紫外-可見分光光度法測定3種酒中氰化物的濃度

李 悅，何 穎，李彥懿，肖得力

(1.天津醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，天津300222； 2.中國藥科大學(xué)，江蘇南京211198)

紫外-可見分光光度法測定3種酒中氰化物的濃度

李 悅1，何 穎2，李彥懿2，肖得力1

(1.天津醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，天津300222； 2.中國藥科大學(xué)，江蘇南京211198)

采用紫外可見分光光度法測定了3種常見酒中氰化物濃度，并在此基礎(chǔ)上探究不同種類酒對吸光度的影響。結(jié)果顯示，在500 nm波長處，氰化物濃度在0.00～8.00 μg/mL范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系，表明此方法準(zhǔn)確可靠。在測定的3種酒中，氰化物濃度順序?yàn)榧t酒＜白酒＜木薯酒，其中氰化物濃度最高的木薯酒為0.86 μg/mL；氰化物濃度最低的紅酒為0.38 μg/mL。不同種類的酒通過紫外-可見分光光度法進(jìn)行測定時(shí)，在檢測波長處均未見明顯干擾，因此紫外-可見分光光度法是測定不同酒中氰化物濃度經(jīng)濟(jì)有效、切實(shí)可行的分析方法。同時(shí)本研究對不同種類酒氰化物濃度比較的準(zhǔn)確度及精密度的評定與后續(xù)相關(guān)研究的展開具有重要意義。

氰化物； 酒； 紫外可見分光光度法； 濃度比較； 干擾

氰化物通過消化道與呼吸道進(jìn)入人體，作用于細(xì)胞內(nèi)呼吸酶抑制細(xì)胞正常呼吸，從而引起組織衰竭，對人體產(chǎn)生極強(qiáng)的毒害作用[1]。作為酒水安全檢測的重點(diǎn)關(guān)注對象之一，酒中的氰化物主要來源于其植物原料，如葡萄、木薯中含有的氰化物或氰甙類配糖體[2，3]。原料中的氰化物在酸性條件下或加熱過程中可生成劇毒的氰化氫或氰離子，無毒的氰苷則在植物細(xì)胞被破壞時(shí)經(jīng)β-葡萄糖苷酶催化水解生成氫氰酸。大部分的氫氰酸在原料蒸煮制備過程中經(jīng)揮發(fā)排出，少量的氫氰酸溶解殘留在酒中，對人體健康產(chǎn)生威脅，嚴(yán)重到甚至可致死亡[2，4]。國家執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 2757—2012[5]中規(guī)定：酒中氰化物含量需小于8 mg/L。目前，檢測酒中氰化物濃度的方法有很多：巴比妥酸-異煙酸比色法能夠測定植物酶解反應(yīng)中氰化物含量，是國標(biāo)GB/T 5009.48中氰化物檢測方法，但該方法顯色劑不易保存，檢測結(jié)果中常存在渾濁現(xiàn)象干擾測定，且檢測限為0.10 mg/kg，不能滿足更為微量的測定要求[6，7]；Giorgio Nota建立的頂空-氣相色譜法突破性采用ECD檢測器，提高了氰化物檢測的靈敏度，但酒中的高濃度乙醇會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響[8，9]；吡啶-吡唑酮法靈敏度高，是氰化物檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)方法之一，但該方法操作復(fù)雜，同時(shí)作為試驗(yàn)試劑的吡啶易揮發(fā)，且對人體產(chǎn)生毒害作用[10]。本研究根據(jù)《中國藥典》2015年版氰化物檢測法第二法，氰化物水解產(chǎn)生氰化氫與三硝基苯酚鋰反應(yīng)生成紅色異紅紫酸鹽，通過采用紫外可見分光光度法測定3種酒中氰化物濃度，進(jìn)而比較不同酒種類對氰化物濃度檢測的影響。

目前，在國內(nèi)關(guān)于酒中氰化物濃度測定的研究報(bào)道較多，關(guān)于同一檢測方法下不同種類酒氰化物濃度比較的報(bào)道較少，因此，本研究對不同種類酒氰化物濃度比較的準(zhǔn)確度及精密度的評定與后續(xù)相關(guān)研究的展開具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

