牦牛DGAT1基因多態性及其與乳質性狀關聯分析

高小莉，胡江，郭淑珍，石斌剛，謝建鵬，羅玉柱，王繼卿，牟永娟

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牦牛DGAT1基因多態性及其與乳質性狀關聯分析

高小莉1，胡江1，郭淑珍2，石斌剛1，謝建鵬1，羅玉柱1，王繼卿1，牟永娟2

（1甘肅農業大學動物科學技術學院/甘肅省草食動物生物技術重點實驗室，蘭州730070；2甘南州畜牧科學研究所，甘肅合作747000）

【目的】檢測牦牛DGAT1基因多態性，評估基因突變對牦牛乳品質性狀的影響，以期豐富牦牛重要經濟性狀的分子遺傳研究基礎。【方法】采用PCR-SSCP方法，檢測甘南牦牛、天祝白牦牛、青海牦牛及野血牦牛DGAT1基因intron5-exon7和intron15-exon17區突變，分析基因突變對乳品質性狀的影響。【結果】牦牛DGAT1基因intron5-exon7區發現c.562+32_c.562+33insCCGCCC的插入/缺失，等位基因、基因型MM頻率最高為優勢等位基因和基因型，各類群牦牛＜0.5屬中度或低度多態；intron15-exon17區檢測到c.1249-23C＞T和c.1336C＞T的突變，其中exon17發現的c.1336C＞T突變導致編碼氨基酸p.Arg447Cys轉變，等位基因頻率最高為優勢等位基因，甘南牦牛、天祝白牦牛和青海牦牛中基因型AA為優勢基因型，野血牦牛基因型AB為優勢基因型，各類群牦牛0.25＜＜0.5屬中度多態；兩區域3處突變位點構建出6種單倍型和11種單倍型組合，突變位點間存在連鎖關系且接近于連鎖平衡。關聯分析表明，甘南牦牛intron5-exon7區基因型與乳質性狀無顯著相關；intron15-exon17區基因型BB個體乳品質性狀最低，且乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量中顯著低于其他基因型個體（＜0.05）；攜帶等位基因A的個體乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量及無脂固體含量顯著高于未攜帶者（＜0.05），攜帶等位基因C的個體乳脂率也顯著高于未攜帶者（＜0.05），而攜帶等位基因的個體乳脂率、總固體物質含量顯著低于未攜帶者（＜0.05）；單倍型組合H1H3個體的乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量和無脂固體物質含量均較高，且乳脂率及總固體物質含量顯著高于其他單倍型組合（＜0.05），而H2H2單倍型組合個體則較低，除乳糖率以外的其他乳品質性狀均顯著低于其他7種單倍型組合（＜0.05）。【結論】牦牛DGAT1基因intron5-exon7和intron15-exon17區為低度和中度多態，intron6存在c.562+32_c.562+33insCCGCCC的插入/缺失，intron15和exon17分別檢測到c.1249-23C＞T突變和c.1336C＞T的非同義突變。intron15-exon17區突變影響甘南牦牛乳品質性狀，選留攜帶等位基因的個體和淘汰攜帶等位基因的個體、或選留H1H3單倍型組合及淘汰H2H2單倍型組合個體，均可顯著改善后代群體的乳品質。

