枸櫞酸坦度螺酮對自發性高血壓大鼠血壓的影響及機制研究Δ

周 婭，吳建明，黃雪飛，李小莉，葉 云，3#（.西南醫科大學藥學院，四川瀘州 646000；.四川科瑞德制藥股份有限公司，四川瀘州 646000；3.西南醫科大學附屬醫院藥學部，四川瀘州 646000）

枸櫞酸坦度螺酮對自發性高血壓大鼠血壓的影響及機制研究Δ

周 婭1＊，吳建明1，黃雪飛1，李小莉2，葉 云1，3#（1.西南醫科大學藥學院，四川瀘州 646000；2.四川科瑞德制藥股份有限公司，四川瀘州 646000；3.西南醫科大學附屬醫院藥學部，四川瀘州 646000）

目的：研究枸櫞酸坦度螺酮（TC）對自發性高血壓大鼠（SHR）血壓的影響及機制。方法：將SHR隨機分為模型組、陽性對照組（苯磺酸左旋氨氯地平片，2.5 mg/kg）和TC高、中、低劑量組（TC膠囊，40、20、10 mg/kg），每組8只，另設8只正常大鼠為正常對照組，每天ig藥物1次，連續28 d。測量各組大鼠首次給藥前及給藥后0.5、1、1.5、2、3、4 h的收縮壓（SBP），另每給藥7 d測量1次1 h的SBP；末次給藥后檢測血清中一氧化氮（NO）含量，血漿中內皮素、腎素、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）和去甲腎上腺素（NE）含量。結果：單次給藥時，與模型組比較，陽性對照組和TC各劑量組SHR首次給藥后0.5、1 h時的SBP均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），之后僅陽性對照組和TC高劑量組的SBP明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；多次給藥時，與模型組比較，陽性對照組和TC高、中劑量組SHR給藥第7、14、28天的SBP均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組和TC高劑量組SHR血清中NO含量明顯升高，血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；與陽性對照組比較，TC各劑量組SHR血清中NO含量明顯降低，TC中劑量組SHR血漿中內皮素含量明顯升高（P＜0.05）。結論：TC可明顯降低SHR血壓，其機制可能與調節NO和內皮素釋放平衡，降低腎素、AngⅡ及NE含量有關。

枸櫞酸坦度螺酮；自發性高血壓大鼠；內皮功能

高血壓作為最常見的慢性病之一，是心腦血管疾病最主要的危險因素[1]。有報告顯示，2010年中國因高血壓死亡的患者共計204.3萬例，占死亡總數的24.6%[2]。目前，高血壓作為一種終身性、非治愈性疾病，其患者易產生焦慮、抑郁等負面情緒，進而影響高血壓的轉歸和預后[3]。盡管抗高血壓藥物種類繁多，但是能同時干預血壓又能兼顧患者情緒的藥物卻很少。

枸櫞酸坦度螺酮（Tandospirone citrate，TC）是一種5-羥色胺1A（5 serotonin 1A，5-HT1A）部分受體激動藥，可選擇性作用于海馬、杏仁核等大腦邊緣系統和中縫核的5-HT1A受體，從而發揮抗焦慮、抗抑郁等作用[4]。本研究旨在觀察TC對自發性高血壓大鼠（SHR）收縮壓（SBP）的影響及其對血管內皮功能和腎素-血管緊張素系統（RAS）中相關因子的影響，進而初步探討TC的降壓機制，為臨床用藥提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

BP-600A全自動無創血壓測量系統（成都泰盟軟件有限公司）；Elx808酶標儀（美國BioTek公司）；INFINITE 200酶標儀（瑞士Tecan公司）；Microfuge16高速離心機（美國貝克曼庫爾特公司）。

1.2 藥品與試劑

TC膠囊（四川科瑞德制藥股份有限公司，批號：161107，規格：每粒5 mg）；苯磺酸左旋氨氯地平片（施慧達藥業集團有限公司，批號：160831-2，規格：每片2.5 mg）；一氧化氮（NO）試劑盒（批號：20161229）和去甲腎上腺素（NE）、腎素、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（批號：20170113、20170113、20170113）均購于南京建成生物工程有限公司；內皮素ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號：59212119112）。

1.3 動物

SPF級9周齡SHR，♂，體質量180～200 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001；9周齡正常血壓WKY大鼠，♂，體質量250～280 g，由成都達碩實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（川）2015-130。本實驗已通過西南醫科大學動物實驗倫理委員會同意。

