鹽酸文拉法辛膠囊的有關物質測定方法的建立

黃艷楊雪峰陳雪云符乃光鐘霞*

（1．海南醫學院藥學院，海南 海口 571199；2．海口南陸醫藥科技股份有限公司，海南 海口 570311）

鹽酸文拉法辛膠囊的有關物質測定方法的建立

黃艷1楊雪峰2陳雪云2符乃光1鐘霞1*

（1．海南醫學院藥學院，海南 海口 571199；2．海口南陸醫藥科技股份有限公司，海南 海口 570311）

目的建立高效液相色譜法測定鹽酸文拉法辛膠囊的有關物質。方法采用symmetry C8（250 mm×4.6 mm,5 μm），乙腈-0.1mol?L-1磷酸二氫銨溶液（30∶70）為流動相，檢測波長為230 nm；流速0.8 mL·min-1。結果文拉法辛與相鄰雜質峰以及各雜質峰之間的分離度均大于1.5，檢測限為0.4～1.6ng，定量限為1.6～6.5ng，供試品溶液8h內有一定的降解，溶液應臨用新制。結論該方法簡便、靈敏和準確，適用于文拉法辛膠囊有關物質的測定。

高效液相色譜法；文拉法辛；有關物質

文拉法辛為苯乙胺衍生物，是一種全新的抗重性抑郁癥藥，主要藥理機制為抑制突觸前膜對5-羥色胺(5-HT)及去甲腎上腺素(NE)的再攝取，增強中樞5-HT及NE神經遞質的功能，發揮抗抑郁作用，對于抑郁病人，可用于治療抑郁癥和廣泛性焦慮癥,具有起效快,療效可靠,不良反應輕微,可用于長期治療的特點[1]。一般用藥1～2周后即可出現明顯抗抑郁作用，比某些三環類抗抑郁藥(TCA)起效快，且不良反應輕微，適宜長期服用[2-3]，應用前景良好。本文建立了高效液相色譜法，對自制的文拉法辛膠囊的有關物質進行檢查。該法簡便、靈敏、準確。

1 儀器與試藥

Agilent1220液相色譜儀，Ezchrom Elite色譜工作站，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，磷酸二氫銨為分析純，鹽酸文拉法辛膠囊（自制，批號為140301、140302、140303）；鹽酸文拉法辛對照品（中檢院，批號為100543-200401）；雜質a對照品（USP，批號為F01357）、雜質b對照品（TRC，批號為3-VCP-179-1）、雜質c對照品（TRC，批號為8-GJF-54-4）、雜質d對照品（molcan corporation，批號為130312）、雜質e對照品（TLC，批號為1530-034A5），雜質f對照品（TRC，批號為4-VCP-13-3）。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

取裝量差異項下的內容物，混合均勻，精密稱取適量，加流動相制成每1ml中含鹽酸文拉法辛0.4mg的溶液，濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密量取適量，加流動相制成每1ml中含4μg的溶液，作為對照溶液。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗[4-5]

色譜柱為symmetry C8（250 mm×4.6 mm,5 μm）；以乙腈-0.1mol/L磷酸二氫銨溶液（30:70）為流動相；檢測波長為230 nm；流速0.8 mL·min-1。

分別精密稱取鹽酸文拉法辛及雜質a、b、c、d、e、f對照品適量，分別加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含各對照品10μ g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；分別精密量上述各種對照品溶液1mL混合均勻，作為混合溶液；精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，混合溶液結果見圖1。理論塔板數按鹽酸文拉法辛主峰計算為12593，鹽酸文拉法辛與相鄰雜質峰的分離度均大于1.5，各雜質峰之間的分離度均大于1.5。

圖1 混合溶液色譜圖

2.3 1%對照溶液進樣精密度試驗

取2.1項下的對照溶液20μL注入液相色譜儀，連續進樣6次測定，結果主峰峰面積的RSD為0.26%。表明方法的進樣精密度良好。

2.4 專屬性試驗

2.4.1 破壞性實驗精密稱取140301批樣品（約含鹽酸文拉法辛20mg），共6份，分別置50 mL量瓶中，按以下條件試驗：一份加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；一份加10ml流動相使溶解，再加1%的過氧化氫溶液5ml，搖勻，室溫放置2小時，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；一份于4500±500lx照射10天，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；一份加10ml流動相使溶解，加0.1mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置4小時，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；一份加10ml流動相使溶解，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，室溫放置4小時，用0.1mol/L鹽酸溶液5ml中和，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液；一份加10ml流動相使溶解，置沸水浴中加熱1小時，取出，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。分別精密量取上述6種溶液各20 μL注入液相色譜儀分析，結果見圖2（a～f）。

