某區居民5-HTTLPR基因多態性與血糖、三酰甘油、膽固醇的相關性研究

宋志勇 穆亞敏

（湘潭醫衛職業技術學院，湖南 湘潭 411102）

某區居民5-HTTLPR基因多態性與血糖、三酰甘油、膽固醇的相關性研究

宋志勇 穆亞敏

（湘潭醫衛職業技術學院，湖南 湘潭 411102）

目的探討湘潭城區普通中老年居民5-羥色胺轉運體啟動子區基因多態性（5-HTTLPR）與血清葡萄糖、膽固醇、三酰甘油的相關性。方法選取參加健康體檢的湘潭中老年無糖尿病志愿者167例，檢測其空腹血清葡萄糖、三酰甘油及膽固醇水平，采用聚合酶鏈反應（PCR）技術檢測5-HTTLPR基因多態性，分析5-HTTLPR基因多態性與血糖、總膽固醇及三酰甘油之間的相關性。結果中老年男性血清葡糖糖濃度在5-HTTLPR基因型SS、SL、LL中有明顯差異（P=0.028＜0.05），用Nemenyi檢驗組間兩兩比較，SS型基因攜帶者的葡萄糖濃度水平比SL型基因攜帶者高（P=0.045）；男性S等位基因攜帶者葡萄糖水平比L等位基因攜帶者高，P=0.011＜0.05，有統計學意義。結論5-HTTLPR基因多態性與血清葡萄糖存在關聯性，而與血清膽固醇及三酰甘油無關。

糖尿??；5-HTTLPR基因多態性；血糖；三酰甘油；膽固醇；相關性

糖尿病是由遺傳、環境因素的復合病因引起的以高血糖為特征的慢性代謝性疾病。糖尿病已嚴重危害我國居民健康。因此糖尿病早前發現和提前預防具有非常重要的意義。近年來基因治療以及基因檢測在糖尿病防治中的研究開展如火如荼。有研究表明，5-羥色胺轉運體啟動子區基因（5-HTTLPR）多態性影響人的血糖控制[1]，可能是2型糖尿病發病的標志[2]。本研究探討湘潭城區普通中老年人血清葡萄糖、總膽固醇及三酰甘油與5-HTTLPR基因多態性之間的關聯性。

1 對象與方法

1.1 研究對象：志愿者來自健康體檢的湘潭市城區普通中老年人群。年齡50周歲以上漢族，在湘潭居住超過15年以上的中老年人（排除糖尿病，經一般調查確認無血緣關系樣本）。隨機抽樣167例，其中男性46例，女性121例，同時測定空腹血清葡萄糖、總膽固醇及三酰甘油。

1.2 主要試劑：Taq DNA聚合酶（含buffer）、dNTP購自天根生化科技（北京）有限公司，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，上游引物：5'-GGC GTT GCC GCT CTG AAT GC-3'；下游引物：5'-GAG GGA CTG AGC TGG ACA ACC AC-3'。其他試劑：0.1%BSA（TaKaRa，大連寶生物工程有限公司）、DL2000 DNA Marker（TaKaRa，大連寶生物工程有限公司）、瓊脂糖（上?；蚩萍脊煞萦邢薰荆?。

表1 5-HTTLPR基因型之間血糖、總膽固醇及三酰甘油濃度的比較（M（QR），mmol/L）

表2 5-HTTLPR等位基因之間血糖、總膽固醇及三酰甘油濃度的比較（M（QR），mmol/L）

1.3 實驗方法

1.3.1 葡聚糖沉淀法從全血白細胞中提取DNA：抽取志愿者外周靜脈血4 mL（其中3 mL用于DNA模板提取，1 mL用于血清葡萄糖、總膽固醇及三酰甘油測定），置于經0.3 M EDTA抗凝處理的試管中，往抗凝血中加入1.5 mL 4%的葡聚糖，混勻靜置45～60 min分層后，取上層淡黃色液體，4 ℃低溫下，2000 r/min，離心10 min。棄上清，往試管中加入1 mL生理鹽水，混勻后2000 r/min，離心5 min，棄上清，加入0.5 mL三蒸水，混勻后2000 r/min離心5 min，棄上清，加0.5 mL TES裂解液，10% SDS液160μL，2 g/L的蛋白酶K 100 μL。37 ℃水浴過夜消化。取出冷卻后，轉移至Eppendorf管中，用酚氯仿法抽提模板DNA，-80 ℃保存待用。

