余時間段，幼蟾的體重都隨發育時間的增長而增加。在密度為40只/m2的條件下，從第35d到第42d，幼蟾的體重顯著減少(F1，38=4.781，P=0.0350)，其余大部分時間段，其體重隨時間的增長而增加；但對全體實驗幼蟾來說，從第35d到第42d，幼蟾的前后體重并無顯著差異(F1，158=0.487，P=0.4861)。在密度為60只/m2的條件下，從第35d到第42d，以及第49d到第56d，幼蟾的平均體重在這兩個時間段的前后分別略有減少，但前后之間并無顯著差異(F1，38=1.420，P=0.2408；F1，33=0.410，P=0.5266)。在密度為80只/m2的條件下，從第35d到第49d，以及第70d到第77d，幼蟾的平均體重在這兩個時間段的前后分別呈不顯著的降低，但前后之間并無顯著差異(F2，52=2.015，P=0.1436；F1，38=0.165，P=0.6872)。在第112d時(即冬眠前停止實驗時)，幼蟾的體重在不同密度組間差異不顯著(F3，60=1.380，P=0.2577)，表明4種飼養密度對幼蟾生長發育期間的最終體重沒有影響。

表3 在不同生長發育時間以密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重的單因素方差分析

注：當P<0.05時，差異顯著；Tukey 多重比較(Tukey’sposthoctest)，α=0.05，上標不同的平均值差異顯著

2.2在幼蟾不同發育期，密度與體長的關系

表4顯示，各密度實驗組中幼蟾的體長大多隨生長發育時間的增長而增加，但有部分時期，體長隨時間增長呈現出不顯著的減少。其中，在密度為20只/m2的條件下，從第49d到第56d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體長在這兩個時間段的前后分別略有減少，但前后之間的平均體長并無顯著差異(F1，30=0.87，P=0.359；F1，23=0.49，P=0.491)，在其余時間段，幼蟾的體長均隨發育時間的增長而增加。在密度為40只/m2的條件下，從第35d到第42d，從第63d到第70d，以及第91d到第98d，幼蟾的平均體長在這3個時間段前后分別有不顯著的減少(F1，38=2.34，P=0.134；F1，38=0.03，P=0.858；F1，38=0.004，P=0.944)，其余時間段，其體長隨時間的增長而增加。在密度為60只/m2的條件下，從第35d到第42d，以及第49d

表4 在不同生長發育時間以密度為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體長的單因素方差分析

注：當P<0.05時，差異顯著；Tukey 多重比較(Tukey’sposthoctest)，α=0.05，上標不同的平均值差異顯著

到第56 d，幼蟾的平均體長在這兩個時間段的前后分別具有不顯著減少(F1，38=2.07，P=0.159；F1，33=1.28，P=0.265)。在密度為80只/m2的條件下，從第35 d到第49 d，從第70 d到第77 d，以及第91 d到第105 d，幼蟾的平均體長在這3個時間段的前后分別呈不顯著的降低(F2，52=0.96，P=0.389；F1，38=0.009，P=0.924；F2，55=0.14，P=0.877)。在第112 d時，幼蟾的體長在不同密度組間差異不顯著(F3，60=1.36，P=0.263)，表明4種飼養密度對幼蟾生長發育期間的最終體長沒有影響。

2.3中華蟾蜍幼蟾成活率

表5為幼蟾在第112d時4個密度實驗組的成活率。由于所有成活率數據經反正弦轉換成角度值后仍然不呈正態分布，因此無法對成活率數據進行方差分析。所以，表中只列出了各組幼蟾成活率的平均數和方差等描述性統計值，并未進行差異顯著性分析。從表5可以看出，幼蟾的成活率隨飼養密度的增加而降低；當飼養密度為20只/m2時，幼蟾的成活率最高。在4個飼養密度中，幼蟾的每m2平均成活數均為6只。

表5 中華蟾蜍幼蟾成活率

2.4實驗組和對照組幼蟾之間體重與體長的比較

表6顯示，當實驗結束時，實驗組和對照組幼蟾之間平均體重和體長上均無顯著差異(F1，38=0.039，P=0.8453；F1，38=0.01，P=0.904)。表明實驗時對幼蟾體重和體長等數據的測量，并不影響幼蟾的正常生長。