酒樣：木薯酒購自常州市啟迪化工有限公司；白酒購自江蘇博漢工貿(mào)有限公司；紅酒購自中國長城葡萄酒有限公司。

試驗(yàn)儀器：UV-1800紫外可見分光光度計(jì)，日本島津；石英比色皿；100 mL量筒；10 mL燒杯；200 mL具塞廣口瓶；電子天平（精度0.0001 g）。

試劑及耗材：氰化鈉固體；2,4,6-三硝基苯酚（分析純）；碳酸鋰（分析純）；氰化鈉固體購自中國藥科大學(xué)危險(xiǎn)品倉庫；2,4,6-三硝基苯酚（分析純）購自西隴化工有限公司；碳酸鋰（分析純）購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；三硝基苯酚鋰試液：稱取0.25 g碳酸鋰與0.50 g 2,4,6-三硝基苯酚溶于80 mL沸水中，室溫下冷卻，用蒸餾水定容到100 mL。

標(biāo)準(zhǔn)氰化鈉溶液：稱取18.85 mg的氰化鈉固體用蒸餾水定容到500 mL，稀釋到20.00 μg/mL。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

移取0.40 mL、1.00 mL、2.00 mL標(biāo)準(zhǔn)氰化鈉溶液置于3個(gè)200 mL具塞廣口瓶中，分別加蒸餾水至5 mL，搖勻，得濃度分別為1.60 μg/mL、4.00 μg/mL、8.00 μg/mL的氰化鈉溶液，同時(shí)設(shè)置1個(gè)200 mL具塞廣口瓶加入蒸餾水5 mL作為空白組。將4個(gè)精密加有1 mL三硝基苯酚鋰試液的10 mL燒杯分別置于上述4個(gè)具塞廣口瓶中，密塞，在暗處25℃放置14 h后取出燒杯，精密加水2 mL，混勻，測定500 nm處吸光度，繪制濃度-吸光度曲線。

1.2.2 測定酒樣中的氰化物濃度

分別取紅酒、白酒、木薯酒3種酒各5 mL于200 mL具塞廣口瓶中，將3個(gè)精密加有1 mL三硝基苯酚鋰試液的10 mL燒杯分別置于3個(gè)具塞廣口瓶中，密塞，在暗處25℃放置14 h后取出燒杯，精密加水2 mL，混勻，測定500 nm處吸光度，通過濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線得3種酒中氰化物濃度。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將配制的氰化鈉溶液進(jìn)行全波長掃描（圖1），同時(shí)根據(jù)《中國藥典》2015年版中關(guān)于氰化物檢測法第二法中的說明，采用500 nm作為檢測波長。氰化鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2）顯示，氰化物的吸光度與氰化物濃度的線性回歸方程為Y=0.1386X+0.05252，相關(guān)系數(shù)為0.98062，表明氰化物濃度在0.00～8.00 μg/mL范圍內(nèi)，氰化物濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2 不同酒樣中的氰化物濃度（表1）

圖1 不同濃度氰化鈉溶液在不同波長下的吸光度

圖2 氰化物濃度與紫外吸光度值的線性關(guān)系

表1 3種酒中的氰化物濃度

從表1可以看出，3種測試酒樣中氰化物濃度順序?yàn)榧t酒＜白酒＜木薯酒，其中，氰化物濃度最高的木薯酒為0.86 μg/mL，氰化物濃度最低的紅酒為0.38 μg/mL。許多酒原料中含有氰化物或氰苷，如木薯、玉米、高粱、楊梅、葡萄籽等[11]。植物、水果中的氰苷常見有苦杏仁苷、野櫻苷、亞麻苦苷等，不同種類植物中氰化物或氰苷含量相差較大：木薯原料中含有高含量亞麻苦苷，木薯葉分解產(chǎn)生的氰化氫含量為202.7～284.8 mg/kg，木薯塊根分解產(chǎn)生的氰化氫含量為46.8～92.6 mg/kg[12]，同時(shí)苦木薯中氰化物含量高于甜木薯[13，14]；桃仁中苦杏仁苷含量為47.7～275.1 μg/g[15]；枇杷仁、櫻桃仁中苦杏仁苷含量為2.67%±0.05%[16]。葡萄酒以葡萄為原料發(fā)酵而成，在發(fā)酵過程中，亞麻苷在亞麻苦苷酶與β-糖苷酶的作用下降解，隨發(fā)酵時(shí)間延長，氰化氫釋放量減少。白酒與木薯酒屬于蒸餾酒類，在蒸煮過程時(shí)，有少量未揮發(fā)的氰化氫殘留在酒中[17，18]。市售白酒多以高粱、小麥、玉米等為原料釀造，這些原料中氰化物或氰苷含量低于木薯。在此次研究檢測的不同種類酒中，果酒氰化物濃度低于糧食型蒸餾酒類，白酒檢測出氰化物濃度低于木薯酒，與前人的研究結(jié)果一致[12-16]。