2 方法

2.1 分組與給藥

所有大鼠自由飲食飼養3 d后，均適應性測量血壓5次。平均血壓≥160 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）的SHR進入實驗分組，稱體質量后按隨機數字表法分為模型組（蒸餾水，1 mL/100 g）、陽性對照組（苯磺酸左旋氨氯地平片，2.5 mg/kg）和TC高、中、低劑量組（TC膠囊，40、20、10 mg/kg），每組8只；另取8只正常血壓WKY大鼠為正常對照組（蒸餾水，1 mL/100 g）。給藥劑量均按預實驗結果設定，各組大鼠每天ig相應藥物1次，連續28 d。

2.2 血壓測定

按全自動無創血壓測量系統使用要求操作，在安靜、溫暖、通風、熟悉的環境下分別測量每組大鼠首次給藥前及給藥后0.5、1、1.5、2、3、4 h的尾動脈SBP，作為單次給藥結果；另外，每給藥7 d測量1次1 h的尾動脈SBP，作為多次給藥結果。每只大鼠連續測量5次，取平均值，血壓測量均由同一人操作。

2.3 血清及血漿相關因子檢測

大鼠末次給藥后禁食、自由飲水24 h，稱體質量，以1%戊巴比妥鈉（30～40 mg/kg）麻醉，腹主動脈取血，分離血漿和血清。測定血清中NO含量和血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量，測定方法按照試劑盒要求操作。

2.4 統計學方法

3 結果

3.1 單次給藥對SBP的影響

與正常對照組比較，其余各組SHR的SBP明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組和TC各劑量組SHR首次給藥后0.5、1 h的SBP均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），之后僅陽性對照組和TC高劑量組的SBP明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與TC高劑量組比較，TC低、中劑量組SHR首次給藥后3、4 h的SBP明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與陽性對照組比較，TC低、中劑量組SHR首次給藥后1.5、2、3、4 h的SBP明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。各組大鼠單次給藥后不同時間SBP的測定結果見表1。

表1 各組大鼠單次給藥后不同時間SBP的測定結果（±s，n＝8，mmHg）Tab 1 Determination results of SBPof rats in different time after single administration in each group（±s，n＝8，mmHg）

表1 各組大鼠單次給藥后不同時間SBP的測定結果（±s，n＝8，mmHg）Tab 1 Determination results of SBPof rats in different time after single administration in each group（±s，n＝8，mmHg）

注：與正常對照組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與TC高劑量組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與陽性對照組比較，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01Note：vs.normal control group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.TC high-dose group，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；vs.positive control group，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

組別正常對照組模型組陽性對照組TC高劑量組TC中劑量組TC低劑量組4 h 102.20±9.06 181.01±21.22＊＊125.75±22.34##151.84±14.76#◆176.60±22.58▲◆◆190.02±13.25▲▲◆◆給藥前102.52±11.28 193.86±19.05＊＊180.70±13.50＊＊186.78±5.11＊＊185.77±13.98＊＊185.82±12.83＊＊給藥后時間0.5 h 104.63±8.57 189.60±13.70＊＊155.51±14.75#142.61±18.62##164.30±17.33#171.07±13.27#1 h 107.13±11.71 191.63±11.05＊＊147.98±25.78##148.73±24.01##157.88±21.96#170.89±14.80#1.5 h 109.51±18.26 184.34±6.50＊＊131.21±18.16##148.92±14.90#166.90±26.49◆◆163.74±8.71◆◆2 h 102.92±12.57 182.84±12.28＊＊134.29±15.17##145.24±16.27##165.53±28.31◆169.18±22.69▲◆◆3 h 109.68±13.36 181.86±24.10＊＊130.63±14.90#138.61±21.79#175.13±24.79▲◆◆169.26±18.58▲◆◆

3.2 多次給藥對SBP的影響

與正常對照組比較，模型組第7、14、21、28天的SBP均明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組和TC高、中劑量組SHR給藥第7、14、21天（除TC中劑量組外）與第28天的SBP均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與TC高劑量組比較，TC中劑量組SHR給藥第14、28天的SBP明顯升高（P＜0.01），TC低劑量組SHR給藥第7、28天的SBP明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與陽性對照組比較，TC高劑量組SHR給藥第14、21、28天的SBP差異無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠多次給藥不同時間SBP的測定結果見表2。