牦牛；DGAT1基因；多態性；乳品質性狀

0 引言

【研究意義】牦牛（）分布在青藏高原及其周邊高寒牧區，為牧民提供肉、乳和毛絨等畜產品，是當地重要的生產和生活資源。牦牛乳營養豐富，風味獨特，其中乳脂率、乳蛋白率和總固體物質含量分別為5.45%—7.22%、4.86%—5.40%和16.91%—17.40%，均高于荷斯坦牛乳[1]；牦牛乳是加工乳制品的重要原料，也是發展高原特色乳產業的主要來源。乳脂是乳的重要組成部分，高乳脂率是牦牛乳的主要特征，本研究檢測牦牛乳脂性狀候選基因，評估基因突變與乳品質性狀間的關聯程度，以期豐富牦牛乳品質性狀分子遺傳研究基礎。【前人研究進展】乳脂肪中甘油三酯占95%以上，其合成受甘油-3-磷酸酰基轉移酶（GPAT）、1-酰基甘油-3-磷酸酰基轉移酶6（AGPAT6）、磷脂酸磷酸酯酶1（LPIN1）、二酰基甘油酰基轉移酶（DGAT）等作用[2]，其中是甘油三酯合成最后一步反應的關鍵酶[3]。DGAT基因包括和兩種屬于不同基因家族的基因類型。DGAT1基因屬于酰基輔酶A膽固醇酰基轉移酶(acylCoA: cholesterol acyltransferase, ACAT)基因家族，參與脂肪合成、儲存及脂蛋白組裝等過程，是影響產奶性狀的重要功能候選基因[4]。牛DGAT1基因位于14號染色體，由17個外顯子和16個內含子組成，編碼489個氨基酸[5]。牛DGAT1基因第8外顯子AA→CG的雙堿基突變導致其編碼多肽鏈中232位的賴氨酸殘基突變為中性疏水性丙氨酸殘基[6-7]，命名為K232A。研究表明，K基因能增加荷斯坦奶牛乳脂率、乳蛋白率及乳脂量，而A基因對提高產乳量和乳蛋白量有作用[8-9]；DGAT1基因啟動子區的可變數目串聯重復序列（VNTR）多態性對產乳性狀也有一定影響[10-11]。另外，DGAT1基因突變也影響肉牛肌內脂肪含量[12-13]，以及豬的脂肪沉積和背膘厚[14]。【本研究切入點】近年來，關于牦牛乳蛋白的遺傳報道較多[15-16]，但對其乳脂肪及其他乳品質性狀的分子遺傳機制研究較少。【擬解決的關鍵問題】本研究以DGAT1基因作為牦牛乳品質性狀的候選基因，應用PCR-SSCP技術檢測牦牛該基因相應區域的遺傳突變，結合甘南牦牛乳品質性狀測定數據，分析DGAT1基因突變與牦牛乳品質性狀間的關聯程度。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

樣品于2015年7月進行采集。血樣分為甘南牦牛314頭，天祝白牦牛、青海牦牛各95頭，野血牦牛（野牦牛與家牦牛雜交后代）37頭。頸靜脈采血10 mL，ACD抗凝、-70℃凍存；部分血樣滴于FTA卡（Whatman, Middlesex, UK）常溫保存。

對采集血樣的甘南母牦牛，記錄其年齡及產犢胎次，并早晚各采集乳樣1次約25 mL、連續采集3 d，混合、冰袋冷卻后放入冰盒，帶回實驗室測定乳品質性狀。因甘南牦牛均在每年5—6月份產犢，因此，試驗母牦牛泌乳月基本相同。

1.2 試驗方法

1.2.1 乳品質性狀測定 甘南牦牛乳品質性狀測定包括乳蛋白率、乳脂率、乳糖率、總固體物質含量、無脂固體物質含量5項，送農業部動物毛皮及制品質量監督檢驗測試中心（蘭州）采用福斯（FOSS）乳成分分析儀測定，其測定值見表1。

1.2.2 基因組DNA提取 凍存血樣采用“苯酚-氯仿法”和FTA卡“兩步法”提取基因組DNA。

1.2.3 引物設計及PCR擴增 根據GenBank公布的普通牛DGAT1基因序列（GenBank no. AY065621.1），應用DNAMAN軟件設計特異性引物P1和P2（表2），分別擴增牦牛DGAT1基因intron5-exon7和intron15-exon17區。引物由北京六合華大生物科技有限公司合成。

