維生素E對小鼠出血時間、凝血時間和紅細胞滲透脆性的影響

謝國云+何明亮+范文鳳+黃碧隆+黃麗碧+韋選雷+陸秀重+王彩冰

【摘要】目的觀察維生素E（VE）對小鼠出血時間（BT）、凝血時間（CT）和紅細胞滲透脆性（ROF）的影響。方法取昆明種小鼠50只，隨機平均分為正常對照組（給予0.9%NaCl注射液）、酚磺乙胺組（給予酚磺乙胺40 mg/ml）、肝素組（給予肝素0.03 mg/ml）、VE低濃度組和高濃度組（分別給予VE 2.5、5.0 mg/ml）灌胃，灌胃量按小鼠體重（0.01 ml/g）計算，每天1次，連續14天。在末次灌胃后30 min用斷尾法檢測BT，用玻片法檢測CT，用摘除眼球法取血檢測ROF。結果VE高濃度組和肝素組的BT明顯長于正常對照組、酚磺乙胺組（P<0.01），VE高濃度組與肝素組的BT比較無統計學意義（P>0.05）；VE高濃度組、VE低濃度組、正常對照組的CT兩兩比較無統計學意義（P>0.05），酚磺乙胺組的CT明顯短于其余4組（P<0.01），肝素組的CT明顯長于其余4組（P<0.01）；各組的紅細胞開始破裂的NaCl溶液濃度兩兩比較無統計學意義（P>0.05）。結論VE不影響血液凝固和紅細胞膜穩定性，能延長生理性止血時間，此作用存在量效關系。

【關鍵詞】維生素E；出血時間；凝血時間；紅細胞滲透脆性；小鼠

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.04.018

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of vitamin E（VE）on bleeding time（BT），clotting time（CT）and red cell osmotic fragility（ROF）in mice.Methods50 Kunming mice were randomly divided into normal control group（given 0.9% of NaCl by injection），etamsylate group（given 40 mg/ml of etamsylate by intragastric administration）and heparin group（given 0.03 mg/ml of heparin by intragastric administration），VE low concentration group and high concentration group（given 2.5 and 5.0 mg/ml of VE by intragastric administration，respectively），with 10 case in each group.The amount of gastric lavage was calculated according to the body weight of mice（0.01 ml/g），once a day，for 14 consecutive days.30 min after the last intragastric administration，tail-cutting method was used to measure BT，slide method was used to detect CT，and eyeball enucleation was used to collect blood to detect ROF.ResultsThe BT in the VE high concentration group and the heparin group was longer than that in the normal control group and the etamsylate group（P<0.01），there was no statistically significant difference in BT between the VE high concentration group and the heparin group（P>0.05）.There was no statistically significant difference in the CT between the VE high concentration group，the VE low concentration group and the normal control group（P>0.05）.The CT of the etamsylate group was shorter than that of the other four groups（P<0.01），but the CT of the heparin group was significantly longer than that of the other four groups（P<0.01）.There was no statistical significance in the concentration of NaCl solution in which the red blood cells began to burst in pairwise comparison between each group（P>0.05）.ConclusionVE has no effect on blood coagulation and erythrocyte membrane stability，it can prolong physiological hemostasis time，and there is dose effect relationship in this effect.

【Key words】VE；BT；CT；ROF；miceendprint

維生素E（Vitamin E，VE）又稱生育酚，是一種很強的脂溶性抗氧化劑，能清除自由基和維持細胞膜的正常結構[1]。近年研究發現，VE對心、肝、腎、胃等器官有保護作用[2～5]，但尚未發現有VE對出血時間（Bleeding time，BT）、凝血時間（clotting time，CT）和紅細胞滲透脆性（Red cells osmotic fragility，ROF）影響的報道。本實驗利用VE、酚磺乙胺、肝素的臨床用量[6]換算為小鼠灌胃量給小鼠灌胃后，檢測小鼠的BT、CT和ROF，并與臨床常用的促凝血藥酚磺乙胺和抗凝血藥肝素作比較分析，明確VE對血液系統的生理特性影響，為臨床用藥提供實驗依據。

1材料與方法

1.1實驗動物昆明種健康雄性KM小鼠50只，體重20～30 g，由右江民族醫學院實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號：SYXK 桂2011-0010，實驗動物生產許可證號：SCXK桂2012-0003。

1.2藥品維生素E溶液（桂林南藥股份有限公司，批號：151201）、酚磺乙胺注射液（四川美大康華康藥業有限公司，批號：15070917）、肝素（南京新百藥業有限公司，批號：H32025851）、0.9%NaCl注射液（廣西裕源藥業有限公司，批號：L16062904）。

1.3實驗方法將小鼠隨機平均分為5組，正常對照組、酚磺乙胺組、肝素組、VE低濃度組和VE高濃度組。正常對照組給予0.9%NaCl注射液，酚磺乙胺組給予40 mg/ml酚磺乙胺注射液，肝素組給予0.03 mg/ml肝素，VE低濃度組和高濃度組分別給予2.5、5.0 mg/ml VE溶液灌胃，灌胃量均按小鼠的體重計算（0.01 ml/g），每天1次，連續14 d。

