黃連解毒流浸膏質(zhì)量控制的研究

■文/河南省駐馬店技師學院 楊 靜

黃連解毒流浸膏質(zhì)量控制的研究

■文/河南省駐馬店技師學院 楊 靜

為了建立黃連解毒流浸膏的質(zhì)量標準，試驗采用高效液相色譜法對黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷進行鑒別，并測定它們的含量。結(jié)果表明，黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷與其對照品保留時間一致。黃連解毒流浸膏中的小檗堿和黃芩苷的線性方程、精密度、穩(wěn)定性、回收率等均符合高效液相色譜法含量測定要求。結(jié)論：建立的質(zhì)量標準簡便可行，可用于黃連解毒流浸膏的質(zhì)量控制。

黃連解毒流浸膏；質(zhì)量標準；高效液相色譜法

近年來，國內(nèi)養(yǎng)豬生產(chǎn)中各種原因引起的高熱、敗血癥和毒血癥的發(fā)病率和死亡率越來越高。化學合成藥物的作用較為單一，多不能同時具備抗炎、退熱、抗菌和抗病毒的作用。黃連解毒湯由黃連、黃柏、黃芩和梔子等4味藥材組成[1]，是清熱解毒方劑的常用代表方劑，具有良好的清熱、苦寒和解毒的功能[2]，適用于畜禽的各種急性熱毒病和各種急性炎癥[3～9]。顆粒劑具有吸收快、療效好、易攜帶、久置不易霉變等優(yōu)點。本試驗通過對黃連解毒流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量[10～12]等進行了研究，初步制訂出了《黃連解毒流浸膏的質(zhì)量標準草案》。為黃連解毒顆粒劑制備做準備。

1 試驗儀器與材料

DHG-9141A型電熱恒溫干燥箱，Sartorius BS 110S精密分析天平，Waters高效液相色譜儀，黃芩苷原料藥(含量85.7%)，鹽酸小檗堿(含量98%)，自制3批連柏流浸膏，3批芩梔流浸膏，甲醇，無水甲酸。

2 試驗內(nèi)容

2.1 含量測定

2.1.1 方法學考察

2.1.1.1 對照品溶液制備 準確稱取黃芩苷對照品8mg，小檗堿對照品5mg，于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，濾過，即得。

2.1.1.2 供試品溶液制備方法 分別取比重為1.28～1.30的連柏流浸膏1mL、芩梔流浸膏2mL于燒杯中，加入50mL甲醇溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即分別得到連柏流浸膏的樣品溶液A和芩梔流浸膏的樣品溶液B。

取2mL連柏流浸膏的樣品溶液A與2mL芩梔流浸膏的樣品溶液B混合，即得到連柏流浸膏和芩梔流浸膏的混合樣品溶液A+B。進樣量均為20μL，按下述方法測定流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量。結(jié)果見表1。通過測定可發(fā)現(xiàn)，低濃度的流浸膏供試品溶液混合后，黃芩苷和小檗堿的含量基本沒有變化，可將兩浸膏供試品溶液混合同時測定小檗堿和黃芩苷的含量。

2.1.1.3 色譜條件 采用迪馬Diamonsil C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)；以0.46%甲酸-0.3%三乙胺的乙腈溶液(A)和0.46%甲酸-0.3%三乙胺的水溶液(B)為流動相；梯度洗脫：0～37min，A從10%線性升至32%，37～45min，A從32%線性升至50%保持5min后，將梯度變回A為10%，再保持5min；檢測波長：260nm；進樣量：20μL；流速：1.0mL/ min；柱溫：30℃。

表1 混合對小檗堿和黃芩苷含量的影響(n=3)

圖1 黃芩苷線性關(guān)系圖

圖2 小檗堿線性關(guān)系圖

表2 精密度試驗結(jié)果

表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果(n=6)

2.1.1.4 線性關(guān)系考察 將混合對照品溶液(黃芩苷含量為336μg/mL，小檗堿為200μg/mL)用甲醇逐級稀釋，分別得到5個濃度混合對照品溶液，每種濃度取20μL重復進樣3次，記錄3種成分的峰面積，利用峰面積Y對濃度x做直線回歸，求得黃芩苷和鹽酸小檗堿標準曲線方程。試驗結(jié)果見圖1和圖2。由圖可知，黃芩苷的相關(guān)系數(shù)R=0.9990，小檗堿的相關(guān)系數(shù)R=1，表明：黃芩苷在21～336μg/ mL，小檗堿在12.5～200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.1.5 精密度試驗 取含黃芩苷和小檗堿的混合對照品溶液連續(xù)進樣6次，測定峰面積，試驗結(jié)果見表5，計算相對黃芩苷的峰面積RSD為0.19%，小檗堿的峰面積RSD為0.08%，表明儀器精密度良好。

2.1.1.6 穩(wěn)定性試驗 分別取連柏流浸膏制成的供試品溶液2mL和芩梔流浸膏制成的供試品溶液2mL，將2種供試品溶液混合后，按0h、2h、4h、8h、12h、24h進樣，記錄色譜圖中峰面積并計算，試驗結(jié)果見表3，RSD均小于2，表明24h流浸膏中小檗堿和黃芩苷含量基本不變，樣品溶液性質(zhì)穩(wěn)定。

2.1.1.7 加樣回收率 取已知含量的連柏流浸膏1mL于100mL燒杯中，按照浸膏中小檗堿含量的80%、100%、120%加入含量為98%的小檗堿原料藥，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。每個水平配置3個平行樣品。

另取已知含量的芩梔流浸膏1mL，于100mL燒杯中，按照浸膏中黃芩苷含量的80%、100%、120%加入已知含量的黃芩苷原料藥，50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。每個水平配置3個平行樣品。

測定前將連柏流浸膏供試品溶液和芩梔供試品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色譜儀，測定小檗堿和黃芩苷的含量，計算回收率，試驗結(jié)果見表4，小檗堿的平均回收率為100.5%，黃芩苷為99.2%，符合回收率的要求。

表4 流浸膏加樣回收率試驗結(jié)果(n=3)

表5 流浸膏中小檗堿和黃芩苷的含量檢測結(jié)果

2.1.2 樣品含量檢測 取黃連40g、黃柏80g、黃芩80g、梔子60g(實驗室可做的最大量)，按照試驗一中最佳提取工藝制備3批黃連解毒流浸膏(比重為1.28～1.30)，取連柏流浸膏1mL于100mL燒杯中，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

另取芩梔流浸膏2mL于100mL燒杯中，加入50mL甲醇，超聲溶解，再取1mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定前將連柏流浸膏供試品溶液和芩梔供試品溶液1∶1混合后，再取20μL，注入高效液相色譜儀，測定小檗堿和黃芩苷的含量。試驗結(jié)果見表5，流浸膏中小檗堿和黃芩苷總的含量為6.00g和5.88g。

3 小結(jié)

本試驗所用含量測定方法線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性、回收率均良好，方法簡單，可以作為黃連解毒流浸膏的含量測定方法。■

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