PCR反應總體積20 μL，其中基因組DNA（100 ng·μL-1）1.0 μL（或FTA卡1.2 mm血樣圓片1個），10 ×PCR Buffer 2.0 μL，上、下游引物各0.25 μmol·L-1，Taq DNA聚合酶（5U·μL-1）0.25 μL，Mg2+2.0 mmol·L-1，dNTP（10 mmol·L-1·M-1）0.4 μL，ddH2O加至20 μL。PCR擴增程序為94 ℃預變性 5 min，94 ℃變性30 s，63 ℃退火30 s（P1引物）或62 ℃退火30 s（P2引物），72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR擴增產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.4 SSCP分析 取PCR擴增產物 2 μL滅菌離心管中，加入8 μL變性上樣緩沖液（98%去離子甲酰胺、0.025%二甲苯氰、0.025%溴酚藍、10 mmol·L-1EDTA)，98 ℃變性10 min，冰水混合物中迅速冷卻5 min，上樣于非變性聚丙烯酰胺凝膠（Acr﹕Bis=37.5﹕1），0.5×TBE緩沖液電泳。電泳結束后銀染顯色并判定SSCP帶型。P1和P2引物最佳SSCP電泳條件見表3。

1.2.5 等位基因序列測定 若等位基因存在純合型個體，用PCR 擴增產物直接測序；若僅存在于雜合個體采用切膠測序。序列測定在上海生工生物工程有限公司完成。

表1 甘南牦牛乳品質性狀測定

表2 牦牛DGAT1基因的擴增引物信息

表3 SSCP電泳條件

1.2.6 數據統計分析 應用MEGA4軟件比對等位基因序列；Popgen32.0軟件計算等位基因頻率、純合度（Ho）、雜合度（He）、有效等位基因數（Ne）并進行2檢驗；PIC軟件計算多態信息含量（PIC）；SHEsis軟件分析兩位點SNPs連鎖不平衡及單倍型頻率[18]；SPSS 19.0軟件的一般線性模型分析基因型、等位基因及單倍型組合對甘南牦牛乳品質性狀的影響。因母牦牛不同群體和胎次對乳品質性狀有較大影響[19]，因此統計模型考慮群體和胎次因素：

Y =μ+Genotype +Parity+Group+e

Y =μ+Allele+Parity +Group+e

Y =μ+Haplotype+Parity +Group+e

其中Y為性狀表型值為群體均值；為基因型效應Allele為等位基因效應；Haplotype為單倍型效應；y為胎次效應；Group為群體效應；e為隨機誤差。

2 結果

2.1 PCR擴增及產物SSCP檢測

P1和P2引物擴增牦牛DGAT1基因intron5—exon7和intron15—exon17區域，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測，擴增產物長度與目的片段一致，且無非特異性條帶。兩對引物的PCR產物SSCP檢測結果分別見圖1和圖2。intron5—exon7區在牦牛群體中檢測到2種SSCP帶型，對應和兩種等位基因，形成MM和NN兩種基因型。intron15—exon17區在牦牛群體中檢測到3種SSCP帶型，對應、、等3種等位基因，形成AA、AB、BC、BB、AC和CC共6種基因型。

2.2 牦牛DGAT1基因等位基因序列比對

牦牛DGAT1基因intron5—exon7區等位基因序列測定及比對結果分別見圖3和圖4，其中等位基因存在c.562+32_c.562+33insCCGCCC的插入/缺失突變。intron15—exon17區等位基因序列測定及比對結果分別見圖5和圖6，該區域共檢測到c.1249-23C＞T和c.1336C＞T的突變。其中exon17的c.1336C＞T為非同義突變，導致第447位氨基酸由堿性的精氨酸（Arg）變為中性的半胱氨酸（Cys）。

