人類白細胞抗原G的表達與慢性乙型肝炎相關性研究

張啟全，周冬青，朱春玲，劉成永

江蘇省徐州市傳染病醫院檢驗科，江蘇徐州 221004

人類白細胞抗原G的表達與慢性乙型肝炎相關性研究

張啟全，周冬青，朱春玲，劉成永

江蘇省徐州市傳染病醫院檢驗科，江蘇徐州 221004

目的 研究血清人類白細胞抗原-G（sHLA-G）水平與慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的相關性及對乙型肝炎轉歸的影響。方法 收集2014年8月—2016年12月徐州市傳染病醫院就診的100例慢性乙型肝炎病毒感染患者血清和臨床資料,用Elisa法檢測血清中HLA-G(sHLA G)水平,將測試結果結合臨床資料和其他實驗室結果,綜合分析和判斷的HLA-G(sHLA G)水平和相關的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染和乙型肝炎的影響結果。結果 100例樣本中有31例為陽性，陽性率為31%.陽性患者中HBV DNA>107 5例，ADA陽性20例，肝腫瘤標志物AFP陽性6例。將檢測結果結合患者臨床資料進行統計學分析，HBeAg陽性組與HBeAg陰性組比較,HLA-G表達陽性率，采用χ2檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。ALT異常患者與ALT正常患者，差異無統計學意義（P＞0.05）。HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例，與ADA陰性組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論HLA-G(sHLA G)水平和血清ALT,和免疫標記HBeAg沒有相關性，與血清ADA和肝臟腫瘤標記物及肝損傷的程度和疾病的發展密切相關,它對判斷疾病的發展具有重要意義。

人類白細胞抗原-G（HLA-G）；乙型肝炎病毒（HBV）；慢性乙型肝炎

人類白細胞抗原G基因屬于人類白細胞抗原的非經典Ⅰ類基因，有研究表明病毒可促使HLA-G分子在機體內高表達[1]，乙型肝炎病毒是一種噬肝病毒，不同人感染HBV的表現不盡相同，分別表現為隱性、急性或急性重型、慢性，還有一些患者進一步發展為肝硬化和肝細胞癌，乙型肝炎病毒通過誘導機體表達HLA-G分子，借助其與受體結合的直接免疫和誘導HLA-G+ Treg發揮的間接免疫作用，有效地逃避了宿主的免疫攻擊。為進一步明確人類白細胞抗原G的表達與乙型肝炎病毒感染的相關性及對疾病轉歸的影響，該研究方便收集了100例2014年8月—2016年12月徐州市傳染病醫院就診的HBV感染患者血清樣本,通過酶聯免疫吸附試驗（Elisa）方法檢測患者血清中HLA-G水平，結合患者臨床資料及其他實驗室資料進行分析，進一步揭示HLA-G在HBV感染過程中的致病機制，同時也為乙肝的診斷、個體化治療及預后評價提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取的100例樣本血清及臨床和其他臨床實驗室資料來源于徐州傳染病醫院就診100例患者，所有患者臨床診斷符合2010年 《傳染病防治指南標準》[2]，其中表面抗原攜帶者10例，慢性乙型肝炎50例，慢性乙型肝炎合并戊型肝炎的重疊感染2例，肝硬化患者15例，肝癌患者23例，采用試劑盒中的標準品作為對照，并參考標準曲線作為質控。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 HLA-G檢測試劑盒，酶標儀；肝功能檢測采用全自動生化分析儀，試劑由上海高蹤生物公司提供；乙型肝炎病毒兩對半定量試劑，采用全自動免疫分析儀，熒光定量PCR儀，HBV DNA檢測試劑。

1.2.2 操作方法

1.2.2.1 樣本采集，患者空腹抽取血液10 mL，分別留取肝功能，兩對半及HBV DNA檢測樣本及HLA-G檢測樣本。

1.2.2.2 酶聯免疫法（Elisa）檢測HLA-G取患者血液2 mL，離心后取血清作為待測樣本。分別設置標準孔、空白孔、待測樣品孔，嚴格按照說明書操作檢測患者血清中的HLA-G水平，用酶標儀測定的OD值，來作為判斷檢測檢測結果，以大于陽性對照的最低標準孔的值，判斷為檢測的陽性標本，將標準曲線作為質控標準。

1.2.2.3 其他檢測，肝功能、兩對半定量、HBV DNA熒光定量等操作嚴格按照說明書進行操作，并設有對照和質控標準。

1.3 統計方法

實驗數據使用SPSS 16.0統計學軟件進行統計學分析，采用例數（n）和百分比（%）表示計數資料，對率和構成比應用χ2檢驗進行比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HLA-G(Elisa)檢測結果