2.4.2 溶劑與輔料干擾實驗按處方比例取本品的混合輔料適量，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別精密量取20 μL溶劑及續濾液注入液相色譜儀分析，結果見圖2（g～h）。結果表明：本品溶劑及空白輔料對供試品的測定不造成干擾作用。

圖2 專屬性試驗色譜圖a.未經破壞樣品 b.氧化破壞 c.光照破壞 d.酸破壞e.堿破壞 f.高溫破壞 g.溶劑 h.空白輔料

2.5 檢測限和定量限

分別精密稱取鹽酸文拉法辛及雜質a、b、c、d、e、f對照品適量，分別加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含各對照品10μ g的溶液，再分別逐級稀釋，取20 μL注入液相色譜儀，經分析，文拉法辛的檢測限為0.4ng（S/N≈3），定量限為1.6ng（S/N≈10）；雜質a的檢測限為1.6ng（S/N≈3），定量限6.5ng（S/N≈10）；雜質b的檢測限為0.9ng（S/N≈3），定量限1.7ng（S/N≈10）；雜質c的檢測限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）；雜質d的檢測限為1.3ng（S/N≈3），定量限2.5ng（S/N≈10）；雜質e的檢測限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）；雜質f的檢測限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）。

2.6 重復性和溶液穩定性試驗

取140301批樣品6份，精密稱定，照2.1項下的方法制備溶液，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算雜質量，結果單個最大雜質量的RSD為1.89%，總雜質量RSD為1.76%，表明方法重復性良好。取其中一份溶液，分別放置0h、2h、4h、6h、8h后測定，結果單個最大雜質峰面積的RSD為3.43%，總雜質峰面積的RSD為3.55%，總雜質有增加的趨勢，表明供試品溶液8h內有一定的降解，溶液應臨用新制。

2.7 耐用性試驗

本品柱溫在25℃～35℃；流速0.6ml/min～1.0ml/min；流動相組成比例（28:72）～（32：68）之間變動時，未影響到本品有關物質的檢查，表明方法的耐用性良好。

2.8 供試品有關物質檢查

取3批供試品，照2.1項下的方法制備溶液，照2.2項下的色譜條件檢查有關物質，結果單個最大雜質分別為0.0103%、0.0105%、0.0108%，總雜質分別為0.0204%、0.0213%、0.0219%。

3 討論

3.1 專屬性試驗表明，鹽酸文拉法辛在酸、堿、高溫破壞條件下均有一定的降解，采用DAD檢測器對主峰以及降解峰進行峰純度檢測并記錄3D圖，提取230nm波長處的色譜圖

通過色譜工作站提供的“全波長法”分析以上色譜圖中，鹽酸文拉法辛在強酸、強堿、氧化、強光和高溫破壞條件下，鹽酸文拉法辛主峰的純度指數值均大于990.000，表明各降解雜質峰均與主峰的分離度良好。

3.2 有關物質限度的確定：

通過對3批供試品有關物質的測定，并結合本品穩定性考察結果，將本品的有關物質限度確定為：供試品溶液的色譜圖中如顯雜質峰，單個雜質不得過0.2%；各雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積（1.0%）。

[1]李煥德,李革暉.一種雜環類抗抑郁新藥VENLAFAXINE [J].國外醫學藥學分冊,1996,23(2):70.

[2]劉海濤,周立春,余立.HPLC法測定鹽酸文拉法辛膠囊有關物質[J].中國藥品標準,2012,13(3):178-181.

[3]鄒萬芹.新型抗抑郁藥的臨床應用及研究進展[J].中國藥房,2008,19(14):1105-1107.

[4]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[S].(四部).北京:中國醫藥科技出版社,2015.

[5]國家食品藥品監督管理局.鹽酸文拉法辛膠囊藥品標準WS1-(X-007)-2002Z[S].

第一作者：黃艷，女，碩士，副教授，研究方向：藥品質量控制方法的研究。

＊通訊作者：鐘霞，女，博士，副教授，研究方向：藥物合成。