補腎化痰祛瘀中藥對多囊卵巢模型大鼠胰島素樣生長因子-1及血清腫瘤壞死因子-α的影響

姬 霞 傅金英 周艷艷 曹俊紅 李 琳 胡俊攀

(河南省中醫院，河南 鄭州 450002)

補腎化痰祛瘀中藥對多囊卵巢模型大鼠胰島素樣生長因子-1及血清腫瘤壞死因子-α的影響

姬 霞 傅金英 周艷艷 曹俊紅 李 琳 胡俊攀

(河南省中醫院，河南 鄭州 450002)

目的探討補腎化痰祛瘀中醫方劑對多囊卵巢模型大鼠卵巢組織中胰島素樣生長因子(IGF)-1及大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響。方法使用皮下注射脫氫表雄酮(DHEA)法誘導多囊卵巢綜合征(PCOS)同種系雌性大鼠20只，分為模型組與中藥組各10只，另取10只正常大鼠作為正常組。中藥組大鼠給予補腎化痰祛瘀中藥方劑灌胃4 w，治療前后各取血一次，檢驗全血IGF-1及血清TNF-α的水平。結果實驗前，模型組大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕與中藥組〔IGF-1(64.13±13.55)μg/ml、TNF-α(1.74±0.22)ng/ml〕比較無統計學差異(P>0.05)，而模型組和中藥組的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明顯高于正常組〔(29.89±11.47)μg/ml〕、〔(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；實驗后模型組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明顯高于正常組〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),試驗后中藥組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型組(P<0.05),而中藥組大鼠IGF-1和TNF-α水平與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論補腎化痰祛瘀方劑可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平，穩定大鼠卵巢內分泌功能紊亂，改善大鼠生殖功能。

補腎化痰祛瘀；多囊卵巢綜合征；胰島素樣生長因子-1；腫瘤壞死因子-α

多囊卵巢綜合征(PCOS)是一種以長期無排卵、雄激素過多、多毛、肥胖、月經失調等為主要特征的育齡期婦女常見的內分泌異常綜合征〔1〕。我國傳統醫學并無此癥的專有名詞，將其歸為“崩漏”“閉經”“不孕”等范疇，認為其根本在于腎，腎藏精，主生殖〔2〕。本實驗擬探究補腎化痰祛瘀中醫方劑對PCOS模型大鼠卵巢組織中胰島素樣生長因子(IGF)-1及血清腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響，旨在開辟治療PCOS的傳統中藥新思路。

1 材料與方法

1.1動物 清潔級同種系雌性大鼠30只，由黑龍江中醫藥大學動物實驗中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(黑)2013-004，使用許可證號：SYXK(黑)2013-012。平均體重(55±15)g，實驗前于實驗室內飼養1 w以適應環境，室溫18℃～25℃。隨機平均分為三組，每組10只，分別為正常組、模型組和中藥組。

1.2藥物及試劑

1.2.1補腎化痰祛瘀方劑組成 菟絲子、仙靈脾、肉蓯蓉、枸杞、黃芪、黨參、白術、茯苓、薏苡仁、厚樸、當歸、川芎等，中藥飲片購自河南省中醫院中藥房，劑量通過人-大鼠相關計算公式換算而進行轉換。

1.2.2試劑 脫氫表雄酮(DHEA)：北京百靈威科技有限公司；注射用大豆油(藥用級)，250 ml/瓶，上海阿拉丁生化科技股份有限公司C1526031。血清TNF-α放射免疫法分析試劑盒：上海酶研生物科技有限公司EK-R31092；大鼠IGF-1酶聯免疫試劑盒：上海勁馬實驗設備有限公司201507。

1.3模型制作 參考相關文獻〔3〕采用皮下注射DHEA的方法，在預實驗中成功復制出PCOS大鼠模型，即模型組和中藥組大鼠每天稱重后，給予DHEA 6 mg/100 g體重+0.2 ml注射用大豆油經頸背部皮下注射，正常組在同一時間段注射大豆油0.2 ml/只，連續20 d。

1.4給藥方案 于第21天起(即造模結束后1 d)，實驗大鼠接受藥物治療，正常組和中藥組的實驗大鼠給予補腎化痰祛瘀中藥方劑灌胃4 w，2次/d，模型組大鼠則正常飼養。

1.5檢驗指標 治療前后各取血一次，離心分離血清后，使用放射免疫法檢測全血IGF-1及血清TNF-α的水平。

2 結 果

實驗前，模型組大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕與中藥組的〔(64.13±13.55)μg/ml、(1.74±0.22)ng/ml〕比較差異無統計學意義(P>0.05)，而模型組和中藥組的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明顯高于正常組〔(29.89±11.47)μg/ml、(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；實驗后模型組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明顯高于正常組〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),試驗后中藥組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型組(P<0.05),而中藥組大鼠IGF-1和TNF-α水平與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討 論

PCOS是育齡期婦女最常見疾病之一，患者的卵巢形態學改變主要表現為雙側卵巢增大，多個囊性卵泡被一層囊膜覆蓋著，并呈囊性和硬化改變〔4〕。近年來，大量的臨床研究表明PCOS 是由神經系統、內分泌系統和代謝系統機制調節失衡引起的惡性循環和多發反饋失調而引起的一系列癥狀〔5〕。

