高效液相色譜法測定黃梔膠囊中黃芩苷的含量

劉東凱，祖麗紅

(1.鄭州市兒童醫院藥學部, 河南 鄭州 450000； 2.鄭州市中醫院藥劑科，河南 鄭州 450000)

·藥學研究·

高效液相色譜法測定黃梔膠囊中黃芩苷的含量

劉東凱1，祖麗紅2

(1.鄭州市兒童醫院藥學部, 河南 鄭州 450000； 2.鄭州市中醫院藥劑科，河南 鄭州 450000)

目的：建立黃梔膠囊中黃芩苷的含量測定法。方法：采用高效液相色譜HPLC法對方中黃芩進行含量測定。結果：本品中黃芩苷含量測定的線性范圍為0.10～1.25 μg，r=0.999 98，平均回收率為96.21 %，RSD為1.3%。結論：鑒別和含量測定方法簡便可靠、重復性好，可有效控制黃梔膠囊的質量。

黃梔膠囊;TLC;HPLC;黃芩苷；質量標準

黃梔膠囊是由黃芩、梔子、桔梗、石膏組成的醫院制劑，具有清熱解毒、瀉火等功效，主治氣血均熱、發熱等癥。為了控制該制劑質量，筆者對該制劑質量控制方法進行研究，對處方的主藥黃芩中黃芩苷的含量采用高效液相色譜法進行測定，結果滿意。

1 藥品、試劑與儀器

黃梔膠囊，由鄭州市中醫院制劑室提供，批號20151101，20151102，20151103。黃芩苷，含量測定用，由中國藥品生物制品鑒定所提供，批號111595-200604；甲醇，色譜純，迪馬公司產品，批號70150，其他所用試劑為分析純。LC-10Avp高效液相色譜儀、 LC-10Avp泵、SPD-M10Avp二極管陣列檢測器、class-vp色譜工作站，均為日本島津公司產品；ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，大連依力特公司產品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為甲醇-水-磷酸(48∶52∶0.2)，流速1 mL/min；檢測波長280 nm。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于 5 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品6.25 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得含黃芩苷50 mg/L的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內容物約0.1g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲提取30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定波長的選擇

吸取黃芩苷對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，并進行光譜掃描。結果:供試品黃芩苷對照品在280 nm左右有強吸收。參照《中國藥典》2015版一部黃芩項下的含量測定波長，選定本品的測定波長為280 nm。

2.5 標準曲線的繪制

精密吸取對照品溶液 2,5,10,15,20,25 μL，注入液相色譜儀中，測定，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線,得到：y=3.14×106x-8.16×103，r=0.999 9。結果表明：黃芩苷進樣量在0.10～1.25 μg之間線性關系良好，且為近乎過原點的直線。因此，可以采用外標一點法進行測定。

2.6 陰性對照試驗

按處方比例稱取除黃芩以外的各味藥材，按其制備工藝制得黃芩陰性對照樣品，按2.3項下方法制得黃芩陰性對照溶液。取供試品溶液、黃芩苷對照品溶液和缺黃芩陰性對照溶液，分別進樣測定。結果：供試品色譜中，在與對照品色譜相對應的保留時間出現色譜峰，而黃芩陰性對照溶液在相對應的保留時間無色譜峰出現。見圖1。

2.7 穩定性試驗

對同一供試液間隔一定時間進樣10 μL，測定黃芩苷峰面積，考察8 h內供試液的穩定性。結果：黃芩苷峰面積的平均值為2 027 952.8，RSD為1.92%(n=6)。結果表明：供試液在8 h內穩定。

2.8 精密度試驗

取同一對照品溶液，按含量測定方法進行測定，每次進樣量均為10 μl，共測定6次，以考察其精密度。結果：黃芩苷峰面積的平均值為1 566 274.2，RSD=0.28%(n=6)。結果表明：進樣精密度良好。

2.9 重復性試驗

取同一批號的樣品，按含量測定方法平行制備5份供試液，分別進樣測定。結果：黃芩苷的平均含量為10.69 mg/粒， RSD為1.1%(n=5)。結果表明：本方法的重復性良好。

A.黃芩苷對照品；B.供試品；C.黃芩陰性對照；1.黃芩苷

圖1 HPLC色譜圖

2.10 回收率試驗

取已知含量的樣品(含量為10.69 mg/粒，即35.64 mg/g)研細，取適量，精密稱定，精密加入質量分數為0.300 6 g/ mL的黃芩苷對照品溶液5 mL，按本品含量測定項下供試品溶液的制備方法操作，制備加樣回收試驗供試品溶液，并測定其中黃芩苷的含量。結果：平均加樣回收率為96.21%,RSD=1.83%(n=6)。表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.11 含量測定

取3批黃梔膠囊樣品，按質量標準含量測定項下方法操作，測定其中的黃芩苷含量，結果見表2。暫定本品每粒中含黃芩以黃芩苷計，不得少于7.5 mg。

表2 3批樣品含量測定結果

3 小 結

本品為中藥復方制劑，黃芩為方中主要藥味,黃芩中主要含有黃芩苷等成分。《中國藥典》黃芩藥材項下采用高效液相色譜法測定黃芩苷[1],有關黃芩苷含量測定方法的研究報道亦較多[2-5]。筆者參照《中國藥典》及文獻方法，通過試驗建立了該制劑中黃芩苷的含量測定方法。結果表明：黃芩苷與相鄰成分的分離度達到分析要求，且陰性對照中在黃芩苷峰相應的位置無干擾成分。因此確定以黃芩苷的含量作為控制本品內在質量的定量指標。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015：301.

[2]郭琪，閆艷，王海波，等.HPLC 波長切換法同時測定清熱解毒顆粒中 8 個成分的含量[J].藥物分析雜志，2015，35(9)：1601-1605.

[3]趙亮，王新霞，呂磊. HPLC 法測定清肝散結顆粒中黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芪苷、黃芩素及漢黃芩素[J].中成藥，2014，36(2):313.

[4]張勝娜，吳素香，薛海娜，等.HPLC 法同時測定小兒雙解止瀉顆粒中葛根素和黃芩苷的含量[J].中國藥師，2015，18(5)：863-805.

[5]王惠娟, 王力, 劉艷新.牛黃解毒片中黃芩苷的HPLC 法測定結果的不確定度評定研究[J].中草藥,2011, 42(7): 1326-1329.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)08-0070-03

R284.1

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.08.30

2017-02-26；

2017-07-18