表6 以組別為作用因素對中華蟾蜍幼蟾體重和體長的單因素方差分析

注：當P<0.05時，差異顯著。

3 討論

實驗結果表明，中華蟾蜍幼蟾的體重和體長在幼蟾期的大部分階段隨生長發育時間的增長而增加。在其中的某一發育階段，幼蟾體重和體長可能會隨發育期的增長而減少，但減少不顯著。盡管在密度為40只/m2的飼養條件下，幼蟾的體重從第35 d到第42 d有顯著的減少，但對全部實驗幼蟾來說，幼蟾的體重在此期間前后并無顯著差異。出現以上情況的原因可能是取樣誤差，也可能是在此期間幼蟾的生長情況不佳。

實驗時對幼蟾進行數據測量，對于幼蟾來說是一種外界刺激，經檢驗對幼蟾生長發育的影響沒有統計學意義。因此，本實驗結果能夠反映幼蟾在人工飼養條件下的生長情況。盡管在幼蟾的整個實驗期內，幼蟾平均體重和體長顯著受到飼養密度的影響，但在實驗后期(尤其是第112 d)，不同密度條件下的幼蟾在體重和體長方面均無顯著差異。以上情況的出現，可能是由于在實驗后期，實驗幼蟾由于一定數量的死亡而導致飼養密度的下降，因此各密度梯度中的幼蟾生長指標趨于一致。由于4種飼養密度的幼蟾在體重、體長和成活率等重要指標上沒有差異，并且所有密度處理后的最終成活的幼蟾平均數都為6只/m2，出于幼蟾的飼養成本和養殖效率的考慮，在人工飼養中華蟾蜍幼蟾時，最佳飼養密度以20只/m2為宜。李文健等[8]對棘腹蛙Ranaboulengeri的幼蛙進行了人工試養研究，結果表明幼蛙的飼養密度在37～74只/m2時成活率在95%以上，并據此判定該密度范圍為最佳，該實驗中幼蛙的最佳飼養密度高于本實驗中幼蟾的最佳飼養密度。其原因可能與兩種動物的習性差異較大有關。

4 結論

由本實驗結果可得出以下結論：(1)中華蟾蜍在第一次冬眠前的成活率為7.9～30.0%；(2)中華蟾蜍幼蟾最適養殖密度為20只/m2。

[1] 江蘇新醫學院.中藥大辭典：下冊[M].上海：上海人民出版社，1977：2713.

[2] 費梁，胡淑琴，葉昌媛，等.中國動物志：兩棲綱(中卷)，無尾目[M].北京：科學出版社，2009.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：360.

[4] 曾洋，張愛軍，文筱.干蟾皮的研究進展[J].中國醫藥科學，2011，1(15)：29-31.

[5] 王宏潔，楊立新，高波，等.高效液相色譜法測定不同種蟾皮中蟾蜍噻嚀的含量[J].中國中醫藥信息雜志，2012，19(11)：44-45.

[6] 喬淑芬.中華大蟾蜍生活習性及人工養殖場地選擇[J].通化師范學院學報，2008，29(4)：39-41.

[7] 李軍德，趙群，康彥.密度與飼料對中華蟾蜍蝌蚪生長發育的影響[J].中國中藥雜志，2016，41(6)：1001-1007.

[8] 李文健，王智，張健華，等.棘腹蛙(RanaboulengeriGünther)[J].常德師范學院學報(自然科學版)，2001，13(4)：76-78.

Effects of Different Raising Densities on Toadlet Development ofBufogargarizans

ZHAO Qun1,2，LI Junde1*，KANG Yan3，GAO Bo3，LI Denglin3，YANG Yan3

(1.National Resource Center for Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，State Key Laboratory Breeding Base of Dao-di Herbs，Beijng 100700，China； 2.West Anhui University，Liu’an 237012，China；3.Anhui China Resources Jinchan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Huaibei 235000，China)

Objective：The effects of four different raising densities on the toadlets growth ofBufogargarizanswere studied.Methods：The toadlets were fed respectively at different density of 20，40，60，and 80 toadlets per square meter.The body weight and snout-vent length were measured and recorded every seven days for 112 days.Results：(1)The survival rates of toadlet before the first hibernation period was from 7.9% to 30.0%；(2)The raising density had no effect on the body weight and snout-vent length of toadlet before first hibernation period，and the optimum raising density is 20 toadlets per square meter.Conclusion：The optimum raising density of toadlet was 20 toadlets per square meter.

Bufogargarizans；toadlet；raising density；development

中央本級重大增減支項目(2060302)；蟾蜍規范化養殖技術研究(3-YFB2014005)；安徽省高校省級自然科學研究項目(KJ2013B329)

] 李軍德，研究員，研究方向：藥用動物資源與動物藥材鑒定研究;E-mail：jundeli99@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.1.017

2016-02-15)

*[