100例樣本中有31例為陽性，陽性率為31%，陽性患者中HBV DNA>1 075例，ADA陽性20例，肝腫瘤標志物AFP陽性6例。

2.2 結果分析

將檢測結果結合患者臨床資料進行統計學分析，HBeAg陽性組與HBeAg陰性組比較,HLA-G表達陽性率，采用χ2檢驗，差異無統計學意義（P＞0.01）。ALT異?；颊吲cALT正常患者，差異無統計學意義（P＞0.01）。HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較，，差異有統計學意義（P＜0.05）。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例，與ADA陰性組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）（見表1）。HLA-G陽性患者中有6例肝腫瘤標志物AFP陽性，另有5例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA>107。

表1 慢性HBV感染患者血清HLA-G檢測結果在ADA陽性組與ADA陰性組比較

3 討論

100例樣本中有31例患者HLA-G檢測為陽性，31例陽性患者中HBV DNA>107 5例，ADA陽性20例，肝腫瘤標志物AFP陽性6例。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例，與ADA陰性的比較，差異有統計學意義（P＜0.01）；HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較，差異有統計學意義（P＜0.05），另有6例肝癌患者肝腫瘤標志物AFP陽性。說明血清可溶性HLA-G（HLA-G）與肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒（HBV DNA）高載量，以及肝腫瘤標志物狀況有一定的相關性。ALT異常患者與ALT正常患者，差異無統計學意義（P＞0.05），E抗原(+)患者與E抗原(-)比較,差異無統計學意義（P>0.05），說明與患者的血清可溶性HLAG（HLA-G）與患者ALT水平，以及血清免疫標志物HBeAg無相關性,F.J.D Souto等[3]在肝組織HLA-G表達與慢性乙型肝炎病毒感染的臨床和組織病理關系一文，通過對免疫組織化學研究74例HBV感染者肝組織中HLA-G表達，有54例肝組織HLA-G出現陽性表達，研究結果表明HBV感染者肝組織中HLA-G表達與患者年齡、肝組織中HBsAg、HBeAg、HBcAg及肝組織纖維化程度和炎癥活動度均沒有相關性，而與患者HBV DNA含量相關，在HBV DNA>105肝組織中表達率較高；這與該次的研究結果基本一致，所不同的是該次的研究發現血清HLA-G表達在HBV DNA>107陽性率較高（31例陽性患者中HBV DNA>107 5例）。

在研究中還發現血清可溶性HLA-G（HLA-G）與肝功能中的ADA水平相關，目前相關報道尚不多見，35例ADA陽性的HBV感染患者有20例血清HLA-G陽性，且部分患者為病情較重的乙肝患者和乙、戊肝重疊感染，其血清中腺苷酸脫氨酶（ADA）陽性，與乙肝、乙、戊肝重疊感染造成的急性肝損傷有關，ADA是反映肝損傷的敏感指標，作為肝功能常規檢查項目之一，與谷氨酸氨基轉移酶等組成肝酶譜能較全面地反映肝臟病的酶學改變。如果是成倍的增高的情況的話，則說明肝臟損害嚴重，而與此同時患者血清中HLA-G檢測也是陽性，進一步說明血清HLA-G分子水平與肝損傷程度相關。乙、戊肝重疊感染亦是慢性乙型肝炎加重的因素，這部分患者機體HLA-G分子水平較高，與HLA-G抑制了機體的免疫反應，加之兩種病毒共同誘導機體表達HLA-G分子，血清中的HLA-G水平相對較高，反過來使病毒逃避了免疫監視和免疫攻擊，使病毒不斷入侵，對肝臟造成嚴重的損傷，因此下調乙肝患者機體的HLA-G分子水平，不但有利于清除病毒，還能避免患者發生戊肝重疊感染，具有重要的意義；由于HLA-G分子陽性高表達患者血清中ADA陽性占大多數，因此檢測患者肝功能的ADA具有重要的意義，ADA陽性的乙肝患者HLA-G分子水平較高，對這部分患者采取增強免疫的療法可能有助于抗病毒藥物更好地清除乙肝病毒。