圖1 牦牛DGAT1基因intron5-exon7區SSCP檢測

圖2 牦牛DGAT1基因intron15-exon17區SSCP檢測

2.3 牦牛DGAT1基因遺傳多態性及單倍型分析

2.3.1 牦牛DGAT1基因群體遺傳學分析 牦牛DGAT1基因intron5—exon7區基因型頻率、等位基因頻率及群體遺傳多態性見表4。四牦牛群體中，等位基因、基因型MM頻率67.37%—83.78%為優勢等位基因和基因型；甘南牦牛和野血牦牛多態信息含量＜0.25屬低度多態，天祝白牦牛和青海牦牛0.25＜＜0.5屬中度多態；各類群牦牛卡方檢驗均達到顯著水平（＜0.05），即偏離Hardy-Weinberg平衡狀態。

牦牛DGAT1基因intron15-exon17區基因型頻率、等位基因頻率及群體遺傳多態性見表5。四類群牦牛等位基因頻率56.76%—69.11%為優勢等位基因；甘南牦牛、天祝白牦牛和青海牦牛基因型AA頻率38.95%—47.13%為優勢基因型，野血牦牛基因型AB頻率59.46%為優勢基因型。各類群牦牛為0.3970—0.4988屬中度多態。野血牦牛卡方檢驗達顯著水平（＜0.05），偏離Hardy-Weinberg平衡狀態。

2.3.2牦牛DGAT1基因單倍型分析 牦牛DGAT1基因intron5—exon7與intron15—exon17區突變位點間連鎖不平衡分析及單倍型類型見表6和表7。D’值和2值是衡量連鎖不平衡的兩個常用參數，其中連鎖不平衡區域內重組事件的發生概率通過D’值反映，而連鎖分析的效力與2相關。SLATKIN等[20]認為D’＞0.8表示兩個位點處于強連鎖不平衡狀態，ARDLIE等[21]認為2＞0.33則這兩個SNPs是緊密連鎖且作為一個整體遺傳。4類群牦牛DGAT1基因3個突變位點間0＜D’＜0.8 且2均接近0（2≈0），存在連鎖關系且接近于連鎖平衡，表明他們趨向于相互獨立遺傳。兩擴增區域構建6種潛在的單倍型分別為H1、H2、H3、H4、H5和H6，其中H1型頻率最高為0.534為主要單倍型，H5型頻率最低為0.020；6種單倍型形成11種單倍型組合（牦牛個體數）分別為H1H1（186）、H1H2（122）、H1H3（80）、H2H2（19）、H2H3（19）、H3H3（8）、H4H4（47）、H4H5（34）、H4H6（20）、H5H5（4）和H5H6（2）。

方框內為c.562+32_c.562+33insCCGCCC插入/缺失序列c.562+32_c.562+33insCCGCCC are represented with box

下劃線部分為引物結合區，方框表示第6、7外顯子區

箭頭表明c.1249-23C＞T和c.1336C＞T突變位點 c.1249-23C＞T and c.1336C＞T are showed with arrows

下劃線部分為引物結合區，方框表示第16、17外顯子區

表4 牦牛DGAT1基因intron5-exon7區遺傳多態性分析

表5 牦牛DGAT1基因intron15-exon17區遺傳多態性分析

表6 牦牛DGAT1基因突變位點間連鎖不平衡系數D’及r2

表7 牦牛DGAT1基因intron5-exon7與intron15-exon17區單倍型及頻率

2.4 甘南牦牛DGAT1基因多態性與乳質性狀相關性分析

2.4.1 甘南牦牛DGAT1基因intron5-exon7及intron15-exon17區突變與乳質性狀相關性分析DGAT1基因intron5—exon7區基因型與甘南牦牛乳質性狀相關性分析見表8。該區域MM和NN基因型與乳質性狀無顯著相關性（＞0.05），即該區域突變對甘南牦牛乳質性狀無顯著影響。