圖3 3種酒在不同波長下的吸光度

白酒、木薯酒為無色透明液體，紅酒中花色苷使紅酒呈現(xiàn)出顏色[19]。圖3為3種酒在不同波長下的吸光度。從圖3可以看出：在紫外吸收波長范圍內(nèi)，3種酒樣均有明顯吸收，但是在450～480 nm范圍內(nèi)，干擾迅速降低至很低水平，在檢測波長500 nm處3種酒均未見明顯干擾，表明不同種類酒可以采用紫外可見分光光度法進(jìn)行測定。相對傳統(tǒng)的半定量方法、靈敏度低的比色法及一些需要昂貴儀器的方法，本文探討的紫外可見分光光度法可以是測定不同酒中氰化物濃度經(jīng)濟(jì)有效、切實(shí)可行的分析方法。

3 結(jié)論

根據(jù)《中國藥典》2015年版中關(guān)于氰化物檢測法第二法，采用紫外可見分光光度法測定3種酒中氰化物濃度，氰化鈉濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示氰化物濃度在0.00～8.00 μg/mL范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性關(guān)系。進(jìn)一步研究表明，3種供測試的酒中氰化物濃度順序?yàn)榧t酒＜白酒＜木薯酒，其中氰化物濃度最高的木薯酒為0.86 μg/mL；氰化物濃度最低的紅酒為0.38 μg/mL。不同種類酒采用紫外可見分光光度法進(jìn)行測定，在檢測波長500 nm處均未見明顯干擾。因此紫外可見分光光度法是測定不同酒中氰化物濃度經(jīng)濟(jì)有效、切實(shí)可行的分析方法。

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Determination of Cyanides Concentration in 3 Kinds of Alcoholic Drinks by UV-Vis Spectrophotometry

LI Yue1,HE Ying2,LI Yanyi2and XIAO Deli2
(1.Tianjin Medical College,Tianjin 300222;2.China Pharmaceutical University,Nanjing,Jiangsu 211198,China)

The content of cyanides in three kinds of alcoholic drinks was detected by UV-Vis spectrophotometry.On this basis,the influence of different kinds of alcoholic drinks on the absorbance was further investigated.The results showed that,there was a good linear relationship between cyanide concentration(0.00～8.00 μg/mL)and absorbance value at 500 nm wavelength.The content of cyanides in three kinds of alcoholic drinks ranked in increasing sequence as red wine＜Baijiu＜cassava liquor.The content of cyanides was the highest in cassava liquor(0.86 μg/mL)and the lowest in red wine(0.38 μg/mL).Moreover,as the three different kinds of alcoholic drinks were measured by UV-Vis spectrophotometry,no significant interference presented at the detection wavelength.Therefore,UV-Vis spectrophotometry for the determination of cyanides content in alcoholic drinks was economical and feasible.Meanwhile,this study was of great significance in the evaluation of the accuracy and precision of cyanides concentration in alcoholic drinks and the related follow-up studies.

cyanide;alcoholic drinks;UV-Vis spectrophotometry;comparison of concentration;interference

TS262；TS261.7；TS261.4

：A

1001-9286（2017）08-0128-04

10.13746/j.njkj.2017087

青年教師學(xué)科研究培育基金項(xiàng)目（項(xiàng)目號：YZQN20151411）。

2017-04-10

李悅，碩士，講師，E-mail：liyue130521@126.com。

肖得力，博士，講師，從事藥物分析研究工作，E-mail：xiao49562001@163.com。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2017-06-02；地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170602.1352.002.html。