人類白細胞抗原G(HLA-G)是人類組織相容復合體抗原Ⅰ類基因，是一個免疫耐受分子，許多研究表明病毒可以促使HLA-G分子在體內高度表達[4-6]，該研究通過對100例乙肝患者血清中HLA-G分子表達研究中發現，HLA-G在5例HBV DNA含量大于107以上患者中出現高度表達，HBV DNA含量較低或者陰性患者表達水平相對較低，說明HLA-G抑制了機體的免疫反應，使病毒逃避了免疫監視和免疫攻擊，從而使病毒不能夠被有效清除，不斷復制導致病毒載量不斷增高,隨著病毒含量增多又刺激機體產生大量的HLA-G分子,如此循環往復，使病毒難以清除,這與周林杰等[7]乙型肝炎病毒誘導HLA-G的表達與臨床意義一文中認為HLA-G參與了調節了HBV病毒免疫逃逸的結論一致；因此，如果能夠研究一種藥物下調機體的HLA-G分子的表達或阻斷HLA-G分子對免疫功能的影響，將這種藥物配合核苷類似物一起發揮協同作用，將會縮短患者抗病毒治療的療程，提高抗病毒藥物的效果，為患者抗病毒治療提供一種輔助藥物。

HLA-G分子不但在病毒感染中發揮其免疫抑制作用，而且在腫瘤免疫過程，抑制機體的免疫監視功能，許多研究表明HLA-G表達與卵巢癌、宮頸癌、肺癌、膀胱移動細胞癌等數許多種癌相關[8-11]，該次的研究還發現HLA-G分子在肝癌患者血清中出現高度表達，有學者研究認為肝癌患者約85%合并乙肝病毒（HBV）感染[12]，HBV感染使肝癌的發病率增加，該研究發現肝癌患者血清中HLA-G分子的表達高于其他患者和正常健康者，說明肝癌的發生與HLA-G分子的高度表達相關，因此檢測患者血清中HLA-G的水平對于預測乙型肝炎進展、判斷預后，早期干預以減少肝癌的發生具有一定的意義。

綜上所述，血清HLA-G與肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒（HBV DNA）高載量，以及肝腫瘤標志物狀況有一定的相關性;血清HLA-G是HBV持續感染的重要因素，在HBV感染所致的肝損傷過程中具有重要的作用，也是HBV感染引起肝腫瘤的促進因素。雖然HLA-G與乙型肝炎病毒感染有一定的相關性，但是乙型肝炎的致病機制受多方面的因素的影響，至今尚未完全明確，如能擴大樣本含量，研究病毒和宿主的關系，對HBV和HLA-G表達進行進一步探討，將有助于理解乙型肝炎的致病機制，為新的免疫療法提供依據(通過下調HLA-G表達為HBV感染患者提供免疫治療及減少肝癌的發生)。

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Research on Correlation between the Expression of Human Leucocyte Antigen G and Chronic Hepatitis B

ZHANG Qi-quan,ZHOU Dong-qing,ZHU Chun-ling,LIU Cheng-yong

Department of Clinical Laboratory,Xuzhou Infectious Disease Hospital,Xuzhou,Jiangsu Province,221004 China

ObjectiveTo research the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome.Methods100 cases of patients with chronic hepatitis B virus infection diagnosed in our hospital from August 2014 to December 2016 were selected and the HLA-G(sHLA G)in serum was tested by the Elisa method,and the testResultswere comprehensively analyzed and determined according to the clinical data and other laboratoryResults,and the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome were analyzed.ResultsOf the 100 patients,31 were positive and 31%positive.There were 5 5 patients with HBV DNA>10 patients with ADA positive and 6 patients with AFP positive for liver tumor markers. The positive rate of HLA-G expression in HBeAg positive group and HBeAg negative group was statistically significant(P> 0.05).The positive rate of HLA-G expression was not statistically significant(P>0.05).ALT abnormalities and normal ALT patients,the difference was not statistically significant(P>0.05).HBV DNA positive patients and HBV DNA negative patients,the difference was statistically significant(P<0.05).HLA-G positive patients with ADA positive in 20 cases,compared with ADA negative group,the difference was statistically significant(P<0.01).ConclusionThe HLA-G(sHLA G)level has no correlation with the serum ALT and immunolabelling HBeAg,but the serum ADA has a close correlation with the livertumor marker,liver injury degree and disease development,which is of important significance to determining the disease development.

Human leucocyte antigen G（HLA-G）;Hepatitis B virus（HBV）;Chronic hepatitis B

R4

A

1674-0742（2017）06（c）－0013-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.18.013

2017-03-22）

張啟全（1981-），男，安徽濉溪人，本科，主管技師，主要從事臨床醫學檢驗和傳染病研究工作。

周冬青（1970-），女，江蘇徐州人，碩士，副主任技師，主要從事病理學技術和傳染性疾病研究工作。