3.3 大鼠血清中NO含量的變化

與正常對照組比較，模型組大鼠血清中NO含量明顯降低（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組和TC高劑量組大鼠血清中NO含量明顯升高（P＜0.01）。與陽性對照組比較，TC高、中、低劑量組大鼠血清中NO含量明顯降低（P＜0.05）。各組大鼠血清中NO含量的測定結果見表3。

3.4 大鼠血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量的變化

表2 各組大鼠多次給藥不同時間SBP的測定結果（±s，n＝8，mmHg）Tab 2 Determination results of SBP of rats in different time after multiple administration in each group（±s，n＝8，mmHg）

表2 各組大鼠多次給藥不同時間SBP的測定結果（±s，n＝8，mmHg）Tab 2 Determination results of SBP of rats in different time after multiple administration in each group（±s，n＝8，mmHg）

注：與正常對照組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與TC高劑量組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與陽性對照組比較，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01Note：vs.normal control group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.TC high-dose group，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；vs.positive control group，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

組別 給藥時間第28天104.56±14.03 197.52±9.36＊＊154.99±17.82##147.70±18.90##180.22±6.60##▲▲◆◆194.16±3.94▲▲◆◆正常對照組模型組陽性對照組TC高劑量組TC中劑量組TC低劑量組第7天112.82±6.92 209.55±21.77＊＊148.66±18.30##172.76±15.95##◆177.34±18.06##◆◆188.79±8.20▲◆◆第14天109.53±9.94 193.42±1.72＊＊144.26±18.56##161.53±14.63##185.33±6.61#▲▲◆◆173.15±29.19◆第21天108.58±8.12 187.09±10.70＊＊140.19±20.50##161.46±12.31#171.14±16.98 170.86±13.52◆

與正常對照組比較，模型組大鼠血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組和TC高劑量組大鼠血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），TC中、低劑量組大鼠血漿中腎素和NE含量明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與陽性對照組比較，TC中劑量組大鼠血漿中內皮素含量明顯升高（P＜0.05），其余差異均無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠血漿中內皮素、腎素、AngⅡ和NE含量的測定結果見表3。

表3 各組大鼠血清中NO含量和血漿中內皮素、腎素、AngⅡ、NE含量的測定結果（±s，n＝8）Tab 3 Determination results of NO content in serum and endothelin，rennin，AngⅡ，NE contents in plasma of rats in each group（±s，n＝8）

表3 各組大鼠血清中NO含量和血漿中內皮素、腎素、AngⅡ、NE含量的測定結果（±s，n＝8）Tab 3 Determination results of NO content in serum and endothelin，rennin，AngⅡ，NE contents in plasma of rats in each group（±s，n＝8）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與TC高劑量組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與陽性對照組比較，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.TC high-dose group，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；vs.positive control group，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

組別正常對照組模型組陽性對照組TC高劑量組TC中劑量組TC低劑量組NE，pg/mL 4.00±2.03 7.10±2.12＊4.66±2.42#3.82±0.76##3.18±0.71##3.80±1.37#NO，μmol/L 67.16±18.96 32.05±12.54＊＊80.48±24.16##55.16±12.81##◆51.73±22.58◆46.35±20.30◆內皮素，pg/mL 3.75±2.70 7.48±2.28＊4.74±1.78#5.14±1.66#6.86±1.51◆5.84±2.80腎素，pg/mL 70.78±17.00 112.04±21.68＊＊74.17±18.28##87.12±17.08#85.39±20.37#81.13±11.21#AngⅡ，ng/mL 0.90±0.20 1.18±0.22＊0.67±0.38#0.78±0.30#0.84±0.37 1.01±0.30

4 討論

前期有研究顯示，在抗高血壓的基礎上加用坦度螺酮，降壓效果比單用抗高血壓藥更明顯[5]，應用5-HT1A受體激動藥能降低各種應激的心血管反應，使心動過緩、血壓下降[6]，激活5-HT1A可以導致交感神經抑制，大大地降低交感神經介導的心動過速，增加心輸出量[7]。這些結果均提示，應用坦度螺酮可能有抗高血壓的作用，但是并沒有單用坦度螺酮治療高血壓的研究。因此，筆者初步研究了TC單用對SHR血壓的影響，結果顯示，TC單用有降壓效果，且與劑量大小相關。

