HPLC法測定刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量

焦玉紅

哈爾濱商業大學生命科學與環境科學研究中心 150076

HPLC法測定刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量

焦玉紅

哈爾濱商業大學生命科學與環境科學研究中心 150076

目的：采用高效液相色譜法對刺五加注射液中總異嗪皮啶進行含量測定，并對方法的適用性進行考察。方法：采用Agilent Zorbax Eclipse XDB色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)，以乙腈-水-磷酸(95∶4∶1)作為流動相，在341nm波長進行檢測，流速1.0ml/min，進樣量為10μl，柱溫為40℃。結果：該方法在27.06～541.24μg/ml范圍內線性關系良好、該方法溶液穩定性、精密度、加樣回收率良好。結論：本方法用于刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量測定，準確且易于操作。

高效液相色譜，刺五加注射液，總異嗪皮啶，含量

刺五加來源于五加科植物刺五加，用藥部位為根和根莖，刺五加具有益氣補虛、補腎安神、健脾和胃之功效，常用于治療食欲不振、體虛乏力，腰膝酸痛等病癥[1]。刺五加經過提取滅菌后制得的注射液在臨床廣泛用于治療心腦血管疾病，具有確切的治療效果[2]。異嗪皮啶( Isofaxidin) 是刺五加中主要活性成分之一，其含量的高低是評價刺五加質量優劣的重要指標之一。本文采用高效液相色譜法對刺五加注射液中總異嗪皮啶進行含量測定，并對方法的適用性進行考察，為后續質量控制方法的深入研究提供支持。先將研究過程及結果報告如下：

1.儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent1260 UV檢測器 美國安捷倫公司）

電子天平（BS124S 德國賽多利斯公司）

1.2 試藥

刺五加注射液（哈爾濱珍寶制藥有限公司生產，批號161214，規格每支20ml）

異嗪皮啶對照品（中國食品藥品檢定研究院生產，110837-201608，含量99.2%）

試驗用水為經過二次蒸餾處理的純化水

乙腈、甲醇為色譜純（迪馬科技公司）

磷酸為色譜純（天津科密歐公司）

2.色譜條件與系統適用性試驗

采用Agilent Zorbax Eclipse XDB色譜柱(4.6mm×200mm，5 μm)，以乙腈-水-磷酸(95∶4∶1)作為流動相，在341nm波長進行檢測，流速1.0ml/min，進樣量為10μl，柱溫為40℃。

精密稱取異嗪皮啶對照品13.64mg置25ml量瓶中，加甲醇適量溶解，稀釋至刻度，搖勻作為對照品貯備液。精密量取刺五加注射液10ml置250ml錐形瓶中，加甲醇 60ml，超聲處理45min后放冷，抽濾，取適量甲醇將濾渣沖洗干凈后，將濾液收集置沸水浴蒸干，用少量甲醇溶解殘渣并用少量甲醇多次沖洗，合并沖洗液轉移至10ml量瓶中，定容后搖勻。

3.方法學研究

3.1 線性關系研究

分別精密量取對照品貯備溶液適量，分別加甲醇稀釋制成含異嗪皮啶 27.28μg/ml、54.56μg/ml、109.12μg/ml、272.8μg/ml、545.6mlμg/m的溶液。分別精密吸取上述溶液各10μl 注入色譜儀，記錄圖譜。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程： y=19.953x+3.027(r2=0 9999)，線性范圍為27.28～545.6μg/ml。

3.2 溶液穩定性研究

精密量取對照品貯備溶液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。溶液完成配制后的第 0、1、2、4、6、8小時精密量取10μl 注入高效液相色譜儀，每個時間點進樣一針，記錄峰面積。6次測定峰面積分別為 1092.24、1084.67、1091.33、1082.34、1089.49、1067.21，6次測定 RSD為 0.87%。結果表明：異嗪皮啶溶液在8小時內基本穩定。

3.3 精密度試驗

取刺五加注射液市售品（批號：161214），分別取相同批號樣品6份分別制備供試品溶液, 取上述溶液10μl 注入色譜儀，記錄峰面積，計算相對標準偏差。6次測定峰面積分別為1066.7、1072.54、1071.38、1069.37、1079.34、1080.95，6次測定RSD為0.53%。結果表明：該方法精密度良好。

3.4 精加樣回收率試驗

分別量取異嗪皮啶對照品貯備液0.5ml、1.0ml和2.0ml各3份置于 10ml量瓶中，分別加入刺五加注射液（批號：161214）供試品溶液 5ml，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液 10μl注入色譜儀，記錄峰面積。計算異嗪皮啶含量，計算回收率和相對標準偏差。具體結果如下：

加入量（μ g）測得量（μ g）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)27.06 27.09 100.11 99.92 0.41 27.06 26.98 99.70 27.06 26.89 99.37 54.12 54.22 100.18 54.12 54.37 100.46 54.12 53.95 99.69 108.25 107.66 99.45 108.25 107.92 99.70 108.25 108.44 100.18

3.討論

我國刺五加藥材資源儲備豐富，剌五加的化學成分以及藥理作用研究開始于上世紀五十年代，科研工作者們發現并證實了刺五加藥材中的多種活性成分，并對其其藥理作用進行了深入研究，目前我國生產并投入臨床使用的為刺五加混合物成分 [3]。《中國藥典》2010年版中對刺五加藥材測定紫丁香苷含量進行質量控制[4]。中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第十八冊WS3-B-3425-98中對刺五加注射液測定總黃酮含量進行質量控制。本文建立高效液相色譜法測定刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量，該方法在27.06～541.24μg/ml范圍內線性關系良好、該方法溶液穩定性、精密度、加樣回收率良好。本方法用于刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量測定，操作簡便、準確。

[1] 汪琢, 姜守剛, 郭曉帆,等.刺五加中異嗪皮啶提取工藝優化及其抗腫瘤、抗氧化活性研究[J].天然產物研究與開發,2015, 27(6):1092-1098.

[2] 范惠霞, 鄧志鵬, 王福文,等.刺五加注射液在正常大鼠與腦缺血-再灌注損傷疾病大鼠體內藥動學比較[J].中成藥,2015, 37(6):1215-1221.

[3] 樊星, 閆靜.刺五加的研究進展[J].醫藥,2016(1):00297-00297.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部.北京:化學工業出版社,2010:192-193..

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1672-5018（2017）05-279-01