DGAT1基因intron15—exon17區基因型及等位基因與甘南牦牛乳質性狀相關分析見表9和表10。結果表明，該區域突變影響甘南牦牛乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量。甘南牦牛BB型個體乳蛋白率最低且顯著低于AA、AB、AC型（＜0.05），攜帶等位基因個體乳蛋白率顯著高于未攜帶個體（=0.004），即等位基因有提高甘南牦牛乳蛋白率的趨勢。甘南牦牛AC型個體乳脂率最高且顯著高于其他個體（＜0.05）；攜帶等位基因及的個體乳脂率顯著高于未攜帶者（=0.026），而攜帶等位基因的個體乳脂率顯著低于未攜帶者（=0.022），即等位基因和有增加甘南牦牛乳脂率的趨勢，而等位基因對乳脂率有不利影響。甘南牦牛AC型個體總固體物質含量最高且顯著高于AB、BC和BB型（＜0.05），攜帶等位基因的個體總固體物質含量顯著高于未攜帶者（=0.001），而攜帶等位基因的個體顯著低于未攜帶者（=0.013），即等位基因有提高甘南牦牛總固體物質含量的趨勢，而等位基因對該性狀有不利影響。該區域各基因型與甘南牦牛乳糖含量、無脂固體物質含量均無顯著相關，而攜帶等位基因的個體無脂固體物質含量顯著高于未攜帶者（=0.010）。綜合上述分析結果，選擇攜帶等位基因的個體或淘汰攜帶等位基因的個體，能夠提高牦牛群體乳品質。

2.4.2 甘南牦牛DGAT1基因單倍型組合與乳質性狀相關性分析 甘南牦牛DGAT1基因不同單倍型組合（個體數在7以上）與乳質性狀相關性見表11。結果表明，不同單倍型組合與甘南牦牛乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量和無脂固體物質含量呈顯著相關（＜0.05）。綜合各單倍型組合乳品質性狀，H2H2單倍型組合個體的乳蛋白率、乳脂率、乳糖率、總固體物質含量和無脂固體物質含量均最低，并在除乳糖率以外的其他乳質性狀中均顯著低于其他7種單倍型組合（＜0.05）；H1H3單倍型組合乳脂率、總固體物質含量最高，也有較高的乳蛋白率及無脂固體物質含量，即選留H1H3單倍型組合及淘汰H2H2單倍型組合個體可顯著改善后代群體的乳品質性狀。

表8 甘南牦牛DGAT1基因intron5-exon7區基因型與乳質性狀關聯性分析

表9 甘南牦牛DGAT1基因intron15-exon17區基因型與乳質性狀關聯性分析

同列中不同小寫字母表示差異顯著 (＜0.05)。下同

Different lowercase letters in the same line showed differ significantly (＜0.05) . The same as below

表10 甘南牦牛DGAT1基因intron15-exon17區等位基因與乳質性狀關聯性分析

表11 甘南牦牛DGAT1基因單倍型組合與乳質性狀關聯性分析

同列中不同小寫字母表示差異顯著 (＜0.05)

Different lowercase letters in the same line showed differ significantly (＜0.05)

3 討論

3.1 牦牛DGAT1基因檢測區域多態性較豐富

不同物種DGAT1基因intron5—exon7及intron15—exon17區域均報道存在多態性。劉源等[22]在萊蕪豬DGAT1基因第6外顯子、朱春梅等[23]在薩能奶山羊該基因第15內含子、楊具田等[24]在藏綿羊第16—17外顯子、ANGIOLILLO等[25]在山羊第16內含子均發現單核苷酸突變，而周軍[10]在廣西水牛DGAT1基因第17外顯子檢測到C＞T的堿基突變導致丙氨酸（Ala）轉變為纈氨酸（Val）。本研究檢測的牦牛DGAT1基因序列在intron5—exon7區域發現1處插入/缺失突變，intron15—exon17區域發現2處SNPs突變位點，與其他物種該基因相應區域的研究結果類似。

本研究發現牦牛第17外顯子c.1336C＞T的突變導致編碼蛋白的堿性精氨酸（Arg）變為中性半胱氨酸（Cys），劉洪瑜[26]在牛leptin基因發現第2外顯子C＞T突變，其導致編碼蛋白由精氨酸突變為半胱氨酸，并改變了蛋白的二級、三級結構及其疏水性。Fujii等[27]在豬RYRI基因編碼區中檢測到C＞T錯義突變，使精氨酸變為半胱氨酸，從而改變了RYRI基因的結構和功能。本研究發現牦牛的精氨酸到半胱氨酸突變對其蛋白結構和功能的影響仍需進一步證實。

