崇明地區(qū)2014年單增李斯特菌監(jiān)測(cè)檢測(cè)結(jié)果

張蓓潔 蔡藕菊 李娉婷

崇明疾病預(yù)防控制中心 上海 202150

崇明地區(qū)2014年單增李斯特菌監(jiān)測(cè)檢測(cè)結(jié)果

張蓓潔 蔡藕菊 李娉婷

崇明疾病預(yù)防控制中心 上海 202150

了解崇明地區(qū)常見食品中單增李斯特菌的污染情況。方法：每月隨機(jī)采取3類食品共216份，采用國(guó)標(biāo)法進(jìn)行增菌，分離，初篩，鑒定。結(jié)果：從216份標(biāo)本中共檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌8份（未做其他分型），檢出陽(yáng)性率為3.70%。3類食品污染情況依次是新鮮生肉，冷凍生肉，蔬菜結(jié)論：崇明地區(qū)的3類食品不同程度的受到單增李斯特菌的污染，應(yīng)引起重視。

單增李斯特菌，食品，污染

李斯特菌（Listeria monocytogenes），又名單核細(xì)胞增多性李斯特菌、李氏菌，是一種兼性厭氧細(xì)菌，為李斯特菌癥的病原體。李斯特菌是革蘭氏陽(yáng)性菌，屬厚壁菌門，取名自約瑟夫·李斯特。它主要以食物為傳染媒介，是最致命的食源性病原體之一[1] 。李斯特菌在環(huán)境中廣泛存在，在很多食品中能找到李斯特菌。肉類、蛋類、禽類、海產(chǎn)品、乳制品、蔬菜等都已經(jīng)被證實(shí)是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒嚴(yán)重的可引起血液和腦組織感染，2000年WHO食品安全工作將其列為重點(diǎn)檢測(cè)的食源性致病菌之一。我們?cè)诒究h每月采樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果如下：

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源 每月采集 3類食品蔬菜，生豬、牛、雞、鴨肉等樣品，2014年共216份,均來(lái)自縣超市及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，肉類一部分為新鮮，一部分為冷凍食品。

1.2 培養(yǎng)基與試劑 李氏增菌液LB(LB1、LB2) 、PALCAM瓊脂、三糖鐵瓊脂、SIM動(dòng)力培養(yǎng)基、TSB—YE肉湯、TSA-YE瓊脂、1%萘啶酮酸鈉鹽、1%鹽酸吖啶黃、來(lái)源于上海市疾病預(yù)防控制中心，在有效期內(nèi)使用。甲基紅和V-P，糖發(fā)酵管，來(lái)源于杭州天和生物有限公司，在有效期內(nèi)使用。李斯特顯色培養(yǎng)基來(lái)源于科瑪嘉生物有限公司，在有效期內(nèi)使用。APIlisteria 103000生化鑒定試劑盒 ，來(lái)源于生物-梅里埃公司。

1.3 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱、電子天平 細(xì)菌鑒定儀

1.4 參考菌株 單核細(xì)胞增生李斯特菌 ATCC 54002

1.5 方法

1.5.1 增菌 按照國(guó)標(biāo)[2]以無(wú)菌操作取樣品25g(mL)加入到含有225 mL LB1增菌液的均質(zhì)袋中，在拍擊式均質(zhì)器上連續(xù)均質(zhì) 1min-2min;或放入盛有225mL LB1增菌液的均質(zhì)杯中，8000r/min-10000r/min均質(zhì)1min-2min.于30oC±1 oC培養(yǎng)24h，移取0.1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL LB2增菌液內(nèi)，于30oC±1 oC培養(yǎng)18 h -24h。

1.5.2 分離 取LB2二次增菌液劃線接種于PALCAM瓊脂平板和李斯特氏顯色培養(yǎng)基上，于 36oC±1 oC培養(yǎng) 24h-48h，觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落。典型菌落在 PALCAM瓊脂平板上為小的圓形灰綠色菌落，周圍有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷；典型菌落在科瑪嘉李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上為小的圓形藍(lán)色菌落，周圍有白色暈圈。

1.5.3 初篩 自選擇性瓊脂平板上分別挑取5個(gè)以上典型或可疑菌落，分別接種于木糖、鼠李糖發(fā)酵管，于36oC±1 oC培養(yǎng)24h；同時(shí)在 TSA-YE平板上劃線純化，于 30oC±1 oC培養(yǎng)24h-48h。選擇木糖陰性、鼠李糖陽(yáng)性的純培養(yǎng)物繼續(xù)進(jìn)行鑒定。

1.5.4 鑒定方法 經(jīng)過(guò)上述增菌、分離、初篩出可疑菌落對(duì)其進(jìn)行革蘭染色鏡檢、觸酶試驗(yàn)及溶血試驗(yàn)，若結(jié)果為革蘭，陽(yáng)性短小桿菌，傘形或月牙形生長(zhǎng)，血平板有狹小透明溶血環(huán)，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性，MR-VP +/+的可疑培養(yǎng)物接種于APIlisteria 103000生化鑒定試劑盒進(jìn)行鑒定。

2.結(jié)果

2.1 三類食品中李斯特菌的檢出情況 從216份標(biāo)本中共檢出單核細(xì)胞增生性李斯特菌 8份（未做其他分型），檢出陽(yáng)性率為 3.70%。各類食品的檢出情況：新鮮生肉 48份，檢出陽(yáng)性率為8.33%，冷凍生肉72份，檢出陽(yáng)性率為4.17%.蔬菜96份，檢出陽(yáng)性率為1.04%。（見表1）

表1 各類食品中單增李斯特菌的污染檢出情況

2.2 8株單增李斯特菌的生化試驗(yàn)結(jié)果 8株單增李斯特菌均在血平板上有狹小透明溶血環(huán)，過(guò)氧化氫酶+，MR-VP +/+，觸酶+，木糖-、鼠李糖+, 七葉苷+，APIlisteria 103000生化鑒定試劑盒鑒定結(jié)果為單核細(xì)胞增生性李斯特菌。

3 討論

單增李斯特菌在自然界中廣泛存在，可以引起蔬菜和食品的污染，從而引起食物中毒。我國(guó)目前沒有大規(guī)模的單增李斯特菌引起的食物中毒，但日常監(jiān)測(cè)中食品上檢出的情況，提示我們因單增李斯特菌引起食源性疾病的可能性。崇明地區(qū)216份樣品中單核增生性李斯特菌的污染率為 3.70%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道基本一致[3,4]，表明崇明地區(qū)存在單核增生性李斯特菌引起食源性疾病的可能性，應(yīng)引起我們的高度重視，加強(qiáng)食品的管理。

本次的監(jiān)測(cè)中新鮮生肉(雞肉、豬肉、牛肉、羊肉各一份)的單增李斯特菌檢出率為8.33%，提示了上述各種肉類均存在食源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)冷凍生肉的單增李斯特菌檢出率為4.17%，提示冷凍后的肉類仍能檢出單增李斯特菌。單增李斯特菌能在冷藏條件（4 oC）下生長(zhǎng)繁殖，但冷凍后（-20 oC）也能檢出該菌，但冷凍后檢出的單增李斯特菌是否具有致病性，值得進(jìn)一步研究。

[1][美]杰伊，[美]羅西里尼，[美]戈?duì)柕?現(xiàn)代食品微生物學(xué)，北京 ：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008.

[2]林秋云 食品中李斯特菌污染調(diào)查極其改良檢驗(yàn)方法[B].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006,6(7):1247-1248.

R473.5

A

1672-5018（2017）05-215-01