1.4小鼠的BT檢測末次給藥灌胃前禁食12 h，禁水2 h，末次給藥灌胃后30 min將小鼠置于固定器中，用手術剪剪斷小鼠尾尖3 mm，每隔15 s 用濾紙輕吸尾尖自行溢出的血液直至出血停止，記錄斷尾至出血停止時間為BT（即生理性止血時間）。由專人進行檢測并觀察結果。

1.5小鼠的CT檢測檢測BT后，用手術剪剪斷小鼠尾尖3 mm，用濾紙吸去第一滴血再將血滴在清潔的玻片上，血滴直徑約5 mm，每隔15 s 用清潔干燥的大頭針從血滴邊緣向內輕挑1次，直至挑起出現纖維蛋白絲為止，記錄血滴到玻片至挑起出現纖維蛋白絲時間為CT。由專人進行檢測并觀察結果。

1.6小鼠的ROF檢測檢測CT采血后，使用摘除眼球法取血放入肝素鈉采血管，分別向盛有濃度遞減（0.60%、0.58%、0.56%、0.54%、0.52%、0.50%、0.48%、0.46%、0.44%、0.42%、0.40%、0.38%、0.36%、0.34%、0.32%、0.30%）的低滲NaCl溶液試管中滴入0.1 ml血液，在37℃環境中靜置1 h，從高濃度開始依次觀察并記錄試管上清液開始呈現淺紅色（即紅細胞開始破裂）的Nacl溶液濃度為ROF。由專人進行檢測并觀察結果。

1.7統計學方法利用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析，計量資料符合正態分布采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2結果

VE高濃度組和肝素組的BT明顯長于正常對照組、酚磺乙胺組（P<0.01），VE高濃度組與肝素組的BT比較無統計學意義（P>0.05），VE低濃度組的BT與其余4組相比較無統計學意義（P>0.05）；VE高濃度組、VE低濃度組、正常對照組的CT兩兩比較無統計學意義（P>0.05），酚磺乙胺組的CT明顯短于其余4組（P<0.01），肝素組的CT明顯長于其余4組（P<0.01）；各組的ROF兩兩比較無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3討論

酚磺乙胺、肝素都是臨床常用促凝血藥，在本實驗結果顯示，酚磺乙胺組的凝血時間明顯短于正常對照組，提示酚磺乙胺通過促進凝血達到止血作用；肝素組的出血時間和凝血時間均明顯長于正常對照組，提示肝素通過延長出血時間和凝血時間達到抗凝血作用；說明用于本研究的小鼠對促凝血藥物和抗凝血藥物有正常反應的效果，提示本研究中VE對出血時間和凝血時間影響的結果可靠。由于肝素為紅細胞滲透脆性試驗的理想抗凝劑[7]，因此本實驗的血標本抗凝處理環節采用肝素作為抗凝劑。

本研究結果顯示，VE低濃度組的出血時間與正常對照組比較無統計學意義，VE高濃度組的出血時間明顯長于正常對照組，但VE低濃度組和VE高濃度組的出血時間與肝素組比較無統計學意義，說明VE能的延長生理性止血時間，此作用存在量效關系，該作用與肝素的效果相當；VE低濃度組和VE高濃度組的凝血時間與正常對照組比較無統計學意義，但明顯長于酚磺乙胺組、短于肝素組，說明VE不影響血液凝固過程；各組的紅細胞滲透脆性濃度兩兩比較無統計學意義，說明VE、酚磺乙胺、肝素的紅細胞滲透脆性正常，同時提示這些物質都不影響紅細胞膜的穩定性。本研究結果提示VE不影響血液凝固和紅細胞膜穩定性，能延長生理性止血時間。

綜上所述，VE對心、肝、腎、胃等器官有保護作用，還能抗衰老，增加機體的免疫力和記憶力等[2～5，7～9]，但VE用于保健和治療時，并不適合所有機體的應用，VE能延長生理性止血時間，從而提示我們患有血液病（如血小板減少癥、再生障礙性貧血、白血病、血友病等）和可能導致出血的疾病（如高血壓病）及手術病人、產婦要禁用或慎用VE，而血液易凝固的疾病（如腦栓塞、肺栓塞、心肌栓塞等）可作為輔助治療藥物。

從生理學角度分析，生理性止血包括小血管收縮、血小板止血栓形成、血液凝固等三個過程[10]，本研究結果表明VE不影響血液凝固和紅細胞膜穩定性，但能延長生理性止血時間，提示VE延長生理性止血時間可能通過影響小血管收縮、血小板止血栓形成的環節實現，又有資料表明VE能抑制血小板聚集而防止血栓形成[6]，但VE是否影響小血管收縮還有待于今后的研究證實。

參考文獻

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