SHR是遺傳性高血壓動物模型，其發病機制、高血壓心血管并發癥、外周血管阻力變化等均與高血壓患者高度相似，是目前國內外公認的最接近于人類原發性高血壓的一種動物模型，可用于高血壓及其并發癥發病機制的研究[8]。

血管內皮細胞分泌一系列NO、內皮素等血管活性物質，發揮調節血管緊張性、抗血小板聚集、抑制平滑肌細胞增殖等功能。NO是體內最主要的血管舒張因子，內皮素是血管內皮細胞衍生的收縮因子，內皮素可反向調節NO的分泌，在血管內皮功能中，二者以平衡狀態存在[9]。本實驗結果顯示，TC可上調SHR血清中NO的釋放，降低血漿中內皮素的分泌，調節血管內皮功能平衡，改善高血壓進程中的血管內皮功能障礙。

血壓持續升高與RAS密切相關，腎素經腎靜脈進入血液，催化血漿中的Ang原轉變成AngⅠ，而AngⅠ在轉換酶的作用下降解為AngⅡ，使血壓升高[10]。有研究已經證實，交感神經系統對血壓有調節作用，交感神經興奮會促使NE釋放增加、增加腎素分泌，使AngⅡ生成增多、RAS活性進一步升高，形成高血壓惡性循環[11]。本實驗結果顯示，TC能顯著抑制RAS活性，降低SHR血漿內腎素、AngⅡ、NE含量，從而降低血壓，與文獻[12-13]報道一致。但這種作用是否與抑制交感神經活動相關，還需要進一步研究。

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Study on the Effect and Mechanism of Tandospirone Citrate on Blood Pressure in Spontaneously Hypertensive Rats

ZHOU Ya1，WU Jianming1，HUANG Xuefei1，LI Xiaoli2，YE Yun1，3（1.School of Pharmacy，Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China；2.Sichuan CREDIT Pharmaceutical Co.，Ltd.，Sichuan Luzhou 646000，China；3.Dept.of Pharmacy，the Affiliated Hospital of Southwest Medical University，Sichuan Luzhou 646000，China）

OBJECTIVE：To study the effect and mechanism of tandospirone citrate（TC）on blood pressure in spontaneously hypertensive rats（SHR）.METHODS：SHR were divided into model group，positive control group（Levamlodipine besylate tablets，2.5 mg/kg），TC high-dose，medium-dose，low-dose groups（TC capsules，40，20，10 mg/kg），8 in each group.Other 8 normal rats were chosen as normal control group.The rats were intragastrically administrated medicines，once a day，for 28 d.Systolic blood pressure（SBP）before first administration and after 0.5，1，1.5，2，3，4 h of administration in each group were measured，and SBP after 1 h of administration were measured once every 7 d.After last administration，nitric oxide（NO）content in serum，endothelin，renin，angiotensinⅡ（AngⅡ）and norepinephrine（NE）contents in plasma were detected.RESULTS：In single administration，compared with model group，SBP in 0.5，1 h in positive control group and TC groups after first administration were obviously decreased（P＜0.05 or P＜0.01），then SBP were obviously decreased only in positive control group and TC high-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）.In multiple administration，compared with model group，SBP in 7th，14th，28th day of administration in positive control group and TC high-dose，medium-dose groups were obviously decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with model group，NO content in serum in positive control group，TC high-dose group were obviously increased；endothelin，renin，AngⅡ and NE contents in plasma were obviously decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with positive control group，NO content in serum in TC groups was obviously decreased；endothelin，renin，AngⅡand NE contents in plasma were obviously increased in TC medium-dose group（P＜0.05）.CONCLUSIONS：TC can obviously decrease the blood pressure of SHR.The mechanism may be associated with adjusting the balance of NO and endothelin，and decreasing renin，AngⅡand NE contents.

Tandospirone citrate；Spontaneously hypertensive rats；Endothelial function

R965；R972+.4

A

1001-0408（2017）22-3083-04

2017-04-05

2017-06-01）

（編輯：鄒麗娟）

瀘州市人民政府-西南醫科大學科技戰略合作項目（No.2016LZXNYD-T03）；瀘州市人民政府-四川醫科大學科技戰略合作項目[No.2015LZCYD-S09（5/8）]

＊碩士研究生。研究方向：臨床藥學。E-mail：zhouya9210@163. com

#通信作者：主任藥師，教授，碩士生導師。研究方向：臨床藥學。E-mail：yeyun8622@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.16