1.3.2 DNA基因組純度和濃度測定：用紫外分光光度計測定：取適量的DNA模板，通過OD260的吸光值計算DNA的濃度（OD260/OD280比值在1.7～1.9）。經檢測所有模板DNA純度檢測均可，濃度在30～50 ng/μL。

1.3.3 目標基因擴增：采用聚合酶鏈反應（PCR）進行目標基因5-羥色胺轉運體啟動子區基因（5-HTTLPR）擴增。

PCR反應體系：DNA模板4 μL（200 ng左右），2×GC buffer 10 μL，上下游引物各2 μL，2mM dNTPs 0.5 μL，5 U/μL Taq酶0.5 μL，三蒸水6 μL，總體積為25 μL。

PCR反應程序：95 ℃ 4 min，10個循環（95 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s），20個循環（95 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72 ℃ 4 min 5 s） 72 ℃ 7 min。

PCR反應產物鑒定：1.5%瓊脂糖凝膠電泳（1×TAE buffer配膠，EB染色），75V電壓電泳45 min，圖像分析顯示基因片斷分別為：484bp和528bp?；蚨鄳B性顯示分別為：SS、SL、LL三種基因型（圖1）。

1.3.4 血清血糖、總膽固醇及三酰甘油濃度的測定：取外周靜脈血1 mL，室溫下靜置半小時。待血清分離后，進行葡萄糖（G）、總膽固醇（TCh）以及三酰甘油（TG）水平測定。采用全自動血生化儀測定（湘潭市中心醫院檢驗科）。

1.4 統計學方法：應用SAS V8數據統計軟件進行數據分析。運用卡方，Fisher確切概率法對5-HTTLPR基因多態性進行Hardy-Weinberg平衡檢驗。運用非參數秩和檢驗方法對基因型和等位基因與血生化指標指標進行統計分析。以P＜0.05為有顯著差異。

2 結 果

經聚合酶鏈擴增反應，目標基因擴增成功167例，男性46例，女性121例。SS型95例、SL型66例、LL型6例。經卡方檢驗， 5-HTTLPR基因型樣本分布符合Hardy-Weinberg平衡。

5-HTTLPR基因型和等位基因與血清葡萄糖、膽固醇及三酰甘油濃度的比較：

2.1 男性：SS型、SL型、LL型攜帶者的葡萄糖非參數秩和檢驗比較P=0.028＜0.05，有統計學意義，Nemenyi檢驗，兩兩比較得出：SS型基因攜帶者的葡萄糖濃度水平比SL型基因攜帶者高（P=0.045）（表1）。

2.2 男性：S等位基因攜帶者葡萄糖水平比L等位基因攜帶者高，P=0.011＜0.05，有統計學意義（表2）。

3 討 論

目前，有研究表明5-HTTLPR基因多態性在二型糖尿?。═2DM）的發病中具有非常密切的聯系，在T2DM患者中攜帶S等位基因較為多見[3]，在靈長類動物試驗中，有研究顯示攜帶L等位基因的猴子具有明顯的較低血糖水平[4]。本研究通過探討本地區普通中老年人的血清中葡萄糖、總膽固醇及三酰甘油濃度與5-HTTLPR基因多態性的關聯性，發現攜帶S等位基因的普通中老年男性的血糖濃度具有顯著差異，存在關聯性，而在中老年女性志愿者中未見明顯差異。表明5-HTTLPR基因中S等位基因攜帶者比L等位基因攜帶者的血糖濃度明顯高些。同時，我們也應看到：影響血中葡萄糖代謝的因素很多，涉及基因眾多，下一步我們將加大樣本量進行深入研究。

[1] Yamakawa M,Fukushima A,Sakuma K,et al.Serotonin transporter polymorphisms affect human blood glucose control[J]. Biochem Biophys Res Commun,2005,334(4):1165-1171.

[2] Iordanidou M,Petridis I,Tavridou A,et al.The serotonin transporter promoter polymorphism (5-HTTLPR) is associated with type 2 diabetes[J]. Clin Chim Acta,2010,411(3-4):167-171.

[3] 秦永章,榮海欽,季虹,等.5-HTTLPR 基因多態性與2型糖尿病關聯性研究[J].醫學研究雜志,2011,40(7):88-90.

[4] Hoffman JB,Kaplan JR,Kinkead B,et al.Metabolic and reproductive consequences of the serotonin transporter promoter polymorphism (5-HTTLPR) in adult female rhesus monkeys (Ma-caca mulatta)[J].Endocrine,2007,31(2):202-211.

R587.1

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1671-8194（2017）22-0057-02

湘潭醫衛職業技術學院校級科研課題立項（編號：ZRKX2017-006）