IGF-1是一種編碼基因位于12號染色體的單鏈堿性蛋白，其功能和結構與胰島素類似，主要由肝臟分泌，具有參與促進新陳代謝、加快細胞有絲分裂等胰島素樣生物學效應〔6〕，IGF-1亦可由卵巢合成，促進卵巢性激素分泌，尤其是雄性激素的分泌，調節卵泡發育，參與卵巢的正常生殖功能〔7〕。另外,IGF-1可活化細胞色素裂解酶，并協同胰島素抑制肝臟合成，從另一條路徑升高雄性激素〔8，9〕。而本實驗結果說明IGF-1水平升高與PCOS具有一定的聯系。其機制為胰島素和IGF-1的過度作用,使卵巢對黃體生成素(LH)的敏感性增加,增加卵泡募集數,導致正常卵泡閉鎖不發生或減少；另一方面，局部產生大量的雄激素，造成發育到一定階段的卵泡發育停止或者延長,而高胰島素和IGF-1對原始卵泡不斷啟動,從而促進多囊卵巢形成，無法產生優勢卵泡并導致無排卵的持續化〔10〕，故推測胰島素和IGF-1通過多種路徑促進雄激素大量合成，并成為PCOS發病的機制之一。補腎化痰祛瘀方劑能有效降低大鼠血中IGF-1水平，減少IGF-1對卵巢內分泌的刺激。

TNF-α可影響卵泡膜細胞和卵巢顆粒細胞類固醇激素的分泌，調節卵細胞凋亡，是卵巢功能調節因子之一，并影響外周組織的胰島素敏感性、升高局部雄性激素水平〔11〕。本實驗說明PCOS發病時，TNF-α亦起到了一定的影響，且高水平的TNF-α可刺激白細胞介素(IL)-6的合成與分泌，IL-6可通過抑制顆粒細胞FSH誘導而生成的E2，從而影響卵泡發育，是卵巢內分泌的調解因子〔12〕。補腎化痰祛瘀方劑亦可降低大鼠血中TNF-α水平，是阻斷卵巢內分泌紊亂的另一條路徑。

綜上所述，補腎化痰祛瘀方劑可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α的水平，穩定大鼠卵巢內分泌功能，改善大鼠生殖功能。補腎化痰祛瘀中藥方劑有望成為臨床治療PCOS的另一種有效手段。

1Liu SY,Li X,Zheng Y.Study of combined use of clomiphene citrate and gonadotropins on the infertile patients with PCOS〔J〕.J Reprod Contracep,2012;23(3):159-68.

2王秀萍.補腎化痰活血法治療PCOS不孕不育的臨床效果〔J〕.光明中醫,2016;31(20):2971-2.

3梁東輝，宗利麗.羅頌平教授治療多囊卵巢綜合征的臨床經驗〔J〕.環球中醫藥，2014;7(9)：719-21.

4Gladchuk IZ,Semenyuta OM,Onyshchenko YV.Clinical effectiveness of the various approaches for infertility treatment in women with PCOS and hyperprolactinemia〔J〕.中國現代醫學雜志,2014;24(16):1-4.

5Wang Y,Li Y,Xu F,etal.Apolipoprotein B/Apolipoprotein A1 ratio is associated with sex hormone binding globulin and may be an indicator of metabolic syndrome in PCOS women〔J〕.J Reprod Contracep,2015;26(4):213-21.

6任小胖,劉梅梅,陳 亮,等.多囊卵巢綜合征患者血清核因子-κB和轉化生長因子β1的表達及其與胰島素抵抗的相關性研究〔J〕.生殖與發育醫學,2013;33(8):529-33.

7楊 芳.胰島素、雄激素、胰島素樣生長因子、血管內皮生長因子對多囊卵巢綜合征患者卵泡發育的影響〔J〕.生殖與發育醫學,2013;33(6):413-7.

8裴劉成,趙 杰.胰島素樣生長因子在PCOS病人卵泡液及顆粒細胞中的表達〔J〕.內蒙古醫學院學報,2012;34(3):225-8.

9Qian Y,Wu H,Xi XW.Is there a relationship between polycystic ovary syndrome and endometriosis〔J〕.J Reprod Contracep,2011;22(3):177-82.

10楊志華,趙淑萍,馬德花.多囊卵巢綜合征患者血清IGF-1水平與胰島素抵抗〔J〕.中國優生與遺傳雜志,2012;20(5):90-1.

11蘭 楠,王 爽.復方麥芽丸對PCOS模型大鼠IL-6、TNF-α表達的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2016;32(3):136-40.

12孫 林,王海燕,邵小光.卵泡液氧化應激指標對PCOS患者IVF結局的影響〔J〕.黑龍江醫藥,2016;29(1):49-52.

〔2016-12-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

河南省中醫藥管理局科研課題(2014ZY02013)

傅金英(1968-)，女，主任醫師，主要從事多囊卵巢綜合征研究。

姬 霞(1968-)，女，副主任醫師，主要從事生殖內分泌研究。

R28

A

1005-9202(2017)16-3927-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.008