3.2 DGAT1基因intron15-exon17突變影響甘南牦牛乳質性狀

屬于乙酰輔酶A膽固醇乙酰轉移酶1（ACAT1）和乙酰輔酶A膽固醇乙酰轉移酶2（ACAT2）家族成員，是甘油三酯（TAG）合成最后一步反應的限制酶，在高等真核生物TAG代謝途徑（如腸脂肪吸收、脂蛋白集合、脂肪形成和泌乳等）中發揮著重要功能。Smith等[28]報道敲除DGAT1基因的小鼠完全喪失泌乳能力，推測DGAT1基因是泌乳性狀的功能候選基因。目前許多研究證實DGAT1基因第8外顯子AA→CG的雙堿基突變（命名為K232A）影響奶牛產奶量、乳脂及乳蛋白含量[29-30]。另外，在DGAT1基因5′調控區[23]及第8內含子區[31]均發現顯著影響奶山羊及奶水牛乳品質性狀的突變位點。

DGAT1基因突變影響不同物種的乳品質性狀。本研究發現甘南牦牛DGAT1基因intron15—exon17突變影響其乳品質性狀，等位基因有增加甘南牦牛乳脂率、乳蛋白率和總固體物質含量的趨勢，等位基因也可增加其乳脂率，而等位基因對乳脂率、總固體物質含量有不利影響。朱春梅[23]報道西農薩能奶山羊DGAT1基因intron15的單核苷酸突變與乳脂率顯著關性；De Freitas[32]研究發現水牛DGAT1基因第17外顯子區兩個SNPs位點與乳脂肪和蛋白質的比例顯著相關，這與本研究結果類似。但孟莉[33]等在水牛DGAT1基因第17外顯子區檢測到1個SNP突變，且其對乳脂率及乳蛋白率無顯著影響，與本研究結果不完全一致，這可能與不同物種、品種及突變位點有關。

3.3 DGAT1基因單倍型組合影響甘南牦牛乳品質性狀

相對于單個SNP分析，單倍型分析在復雜性狀的關聯研究中具有更準確的統計效果，而且單倍型的傳遞比單個SNP傳遞更有效，所以單倍型分析已經成為研究復雜性狀的優勢選擇和遺傳關聯分析的重要手段。本研究發現甘南牦牛H2H2單倍型組合個體的乳蛋白率、乳脂率、總固體物質含量和無脂固體物質含量均顯著低于其他單倍型組合，H1H3單倍型組合乳脂率、總固體物質含量最高，也有較高的乳蛋白率及無脂固體物質含量。鮑斌等[34]在荷斯坦牛基因研究中發現不同單倍型組合對產奶量和乳蛋白率有顯著影響；鞠志花等[35]研究中國荷斯坦牛κ-酪蛋白基因多態性與泌乳性狀的關聯性中發現H1H4單倍型組合對乳蛋白率和乳脂率均有有利影響，可作為選擇高乳蛋白率和高乳脂率牛群的分子標記。本研究中甘南牦牛DGAT1基因單倍型組合關聯分析結果與基因型及等位基因關聯分析結果基本一致，相應單倍型組合也可作為選育提高牦牛乳品質性狀的分子標記。

4 結論

本研究在4個牦牛群體DGAT1基因的intron5—exon7區發現c.562+32_c.562+33insCCCCGC的插入/缺失突變、intron15-exon17區檢測到c.1336C＞T、c.1249-23C＞T 的SNPs，其中intron 17區域的c.1336C＞T為非同義突變，兩區域共發現6種潛在的單倍型。甘南牦牛intron15-exon17區突變及其與intron5-exon7區的單倍型組合均影響乳品質性狀，選留攜帶等位基因的個體和淘汰攜帶等位基因的個體、或選留H1H3單倍型組合及淘汰H2H2單倍型組合個體，均可顯著改善后代群體的乳品質。

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（責任編輯 林鑒非）

Polymorphisms ofGene and Their Association with Milk Quality Traits in Yak

GAO XiaoLi1, HU Jiang1, GUO ShuZhen2, SHI BinGang1, XIE JianPeng1, LUO YuZhu1, WANG JiQing1, MU YongJuan2

(1College of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University/Gansu Key Laboratory of Herbivorous Animal Biotechnology, Lanzhou 730070;2Gannan Institute of Animal Science, Hezuo 747000, Gansu)

【Objective】In this study, polymorphisms of yak DGAT1(diacylglycerol acyltransferase 1) gene were investigated and their effects on some milk quality traits were estimated so as to enrich the molecular genetic data for yak. 【Method】 Mutations in intron5-exon7 and intron15-exon17 of DGAT1 gene were checked by PCR-SSCP in 4 yak populations (Gannan yak, Tianzhu white yak, Qinghai yak and Wild-blood yak), and the effects of mutations on the milk quality traits were analyzed in Gannan yak.【Result】The c.562+32_c.562+33insCCGCCC was found in intron5-exon7 of yak DGAT1 gene ,and alleleand genotype MM were the dominant allele and genotype, and each yak population was moderately or low polymorphic (＜0.5). The 2 SNPs (c.1249-23C＞T and c.1336C＞T) were found in intron15-exon17, and nucleotide substitution c.1336C＞T at exon 17 resulted in p.Arg450Cys change. Allelewas the dominant allele, the genotype AA in Gannan yak, Tianzhu white yak and Qinghai yak and AB in Wild-blood yak were the dominant genotype, respectively. Each yak population was moderately polymorphic (0.25＜＜0.5). Total 6 haplotypes and 11 haplotype combinations were constituted by mutations in these two regions, and there was a linkage relationship between 3 mutations and closed to linkage equilibrium. The association analysis showed that the genotype in intron5-exon7 was not significantly correlated with the milk quality traits in Gannan yak. The milk quality traits of genotype BB were the lowest, and the milk protein rate, fat rate, total solids percentage were lower than those of other genetypes (＜0.05), and individuals with possessing allelehad higher milk protein rate, fat rate, total solids percentage and non-fat solids percentage than those no-possessing (＜0.05), and yaks with allelealso showed higher milk fat rate than those no-possessing (＜0.05), but individuals with alleleshowed lower milk fat rate and total solids percentage than those no-possessing (＜0.05) in intron15-exon17 ofgene in Gannan yak. Individuals with haplotype combination H1H3 had higher milk protein rate, fat rate, total solids percentage and non-fat solids percentage, and the milk fat rate and total solids percentage were higher than those of other haplotype combinations (＜0.05), while those with haplotype combination H2H2 were lower, in addition to the lactose rate, the other traits were lower than other combinations (＜0.05). 【Conclusion】The intron5-exon7 and intron15-exon17 of yakgeneare low and moderately polymorphic, and the c.562+32_c.562+33insCCGCCC in intron6 and 2 SNPs (c.1249-23C＞T, c.1336C＞T) in intron15 and exon17 were detected, respectively. The mutations in intron15-exon17 ofgene may affect some milk quality traits of Gannan yak, and selecting yak with alleleand haplotype H1H3, or eliminating ones with alleleand haplotype H2H2 can improve the milk quality of Gannan yak.

yak;gene; polymorphism; milk quality traits

2017-02-16；接受日期：2017-06-19

國家自然科學基金（31160451）、甘肅省農業生物技術研究與應用開發項目（GNSW-2013-9及GNSW-2016-29）、甘肅省杰出青年科學基金（1210RJDA008）

高小莉，E-mail：838353222@qq.com。通信作者胡江，E-mail：huj@gsau.edu.cn